1、1，羅丹明類熒光探針的合成及對(duì)銅離子的檢測(cè)，01，分光光度法的靈敏度低，02，電化學(xué)法的選擇性差，03，原子吸收法在機(jī)器上高，分析成本高，04，高效液相色譜法在機(jī)器上高，分析成本高，05， 熒光光譜法具有簡(jiǎn)便、快速靈敏度高、選擇性好、成本低等優(yōu)點(diǎn)，研究背景、常見的測(cè)定方法，3，4，Cu2生物中的基本微量元素1； 使用生物體內(nèi)過剩攝取的銅也能產(chǎn)生毒性的熒光探針的方法檢測(cè)銅離子，特別是追蹤其在化學(xué)反應(yīng)和生命活動(dòng)中的作用過程具有重要意義。 研究背景，Cu2，5，背景知識(shí)-熒光探針典型的熒光探針由識(shí)別基(受體)、連接熒光團(tuán)和兩者的連接基組成。 受體與基質(zhì)結(jié)合后，會(huì)引起受體分子光的物理性質(zhì)的變化，具體來

2、說，熒光團(tuán)的部分突然消光或增強(qiáng)。 檢測(cè)原理，6，背景知識(shí)-熒光探針的機(jī)制順磁性熒光消光誘發(fā)電子轉(zhuǎn)移機(jī)制熒光共振能量傳遞激勵(lì)基締合物或激勵(lì)基配合物的形成，檢測(cè)原理，7，順磁性突發(fā)消光-淬滅型熒光探針，Cu2是d9結(jié)構(gòu)的順磁性離子，熒光團(tuán)系內(nèi)交叉能速度快，促進(jìn)系統(tǒng)間的飛躍，使激發(fā)單重狀態(tài)的熒光分子變化為三重狀態(tài)，這是熒光猝滅的主要原因，對(duì)熒光具有非常強(qiáng)的猝滅。 許多報(bào)道的銅離子熒光分子探針為熒光猝滅型。 由于探針識(shí)別對(duì)象時(shí)熒光猝滅不僅不利于高吞吐量信號(hào)輸出，而且其他猝滅過程也容易引起干擾，因此開發(fā)高靈敏度、高選擇性的熒光強(qiáng)化銅離子熒光分子探針具有重要意義。 檢測(cè)原理、8、原理：識(shí)別基的強(qiáng)電子供給能

3、力是，處于最高占有軌道(HOMO )上的電子轉(zhuǎn)移到激發(fā)狀態(tài)的熒光體被電子激發(fā)放出的HOMO，光激發(fā)的電子不能直接轉(zhuǎn)移到基底軌道而發(fā)光，光消失，但是識(shí)別基與被識(shí)別對(duì)象結(jié)合識(shí)別基的電子供給能力下降，受體的HOMO低于熒光體的HOMO，PET過程變?nèi)趸虿话l(fā)生，突觸發(fā)出熒光。 檢測(cè)原理、光感應(yīng)電子轉(zhuǎn)移機(jī)制(PET工藝)-熒光增強(qiáng)、“turn -on”型、9、實(shí)驗(yàn)部分、Cu2濃度逐漸增大，RA的熒光強(qiáng)度大幅度增加，最大發(fā)光波長(zhǎng)從565 nm紅轉(zhuǎn)移到571 nm，探針分子開環(huán)，共軛系大的熒光系統(tǒng)測(cè)定熒光光譜，10、1，時(shí)間對(duì)RA和Cu2反應(yīng)的影響，表示反應(yīng)開始后系熒光增強(qiáng)的速度快，1 h后熒光增強(qiáng)的速度慢

4、，2 h后熒光強(qiáng)度的變化小，幾乎形成平臺(tái)，RA和Cu2的反應(yīng)幾乎完成使RA和Cu2反應(yīng)2小時(shí)進(jìn)行了測(cè)試。 實(shí)驗(yàn)部分：11、二、溶劑體系對(duì)RA和Cu2反應(yīng)的影響，實(shí)驗(yàn)部分、純水和純乙腈中，Cu2與探針RA的相互作用不明顯，體系的熒光強(qiáng)度弱。 當(dāng)CH3CN/H2O的體積比在1B99B1之間時(shí)，探針RA能很好地識(shí)別Cu2。 其中，當(dāng)CH3CN/H2O的體積比為11時(shí)，如果增加熒光強(qiáng)度已接近最大的乙腈含量，系統(tǒng)的熒光強(qiáng)度不會(huì)降低，但增加有機(jī)試劑的使用量不利于環(huán)境和生物系的測(cè)定，因此選擇V(CH3CN) /V(H2O)=1:1進(jìn)行測(cè)定、12、實(shí)驗(yàn)部分、三、pH對(duì)RA的熒光光譜的影響是，探針RA在寬pH范

5、圍(4.110.5 )主要以螺環(huán)的形式存在，其水溶液表示幾乎沒有顏色、熒光，表示是對(duì)pH不敏感的熒光分子探針，PKA=。 本論文使用CH3CN/H2O (體積比1:1 )系統(tǒng)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。 在、13、實(shí)驗(yàn)部、四、離子選擇性、5Lmol/L RA的乙腈/水(體積比1:1 )溶液中分別加入50Lmol/L的不同種類的常見金屬離子，在室溫下反應(yīng)2 h。 所測(cè)定的金屬離子為Na、k、Mg2、Ca2、Mn2、Cd2、Cr3、Co2、Ni2、Ag、Pb2、Zn2、Fe3、Hg2和Cu2。除了Hg2具有小的熒光響應(yīng)外，常見的共存金屬離子不顯示熒光增強(qiáng)性能。 因此，RA是高選擇性熒光強(qiáng)化Cu2探針。 在、14、實(shí)驗(yàn)部分中，在6.510-82.910-6mol/L的范圍內(nèi)，Cu2的濃度與相對(duì)熒光強(qiáng)度(F=F-F0 )顯示出良好的線性關(guān)系，線性回歸方程式為 F=3.43c-0.07(c的單位為10-6mol/L )，相關(guān)系數(shù)R2=。 銅離子含量的測(cè)定是、的熒光發(fā)光波長(zhǎng)在可見區(qū)，能夠避免細(xì)胞內(nèi)自身的熒光或背景散射的影響。 激發(fā)波長(zhǎng)所需的能量低，避免了高能激發(fā)波長(zhǎng)對(duì)細(xì)胞的潛在傷害。 在水溶液中檢測(cè)Cu2的有效pH范圍很寬。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，RA熒光探針具有以下優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，選擇性好，16，End，1111122222222222006