1、揮發(fā)性脂肪酸的測(cè)定一般來說，碳原子數(shù)在10以下的脂肪酸大部分具有揮發(fā)性，并且易溶于水。在它們中間，隨著碳原子數(shù)的增加，揮發(fā)性逐漸下降。典型的揮發(fā)酸見附表5。附表5 低級(jí)脂肪酸的分子式及沸點(diǎn)名稱分子式沸點(diǎn)/名稱分子式沸點(diǎn)/甲酸乙酸丙酸HCOOHCH3COOHC2H5COOH100.8117.5140.0丁酸戊酸已酸C3H7COOHC4H9COOHC5H11COOH162.3185.5205.0揮發(fā)性脂肪酸易被微生物利用。在有機(jī)物的厭氧分解中，揮發(fā)性脂肪酸是作為生物代謝的中間或最終產(chǎn)物而存在。在厭氧發(fā)酵的液化產(chǎn)酸階段，這一類低級(jí)脂肪酸是這一階段的主要產(chǎn)物，其中以乙酸為主。在某種條件下，乙酸可以達(dá)到

2、該類酸總量的80%。在CH4形成過程中，甲酸和乙酸是形成甲烷的重要前體物。據(jù)研究，自然界有機(jī)物產(chǎn)生的CH4中大約有70%上由乙酸中的甲基原子團(tuán)形成的。丙酸、丁酸可以轉(zhuǎn)化成甲酸。有機(jī)酸過多往往反映出發(fā)酵池的病態(tài)。因此可以認(rèn)為，在微生物厭氧發(fā)酵過程中，揮發(fā)性脂肪酸不僅是一種不可缺少的營養(yǎng)成分，更重要的意義在于這類有機(jī)酸已是沼氣發(fā)酵研究有機(jī)物降解工藝條件優(yōu)劣的重要參數(shù)，在甲烷形成的研究和生產(chǎn)中，它們的含量也是重要的參數(shù)。在揮發(fā)性脂肪酸的總量測(cè)定中，是以乙酸作為基數(shù)進(jìn)行計(jì)算，除了要求測(cè)定總量外，對(duì)甲酸、乙酸等各種低級(jí)脂肪酸的分別定量分析也是十分重要的。1 C2C5揮發(fā)性脂肪酸的氣相色譜測(cè)定法2.5.1

3、.1 測(cè)定原理使用色譜儀上的氫火焰檢測(cè)器測(cè)定揮發(fā)性脂肪酸含量，其基本原理是：色譜柱分離后餾出的物質(zhì)被載氣載入檢測(cè)器離子室的噴嘴口，與燃燒氣氫氣相混合，并以空氣助燃?xì)膺M(jìn)行燃燒，以此為能源，將組分電離成離子數(shù)目相等的正離子和負(fù)離子（電子）。在離子室內(nèi)裝有收集極和底電極，因此離子在電場(chǎng)內(nèi)作定向流動(dòng)，形成離子流。該離子流被收集極收集后，經(jīng)過微電流放大器放大輸送給記錄儀得到信號(hào)，此信號(hào)的大小代表單位時(shí)間內(nèi)進(jìn)入檢測(cè)器火焰的組分含量。2.5.1.2 測(cè)定條件試劑設(shè)備 乙酸、丙酸、丁酸、戊酸混合標(biāo)準(zhǔn)液的配制。分別吸取乙酸（A.R.，相對(duì)密度1.045，含量99%）、丙酸（A.R.，相對(duì)密度0.9987，含量9

4、9.5%）、丁酸（A.R.，相對(duì)密度0.8097，含量99%）、戊酸（A.R.，相對(duì)密度0.934，含量100%）各25L于50mL容量瓶中，再加入2.5mL甲酸（A.R.，相對(duì)密度1.22，含量88%），最后用蒸餾水定容。其中乙酸、丁酸、戊酸的濃度分別為517L/L、497L/L、401L/L、467L/L。 6mol/ L硫酸的配制：將167mL濃硫酸（相對(duì)密度1.84）緩慢倒入833mL蒸餾水中。 甲酸：相對(duì)密度1.22，含量88%。 離心機(jī)400016000r/min。 氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器。 樣品預(yù)處理 用沼氣發(fā)酵液7mL加入2滴6mol/ L H2SO4使pH值降至3.5左右（

5、用pH試紙粗測(cè)），離心2030 min，取上層透明清液3mL，加入0.15 mL濃甲酸，最終pH值為2.0左右（控制在3.0以下）。 主要實(shí)驗(yàn)參數(shù) 條件一。固定相：GDX103+H3PO4，2%(6080目)；色譜柱：2m6mm；柱溫：180200；氣化室溫度：240；檢測(cè)溫度：210；進(jìn)樣量：2L；載氣流量：N2，50mL/ min；氫氣流量：50 mL/ min；空氣流量：600700 mL/ min；衰減：1/8。 條件二。色譜柱：2m3mm，不銹鋼柱，內(nèi)填國產(chǎn)GDX-401擔(dān)體，6080目；柱溫：210；載氣：N2，流率為90mL/ min；空氣流率：500 mL/ min；氫氣流率：

6、50 mL/ min；氣化室溫度：240；檢測(cè)溫度：210。 條件三。色譜柱：2m6mm，裝有以2%磷酸飽和的6080目GDX-103擔(dān)體；柱溫：180200；氣化室溫度：240；檢測(cè)溫度：210；進(jìn)樣量：2L；載氣流量：N2，50mL/ min；氫氣流量：50 mL/ min；空氣流量：600700 mL/ min； 條件四。色譜柱：2m2mm，玻璃柱，內(nèi)裝有10%的商品固定液FluoradFC431涂布的Supelcoport擔(dān)體，100200目；柱溫：130；氣化室溫度：220；檢測(cè)溫度：210；載氣流量：N2，40mL/ min。 定性與定量 定性。配制模擬標(biāo)準(zhǔn)樣品，用已知物質(zhì)的保留時(shí)

7、間對(duì)照被測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間進(jìn)行定性。 定量。用已知樣校正法進(jìn)行定量，其方法是配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣（與樣品組分一致），進(jìn)行色譜試驗(yàn)，測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)樣各組分的峰高（或峰面積），求出組分i的單位峰高（或峰面積）的組分含量或作出峰高和濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)樣品組分濃度變化不大時(shí)，可采用單位校正法。當(dāng)樣品組分濃度變化很大時(shí)，則需預(yù)先用校準(zhǔn)樣作出濃度和峰高或峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線，觀察其標(biāo)準(zhǔn)曲線是不是通過原點(diǎn)的直線，即是否呈線性。若呈線性，就可用單點(diǎn)校正法，按下面的公式計(jì)算：待測(cè)樣品濃度，L/L；待測(cè)樣品峰高，mm；標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，L/L；標(biāo)準(zhǔn)樣品峰高，mm；待測(cè)樣品體積+甲酸體積，mL；待測(cè)樣品體積，mL。2.5.1.3

8、方法的精度和注意事項(xiàng) 以GDX103+H3PO42%為固定相，比用GDX101 、PEGS、Porapak.N等作為固定相其保留時(shí)間短，且峰形對(duì)稱。 本法最小檢測(cè)量為4L/L，相對(duì)誤差為1.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.7%（以乙酸計(jì)）。 有機(jī)酸是一種強(qiáng)極性物質(zhì)，沸點(diǎn)較高，由于擔(dān)體對(duì)酸的吸附，常常引起酸峰拖尾和鬼峰的出現(xiàn)。因此，取有機(jī)酸直接進(jìn)樣測(cè)定時(shí)，為了抑制酸的吸附，可采取以下措施。 在樣品中加入一定量的濃甲酸（相對(duì)密度1.22，含量88%），使其甲酸加入量（體積）與樣品的體積比為5：100。甲酸是一種一元羧酸，離解常數(shù)（2.1110-4）大于其他任何一元羧酸，當(dāng)含有甲酸的樣品進(jìn)入固定相時(shí)，擔(dān)體表面

9、的吸附中心位置被甲酸暫時(shí)占據(jù)，這樣便抑制了C2C5酸被擔(dān)體的吸附。此外，甲酸在FID上響應(yīng)很低，故對(duì)其他組分的應(yīng)答影響不大。 酸的吸附還發(fā)生在接近進(jìn)樣口的地方，由于進(jìn)樣口常積累有碳質(zhì)沉積物，通常采用蒸餾水清洗進(jìn)樣口，并用1.5%磷酸-丙酮液來浸泡進(jìn)樣口，然后在約150的溫度下將進(jìn)樣口烘烤48h。 用1.5%磷酸-丙酮液來浸泡柱口玻璃毛。 在分析高濃度時(shí)，一定分析周期內(nèi)注射水或15%甲酸液來洗滌被柱子吸附的酸。 操作條件恒定以后，在進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)酸樣或樣品之前，用15%的甲酸液來沖洗柱子34次。 柱子使用壽命大約46個(gè)月，一旦發(fā)現(xiàn)色譜峰出現(xiàn)拖尾或重復(fù)性差，則必須更換柱。 盡管采取了一系列防止吸附的措施，

10、但柱子的吸附問題還是不可能完全解決，特別是對(duì)于4000L/L以上高濃度的酸樣，如何克服吸附問題還值得更進(jìn)一步研究。 當(dāng)檢測(cè)器的靈敏度顯著降低或更換新柱之后，重新做校正曲線。2揮發(fā)性脂肪酸總量的比色測(cè)定法2.5.2.1 測(cè)定原理含揮發(fā)性脂肪酸的樣液，在加熱的條件下，與酸性乙二醇作用生成酯，此酯與羧胺反應(yīng)，形成氧肟酸。在高鐵試劑存在下，氧肟酸轉(zhuǎn)化為高鐵氧肟酸的棕紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺在一個(gè)較大的范圍內(nèi)與反應(yīng)初始物揮發(fā)性脂肪酸的含量成正比，故可用比色法測(cè)定。2.5.2.2 測(cè)定方法 試劑 1：1硫酸：濃硫酸（相對(duì)密度1.84，C.P.）加到同體積蒸餾水中稀釋配制。 酸性乙二醇試劑：取30.0mL乙

11、二醇(C.P.)與4.0mL配制的稀硫酸混合。 4.5mol/L的氫氧化鈉：稱取180g氫氧化鈉(C.P.)溶于水中，冷后以蒸餾水稀釋至1L。 10%硫酸羥胺溶液：稱取硫酸羥胺(C.P.)10.0g，溶于100mL蒸餾水中。 羥胺試劑：量取20.0 mL4.5mol/L的氫氧化鈉，與5.0mL10%的硫酸羥胺相混合。 酸性氯化鐵試劑：將20.0g分析純FeCl3 6H2O溶于500mL水中，準(zhǔn)確加入20.0 mL濃硫酸，并以蒸餾水稀釋至1L。 測(cè)定程序 乙酸標(biāo)準(zhǔn)液的配制。精確稱取乙酸（分析純，相對(duì)密度1.045，含量99.0%）1.010g，以蒸餾水稀釋至100mL，此溶液含乙酸10mg/mL

12、。準(zhǔn)確吸取10 mg/mL乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0mL、5.0mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL、25.0mL、30.0mL，分別置于100.0mL容量瓶?jī)?nèi)，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，即得100L/L、500L/L、1000L/L、1500L/L、2000L/L、2500L/L、3000L/L的乙酸標(biāo)準(zhǔn)系列液。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。取相對(duì)密度1.045的乙酸（分析純）試劑，制成50mL/L、100 mL/L、500 mL/L、1000 mL/L、1500 mL/L、2500 mL/L、3000 mL/L的系列標(biāo)準(zhǔn)液，分別吸取0.5 mL分置于試管中（12.5cm1.5cm），每瓶中準(zhǔn)確加入，

13、于沸水浴中加熱3min，然后立即以冷水冷卻；再加入2.5mL羥胺試劑，充分搖勻，然后，充分振蕩混勻，以蒸餾水定容，用721型分光光度計(jì)以500nm波長(zhǎng)測(cè)定其光密度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以橫坐標(biāo)表示濃度值，縱坐標(biāo)表示光密度值。 樣品的測(cè)定。以400010000r/min的離心條件，制取沼氣發(fā)酵樣品澄清液，吸取0.5mL樣液置于試管中（12.5cm1.5cm），準(zhǔn)確加入1.7 mL酸性乙二醇試劑，充分混合，于沸水浴中加熱3min，應(yīng)避免試管與加熱器壁直接接觸。然后立即將試管置于冷水中冷卻。加入2.5mL羥胺試劑，并混勻，放置1min，然后全部倒進(jìn)盛有10mL酸性氯化鐵試劑的25mL容量瓶中，用蒸餾水定容

14、，并充分搖勻，靜置5min，用分光光度計(jì)以500nm波長(zhǎng)測(cè)定光密度。同樣操作做空白試驗(yàn)1份。 計(jì)算式中 C樣液光密度值相應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)曲線上揮發(fā)酸的含量，mg； V測(cè)定樣液體積，mL； 測(cè)定時(shí)液樣的稀釋倍數(shù)。2.5.2.3 注意事項(xiàng) 此方法是揮發(fā)性脂肪酸總量的經(jīng)驗(yàn)測(cè)定法，比蒸餾法測(cè)定更為簡(jiǎn)便、快速。除150mg/L以下的低濃度范圍外，其測(cè)定值相對(duì)誤差與氣相色譜法測(cè)定總值的相對(duì)誤差相近。 此法中的反應(yīng)是在嚴(yán)格的pH值條件下進(jìn)行的，最適pH值為1.60.1。pH值高于2.0時(shí)，色度加劇，pH值低于1.0時(shí)，顏色難以穩(wěn)定，易消失。 酸性己二醇試劑和羥胺試劑宜使用時(shí)配，也可在測(cè)定中配入。例如，以加入1.5m

15、L己二醇和0.2mL稀硫酸來代替1.7mL酸性己二醇試劑，以0.5mL硫酸羥胺和2.0mL4.5mol/L的氫氧化鈉來代替2.5mL羥胺試劑。 如果所做的空白測(cè)定含量酸量超過200mg/L時(shí)必須用氫氧化鈉蒸餾提純己二醇 。 酸性氯化鐵配制好后，應(yīng)靜置過夜，棄去沉淀。 必須嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，顯色反應(yīng)必須充分搖動(dòng)。 比色法沒揮發(fā)性脂肪酸總量，方便快速，對(duì)于特定樣品（特別是污水污泥體系）的準(zhǔn)確度較高，適合于沼氣發(fā)酵的常規(guī)分析。 3揮發(fā)性脂肪酸（VFA）的測(cè)定-碳酸氫鹽堿度和VFA分析的聯(lián)合滴定法 揮發(fā)性脂肪酸（VFA）是厭氧消化過程的重要中間產(chǎn)物，甲烷菌主要利用VFA形成甲烷，只有少部分甲烷由CO2

16、和H2生成。但CO2和H2的生成也經(jīng)過高分子有機(jī)物形成VFA的中間過程。由此看來，形成甲烷的過程離不開VFA的形成，但是VFA在厭氧反應(yīng)器中的積累能反映出甲烷菌的不活躍狀態(tài)或反應(yīng)器操作條件的惡化，較高的VFA（例如乙酸）濃度對(duì)甲烷菌有抑制作用。因此在反應(yīng)器運(yùn)行中，出水VFA用作重要的控制指標(biāo)。在VFA測(cè)定中，常進(jìn)行VFA總量測(cè)定，其單位以mmol/L或換算為按乙酸計(jì)，以單位mg/L表示。對(duì)VFA中各種低級(jí)脂肪酸（乙酸、丙酸）的分別定量分析也是重要的，有時(shí)常需要知道以COD表示的VFA的量（即VFA以單位mgCOD/L）表示，此時(shí)也需要知道VFA中各種有機(jī)酸的含量，因此它們換算為COD的換算系數(shù)

17、是不同的。VFA包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸以及它們的異構(gòu)體。在運(yùn)轉(zhuǎn)良好的高速厭氧反應(yīng)器中，VFA中乙酸可占有很高的比例，但當(dāng)反應(yīng)器運(yùn)行狀態(tài)不好時(shí)，丙、丁酸濃度會(huì)上升。（1）分析原理厭氧處理中會(huì)產(chǎn)生大量的CO2，在反應(yīng)器條件下（pH68之間），這些CO2主要以HCO3-形成存在。這是厭氧處理中最重要的pH緩沖物，由HCO3-或主要由HCO3-引起的堿度稱為碳酸氫鹽堿度。HCO3-產(chǎn)生最大緩沖能力的范圍約在pH67。如前所述，HCO3-可以通過滴定測(cè)定，但測(cè)定過程受到其它一些陰離子的干擾，其中發(fā)酵液中常含有的VFA的陰離子是影響碳酸氫鹽堿度的主要因素。為此，在荷蘭發(fā)展了碳酸氫鹽堿度和V

18、FA同時(shí)進(jìn)行測(cè)量的方法。其原理如下：水樣先以0.1000mol/L的HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至PH=3，在這一pH值下，所有HCO3-被完全轉(zhuǎn)化為H2CO3，VFA也幾乎完全地轉(zhuǎn)化為其非離子形式。此后，已被滴定至pH3的水樣在如圖所示的帶回流冷凝器的燒瓶中煮沸，所有轉(zhuǎn)化為H2CO3的HCO3-將分解為CO2和H2O，其中CO2完全由其中溢出，而VFA則因?yàn)橛谢亓骼淠鞫Ａ粼谒畼又?。然后水樣?.1000 mol/L的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH6.5，在此pH下，所有的VFA和其他弱酸將被轉(zhuǎn)化為其離子形式。由使用的HCl和NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的量，即可計(jì)算出碳酸鹽堿度和VFA的濃度。由此得到的結(jié)果更易于

19、判斷水樣在厭氧條件下的緩沖能力。（2）儀器1250ml帶磨口燒瓶，250ml燒杯；210ml半微量酸式滴定管；310ml半微量堿式滴定管；4回流冷凝器；5自動(dòng)電位滴定計(jì)；（3）試劑1無二氧化碳水 用于制備標(biāo)準(zhǔn)溶液及稀釋用的蒸餾水或去離子水，臨用前煮沸15min，冷卻至室溫。PH值應(yīng)大于6.0，電導(dǎo)率小于2s/cm。 2酚酞指示液 稱取1g酚酞溶于100ml 95%乙醇中，用0.1mol氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至出現(xiàn)淡紅色為止。 3甲基橙指示劑 稱取0.1g甲基橙溶于100ml蒸餾水中。 4碳酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（1/2 Na2CO3=0.0250 mol/L） 稱取1.392g(于250烘干4h)的無水碳

20、酸鈉(Na2CO3)，溶于少量無二氧化碳水中，移入1000ml容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻。貯于聚乙烯瓶中，保存時(shí)間不要超過一周。 5鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.0250 mol/L） 用分度吸管吸取2.1 ml濃鹽酸(=1.19g/ml)，并用蒸餾水稀釋至1000ml,此溶液濃度0.0250 mol/L。其準(zhǔn)確濃度按下法標(biāo)定： 用無分度吸管吸取25.00 ml碳酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于250 ml錐形瓶中，加無二氧化碳水稀釋至約100ml，加入3滴甲基橙指示液，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至由桔黃色剛變成桔紅色，記錄鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液用量。按下式計(jì)算其準(zhǔn)確度：C=0.025025.00/V 式中， c-鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（mol

21、/L）； V-鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用量（ml）。6氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.0250 mol/L）稱取60g氫氧化鈉，溶于50ml水中，冷卻后移入聚乙烯細(xì)口瓶中，蓋緊瓶蓋靜置4d以上。然后吸取上層澄清溶液1.4ml，用水稀釋至1000ml，此溶液約為001mol/L。其精確濃度可用鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)定，標(biāo)定方法如下： 取基準(zhǔn)試劑級(jí)鄰苯二甲酸氫鉀在105-110烘干至恒重。精確稱取三份，每份約0.1g（稱準(zhǔn)至0.0001g），分別置于250ml錐形瓶中，加入100ml水，稍加熱使之溶解。然后加入4滴酚酞指示劑，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡紅色不褪為止。記錄下氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量（ml），并按下式計(jì)算其濃度：C

22、= =G103/(204.22V) 式中， C-氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶濃度（mol/L）； V-氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶用量（ml）； G-鄰苯二甲酸氫鉀重量（g）； 204.22-苯二甲酸氫鉀(KH4C8H4O4)摩爾質(zhì)量(g/mol)。（4）操作步驟 按自動(dòng)電位計(jì)說明書安裝、校正好電位計(jì)，以蒸餾水清洗電極。 用移液管吸取過濾后的水樣Vml（其中含有VFA的量不超過3mmol），加入250ml燒杯中。 將樣品水溫調(diào)制（252），將盛有此樣品的250ml燒杯置于滴定臺(tái)上，投入長(zhǎng)約1.5cm的磁力攪拌棒，打開攪拌開關(guān)并調(diào)置一定攪拌強(qiáng)度，小心將電極放入燒杯的液面下。 如果此樣品水樣的pH高于6.5，則準(zhǔn)確調(diào)節(jié)至6.

23、5。 然后在自動(dòng)電位滴定計(jì)上滴定此水樣至pH3.0，消耗的0.1000mol/LHCl記作Zml。 將此水樣轉(zhuǎn)移至磨口錐形瓶中，加入沸石或玻璃珠少許，安裝好回流冷 凝器。打開冷卻水，加熱至沸騰并維持3min以上，撤離酒精燈并等待2min，將溶液移回250ml燒杯。 以NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH=6.5，消耗的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液記作Bml。（5）結(jié)果計(jì)算揮發(fā)酸（VFA）（mol/l）=(ZCa-BCb)103/V式中， Ca-標(biāo)準(zhǔn)HCl溶液的濃度（mol/L）； Cb-標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液的濃度（mol/L）。4揮發(fā)性脂肪酸（VFA）的測(cè)定-Q/YZJ10-03-02-20001、范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于工業(yè)

24、廢水厭氧消化過程中消化液中的揮發(fā)酸含量的測(cè)定。2、引用標(biāo)準(zhǔn)下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文，通過在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。本標(biāo)準(zhǔn)出版時(shí)，所示版本均有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會(huì)被修訂，使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性。GB/T 6682-1992分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（ISO3696-1978）GB12999-1992水質(zhì)采樣樣品保存規(guī)定。3、方法提要樣品中的乙酸、丙酸、丁酸等揮發(fā)性有機(jī)物在酸性條件下被蒸餾出來，餾出液經(jīng)回流以除去CO2、H2S、SO2等氣體，趁熱以酚酞為指示劑用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液滴定，結(jié)果以乙酸計(jì)算。4、試劑和材料除另有說明，本標(biāo)準(zhǔn)使用的試劑和水，均指分

25、析純?cè)噭┖虶B/T6682規(guī)定的三級(jí)水。4.1 25%硫酸溶液取250毫升分析純濃硫酸加入約700毫升蒸餾水中，然后加水至1升。4.2 酚酞指示劑稱取0.5克酚酞，溶于50ml 95%乙醇中，用水稀釋至100ml。4.3 0.1N氫氧化鈉溶液配制及標(biāo)定稱取60克氫氧化鈉溶于50ml水中，轉(zhuǎn)入150ml的聚乙烯瓶中，冷卻后，用裝有堿石灰管的橡皮塞塞緊，靜置24小時(shí)以上。吸取上層清液約7.5ml置于1000ml容量瓶中，用無二氧化碳水稀釋至標(biāo)線，搖勻。稱取在105-110度干燥過的基準(zhǔn)試劑級(jí)苯二甲酸氫鉀約0.5克（稱至0.0001g），置于250ml錐形瓶中，加無二氧化碳水100ml使之溶解，加入

26、4滴酚酞指示劑，用待標(biāo)定的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淺紅色為終點(diǎn)。同時(shí)用無二氧化碳水做空白滴定，按下式計(jì)算。氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（mol/L）=M1000/(V1-V0) 204.23式中：m稱取苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量（g）；V0滴定空白時(shí)所耗氧氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（ml）；V1滴定苯二甲酸氫鉀時(shí)所耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ml）；204.23苯二甲酸氫鉀的摩爾質(zhì)量（g/mol）。5、儀器和設(shè)備5.1 500毫升蒸餾裝置；5.2 500亳升磨口三角瓶；5.3 球形冷凝管；5.4 25毫升堿式滴定管。6、取樣按國家環(huán)保局頒布的環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范（地表水和“廢水”）部分規(guī)定采取有代表性的樣品采集后應(yīng)盡快測(cè)定或

27、加少量氫氧化鈉固定，置于4下保存。7、分析步驟7.1 蒸餾。取300毫升/V5（或適量水樣加蒸餾水稀釋至300毫升）水樣于500毫升的平底蒸餾瓶中，然后加入25毫升25%的硫酸溶液，再加入數(shù)粒玻璃珠，進(jìn)行蒸餾，接取200毫升蒸餾液。7.2 滴定。在另一電爐上加熱煮沸回流30分鐘，取下三角燒瓶，加3滴酚酞指示劑，趁熱用0.1N的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至微紅色30秒不褪色為終點(diǎn)。7.3同時(shí)按上述步驟用蒸餾水代替水樣作空白。8、分析結(jié)果計(jì)算揮發(fā)酸（VFA）（mg/l）= (V3-V4)N60103/V5式中：V3滴定樣品時(shí)所消耗的NaOH毫升數(shù)；V4滴定空白時(shí)所耗的NaOH毫升數(shù)；V5取樣量（ml）；

28、NNaOH溶液的濃度（mol/L）；60乙酸的分子量。9、注意事項(xiàng)9.1 在蒸餾過程中不能使水樣直接沖入蒸出液中，若蒸出則需重新取樣蒸餾。9.2 當(dāng)丁、戊酸含量高時(shí)，代表性不強(qiáng)，最好用氣相色譜法。VAF不能代表乙、丙、丁、戊的各種含量。10、報(bào)告10.1 當(dāng)兩次重復(fù)測(cè)定結(jié)果之差不大于算術(shù)平均值的10%時(shí)，取算術(shù)平均值報(bào)告、分析結(jié)果報(bào)告至0.1mg/L。10.2 報(bào)告應(yīng)包括以下內(nèi)容：a)有關(guān)樣品的全部資料，例如樣品的名稱、采樣地點(diǎn)、采樣日期、采樣時(shí)間等；b)本標(biāo)準(zhǔn)的代號(hào)；c)分析結(jié)果；d)測(cè)定中觀察到的任何異?，F(xiàn)象的細(xì)節(jié)及說明；e)分析人員的姓名及分析日期等。5 VFA的滴定法分析（1）原理 本

29、法原理是將廢水以磷酸酸化后，從中蒸發(fā)出揮發(fā)性脂肪酸，再以酚酞為指示劑用NaOH溶液滴定餾出液。廢水中的氨態(tài)氮可能對(duì)測(cè)定形成干擾，因此應(yīng)當(dāng)首先在堿性條件下蒸發(fā)出氨態(tài)氮，如果要同時(shí)測(cè)定氨態(tài)氮，以硼酸溶液吸收后滴定之。因此此法可用于氨態(tài)氮和VFA的聯(lián)合測(cè)定。（2）藥品10%NaOH溶液NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液，0.1000mol/l10%磷酸溶液，取70ml密度1.7mg/cm3的磷酸用水稀釋至1L。酚酞指示劑，1%的乙酸溶液。（3）測(cè)定步驟于蒸餾瓶中放入50200ml待測(cè)廢水，其VFA含量不超過30mmol。如水樣體積不足100ml，可以蒸餾水稀釋至100ml。放入幾滴酚酞指示劑。加入10%NaOH溶液，

30、使溶解呈堿性，并使NaOH略過量。開始蒸餾 ，至蒸餾瓶中剩余的液體為5060ml為止。用蒸餾水將蒸餾瓶剩余液體稀釋至原來的體積，用10ml10%的磷酸酸化，在接受瓶中放入10ml蒸餾水并使接受瓶與蒸餾瓶上的冷凝管連接，導(dǎo)入管應(yīng)浸入接受瓶的液面以下。蒸餾至瓶中液體為1520ml為止。待蒸餾瓶冷卻后，加入50ml蒸餾水再次蒸餾，至剩余1020ml液體為止。為了除去二氧化碳、硫化氫、二氧化硫等干擾物，可向餾出液中通入高純氮?dú)?015min，然后加入10滴酚酞，用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡粉色不消失為止。（4） 計(jì)算揮發(fā)性脂肪酸含量計(jì)算如下：VFA=V (NaOH)*C*1000/Vs (mmol/L)式中：V(NaOH)-滴定消耗的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml; c - 滴定消耗的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)確濃度，mol/L;揮發(fā)性脂肪酸(VFA)的測(cè)定揮發(fā)性脂肪酸是厭氧硝化過程的中間產(chǎn)物，甲烷菌主要利用VFA形成甲烷，只有少部分甲烷由CO2和H2生成。VFA在厭氧反應(yīng)器中的積累能反映出甲烷菌的不活躍狀態(tài)或反應(yīng)器操作條件的惡化，較高的VFA濃度對(duì)甲烷菌有抑制作用。VFA包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸及它們的異構(gòu)體，在運(yùn)轉(zhuǎn)良好的反應(yīng)器中，乙酸比例較高，反應(yīng)器不好時(shí)，甲酸、丙酸濃度升高。在VFA測(cè)定中，其單位常換算為按乙酸計(jì)，以mg/L表示。常用的測(cè)定方