1、第七章 中藥制劑的含量測(cè)定 （Content Determination）,概 述 一、含量測(cè)定的定義 中藥制劑的含量測(cè)定是指用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)方法或儀器分析方法對(duì)制劑中某種（些）有效成分或有效部位進(jìn)行的定量分析，并以其測(cè)定結(jié)果是否符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定來(lái)判斷藥品的優(yōu)劣。,二、含量測(cè)定方法,儀器分析法,化學(xué)分析法,滴定法 重量法 氮測(cè)定法 揮發(fā)油測(cè)定法 浸出物測(cè)定法,HPLC TLCS GC 分光光度法,第一節(jié) 可見(jiàn)-紫外分光光度法 （Ultraviolet and Visible Spectrophotometry） 一、定義 根據(jù)被測(cè)物質(zhì)在可見(jiàn)-紫外光的特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度對(duì)該物質(zhì)進(jìn)

2、行定性定量分析的方法稱可見(jiàn)-紫外分光光度法。,紫外分光光度計(jì)工作原理,紫外吸收光譜圖,二、特點(diǎn) 本法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，常用于中成藥含測(cè)。但本法不具分離功能，常用于總成分的測(cè)定。 三、定量分析的理論基礎(chǔ) 朗伯比爾定律 A = K C L A為吸收度 K為吸收系數(shù) C為溶液濃度 L為溶液厚度,四、藥典收載了三種測(cè)定方法 1.吸收系數(shù)法 2.對(duì)照品比較法 3.標(biāo)準(zhǔn)曲線法,消咳喘糖漿中總黃酮的測(cè)定,消咳喘糖漿中總黃酮的測(cè)定,消咳喘糖漿中總黃酮的測(cè)定,P230 問(wèn)題： 1.對(duì)照品溶液與供試品溶液的空白溶液是什么？有什么用？ 2.對(duì)照品是什么？待測(cè)物？關(guān)系是什么？ 3.如何測(cè)定含量？,作業(yè),維生素B1注

3、射液的含量測(cè)定,數(shù)據(jù)記錄,第二節(jié) 薄層掃描法 （ Thin Layer Chromatography Scan TLCS ） 一、定義 薄層掃描法（TLCS）系指用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中有紫外或可見(jiàn)吸收的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分值用于藥品定性定量分析的方法。,二、特點(diǎn) 1. 具有分離分析雙重功能 2. 可同時(shí)平行分離分析多個(gè)樣品 3. 流動(dòng)相用量少且選擇范圍寬、更換方便 4. 對(duì)樣品的預(yù)處理要求不高,三、儀器及其工作原理 1.薄層掃描儀 中國(guó)藥典采用雙波長(zhǎng)薄層掃描儀。常用的有島津CS-930型和CAMAG-型等。 2.掃描儀工作原理,3

4、.測(cè)定方式 （1）吸收法 適用于有紫外（可見(jiàn)）吸收的成分。分為反射法或透射法。常用反射法。 （2）熒光法 適用于有熒光性質(zhì)的成分，例如小檗堿等。該法僅采用反射法測(cè)定，其靈敏度比吸收法高。,4.測(cè)定波長(zhǎng) （1）單波長(zhǎng) 一般用于熒光測(cè)定法。對(duì)玻板和斑點(diǎn)的質(zhì)量要求較高。 （2）雙波長(zhǎng) 主要用于吸收測(cè)定法。測(cè)定時(shí)，樣品波長(zhǎng)（s）和參比波長(zhǎng)（R）依次掃描斑點(diǎn)，所測(cè)吸收度為A=As AR 樣品波長(zhǎng)（s）：即被測(cè)成分的max 參比波長(zhǎng)（R）：即被測(cè)成分的min或此波長(zhǎng)處無(wú)吸收。,雙波長(zhǎng)測(cè)定,5.光束掃描方式 （1）直線掃描 適用于規(guī)則的斑點(diǎn)，僅用于熒光測(cè)定法。 （2）鋸齒掃描,適用于不規(guī)則的斑點(diǎn)，測(cè)量誤差小

5、，被測(cè)成分積分值重現(xiàn)性好。,6.光源 （1）鎢燈（W） 供可見(jiàn)光（350800nm）測(cè)定，掃描有色成分的斑點(diǎn)。 （2）氘燈（D2） 供紫外光（200400nm）測(cè)定，掃描有紫外吸收的成分斑點(diǎn)。 （3）氙燈（Xe） 供熒光測(cè)定，發(fā)射不連續(xù)光譜，常用波長(zhǎng)為365nm。,四、含量測(cè)定方法（外標(biāo)法） 外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法，中國(guó)藥典僅采用外標(biāo)法。 1.原理 外標(biāo)法：供試品溶液和對(duì)照品溶液分別點(diǎn)加在同一塊薄層板上 2.類型 若標(biāo)準(zhǔn)曲線通過(guò)原點(diǎn)，采用外標(biāo)一點(diǎn)法。 若標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過(guò)原點(diǎn)，采用外標(biāo)兩點(diǎn)法。,外標(biāo)一點(diǎn)法的直線方程： C = F A F 為斜率 外標(biāo)兩點(diǎn)法的直線方程：,、,吸收系數(shù)法為什么僅用于紫外,3.

6、操作步驟 （1）對(duì)照品溶液的制備 （2）供試品溶液的制備 （3）點(diǎn)樣 一般要求使用市售薄層板。 外標(biāo)一點(diǎn)法：至少6個(gè)原點(diǎn) 對(duì)照品（R）2個(gè)（同一質(zhì)量）：2R 供試品（S）4個(gè)（同一質(zhì)量）分2組：2S1 2S2,外標(biāo)兩點(diǎn)法：至少8個(gè)原點(diǎn),對(duì)照品（R）4個(gè) 分2組 大質(zhì)量的2個(gè)：2R1 小質(zhì)量的2個(gè)：2R2 供試品（S）4個(gè)（同一質(zhì)量）分2組： 2S1 2S2,外標(biāo)兩點(diǎn)法,外標(biāo)一點(diǎn)法,（4）展開(kāi) （5）顯色定位 供試品色譜中待測(cè)斑點(diǎn)的比移值（Rf值）和光譜掃描得到的吸收光譜最大吸收與最小吸收應(yīng)與對(duì)照品相符，以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。 （6）掃描 應(yīng)沿展開(kāi)方向掃描，不得橫向掃描。 （7）含量計(jì)算 外標(biāo)

7、一點(diǎn)法 求出供試品被測(cè)成分（斑點(diǎn)）的質(zhì)量,求出供試品中被測(cè)成分的含量,含量（W/W） =,Ms X 稀釋倍數(shù),取樣量,含量（W/片） =,Ms X 稀釋倍數(shù) X 平均片重,取樣量,五、應(yīng)用實(shí)例 1.九分散中士的寧的含量測(cè)定 中國(guó)藥典規(guī)定按干燥品計(jì)每包含馬錢(qián)子以士的寧計(jì)應(yīng)為4.55.5mg。 供試品溶液的制備 取本品10包，混合研勻。精密稱取2g置具塞錐形瓶中，精密加氯仿20ml與濃氨試液1ml，輕輕搖勻，稱重，于室溫下放置24小時(shí)，再稱重，補(bǔ)足氯仿減失的重量，充分振搖，濾過(guò)。精密量取濾液10ml，用硫酸溶液（3300）分次提取，至生物堿提盡，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加濃氨試液使呈堿性，用

8、氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，殘?jiān)芯芗勇确?ml使溶解，作為供試品溶液。,薄層掃描法視頻,對(duì)照品溶液的制備 取士的寧對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。 測(cè)定法 吸取上述兩種溶液各5l，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液。（161214）的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：s=254nm ，R=325nm ，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。已知：AR19663.07， As20617.25，取樣量2.098g。 解答問(wèn)題 采用外標(biāo)一點(diǎn)法還是外標(biāo)兩點(diǎn)法？ 采用什么方法顯色定位

9、？ 計(jì)算每包藥品中馬錢(qián)子的含量。（保留兩位有效數(shù)字）,求出供試品斑點(diǎn)中士的寧的質(zhì)量 求出供試品中士的寧的含量,Ms = MR X =5 l x 0.4 g/ l x =2.1g,As,AR,19663.07,20617.25,含量（mg/包）=,Ms X 稀釋倍數(shù) X 標(biāo)示重量,取樣量,=,0.0021mg X 5ml X 20ml X 2.5g/包,0.005ml X 10ml X 2.098g,= 5.0（mg/包）,2.枳實(shí)導(dǎo)滯丸中橙皮苷的含量測(cè)定 中國(guó)藥典規(guī)定按干燥品計(jì)算，每1g含枳實(shí)以橙皮苷（C28H34O15） 計(jì)，不得少于20.0mg。 供試品溶液的制備 取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約

10、0.5g，精密稱定（0.5124g），置索氏提取器中，加甲醇90ml，加熱回流4 小時(shí)，趁熱濾過(guò)至100ml 量瓶中，用少量甲醇洗滌容器，洗液與濾液合并，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取5ml ，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。,對(duì)照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml 含0.05mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。 測(cè)定法 精密吸取供試品溶液5、對(duì)照品溶液2 與5 ，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距約3cm ，取出，晾干，噴以 1三氯化鋁的甲醇溶液，放置3 小時(shí)，在紫外光燈(365nm) 下定位。上機(jī)進(jìn)行熒光掃描，激發(fā)波長(zhǎng)：330nm ,線性掃描，測(cè)量供試品與對(duì)照品熒光強(qiáng)度的積分值（AR(2 ) =885.7 AR (5 ) =979.4 AS=835.6），計(jì)算，即得。,回答問(wèn)題： 本法采用的是吸收測(cè)定法還是熒光測(cè)定法？外標(biāo)一點(diǎn)法還是外標(biāo)兩點(diǎn)法？透射法還是反射法？直線掃描還是鋸齒掃描？光源是什么？ 求算枳實(shí)（橙皮苷）的含量（保留三位有效數(shù)字），并判斷是否符合藥典規(guī)定。,(V2-V1) (A-A1),(A2-A1),求算出斑點(diǎn)中橙皮苷的質(zhì)量 Ms = C +V1C,=, 0.05mg/ml +2ul 0.05mg/ml,(979.4 885.7),(5