1、主題1基因工程，如果你是育種專家，你能培養(yǎng)以下幾種“生物”嗎？準(zhǔn)備使用什么方法？這個定向變形基因的想法能實現(xiàn)嗎？經(jīng)過多年的努力，科學(xué)家終于在20世紀(jì)70年代創(chuàng)造了新技術(shù)基因工程，I .基因工程的概念，DNA重組技術(shù)，生物學(xué)，基因，DNA分子水平，定向變形生物，基因重組，基因工程，根據(jù)人們的欲望進行了嚴(yán)格的設(shè)計，通過體外DNA重組和基因改造等具有新遺傳特性的生物，創(chuàng)造了更適合人們需要的新生物類型和新基因改造因為基因工程是在DNA分子水平設(shè)計和制造的。也稱為DNA重組技術(shù)。1.1 DNA重組技術(shù)的基本工具，三種基本工具，剪刀，針線，卡車，限制性核酸內(nèi)切酶，DNA結(jié)合酶，載體，問題討論：普通棉花抗蟲

2、棉，基因工程抗蟲棉從蘇云金桿菌細(xì)胞中提取抗蟲基因，主要階段2:抗蟲基因和DNA“縫合”，核心階段3:抗蟲基因?qū)γ藁?xì)胞，“分子手術(shù)刀”，限制性核酸內(nèi)切酶，“分子縫合”，DNA ，簡單地說：限制性內(nèi)切酶，分布：主要在原核生物中，你能猜出限制性內(nèi)切酶在原核生物中的作用是什么嗎？ii .基因工程工具，原核生物在自然中容易受到外源DNA的入侵，但生物在長期進化過程中形成了完善的防御機制，防止外部病原體的入侵。限制性內(nèi)切酶是細(xì)菌的防御工具。外來DNA入侵后，利用限制性酶切外源DNA，維持自身安全。因此，限制性酶在原核生物中主要作用是切割外源DNA，使其無力，從而保護自己。限制酶在原核生物中的作用t，磷酸

3、二酯鍵，A，2，作用特性：2，作用特性：識別特定核苷酸序列，切斷兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。具有特異性。一種限制性內(nèi)切酶一般只能識別一個特定的核苷酸序列，并能在特定的觸點處切割DNA分子。(1)限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀”，3，限制性酶識別序列，大部分限制性酶識別序列由6個核苷酸構(gòu)成，少數(shù)識別序列由4，5或8個核苷酸構(gòu)成，P7，2，限制性酶為什么不切割細(xì)菌本身的DNA呢？包含限制性酶的細(xì)胞或DNA分子沒有這種限制性酶，或者通過甲基化酶將甲基化酶轉(zhuǎn)移到識別序列的堿基上，從而防止限制性酶被切割的長期進化。細(xì)菌含有某種限制性內(nèi)切酶并不能阻止自己的DNA中斷，但可以防止外源DNA的入侵。限制酶識別的

4、序列，無論是6個堿基還是4個堿基，都能找到中軸(圖)，中軸兩側(cè)雙鏈DNA上的堿基進行對稱、重復(fù)的排列。限制酶識別的序列有什么特性？限制酶識別的序列的特性。中軸兩側(cè)雙鏈DNA中的堿基反向重復(fù)。ecor ，SMA ，3，限制性核酸內(nèi)切酶識別特定核苷酸序列的作用特征；(特異性)，3，限制性核酸內(nèi)切酶的特征：在特定部位的兩個核苷酸之間切開。(切線：磷酸二酯鍵)，T，A，A(特異性)，Sma，平端平頭端，4 .酶結(jié)果限制：ecor ，粘性末端，4。酶結(jié)果限制：ecor ，粘性末端，粘性末端，重復(fù)演示，ecor ，粘性末端，粘性末端，大腸桿菌(E.coli)的限制性酶ecor識別GAATTC序列，并在g和

5、a之間切開。什么是粘性末端？限制酶切的DNA單鏈節(jié)上附著幾個互相補充的核苷酸，稱為粘性末端。SMA 、平端平端、限制性酶SMA識別GGCCC序列并在g和c之間剪切。在平端，限制酶在識別序列的中心軸上切割時，所切割的兩個DNA單鏈的切口是扁平的，這樣的切口稱為平端。gaat TC.CTT AAG.gaat TC.CTT AAG.ecor ，gaat TC.CTT AAG.gaat TC.CTT AAG.混合不同來源的DNA片段，不連接同種來源的DNA片段，生物a基因片段，生物b基因片段，g aa TTC.CTT aa g.g aa TTC.CTT aa g.酶體，(1)限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)

6、刀”，4。作用結(jié)果：要產(chǎn)生粘性或平頭端，為了獲得特定性狀的基因需要用限制性內(nèi)切多少個切口？可以產(chǎn)生多少粘性(平)端？切割兩個切口，形成四個粘性(平)端。如果用同一種限制性內(nèi)切兩個不同的DNA，會發(fā)生什么？看起來你可以通過制造相同的粘性(扁平)端并粘合其端來合成重組的DNA分子。想法？(2)“分子縫合針” DNA結(jié)合酶，在：的作用下，將被切割的DNA片段結(jié)合成新的DNA。馬上讓脫氧核糖和磷酸連接起來。作用原理：通過限制酶切割的兩個核苷酸之間的磷酸二價鍵還原結(jié)合，粘性末端之間的間隙可以“縫合”。EcoliDNA結(jié)合酶或T4DNA結(jié)合酶，限制酶切割的兩個核苷酸之間的磷酸二酯結(jié)合恢復(fù)，T4 DNA結(jié)合

7、酶“縫合”平端之間的縫隙，但效率低下，T4DNA連接酶，類型：EcoliDNA連接酶，怎么了？DNA聚合酶，1)將單個核苷酸連接到現(xiàn)有核酸片段，形成磷酸二酯鍵，1)在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，2)以單個DNA鏈為模板，將單個核苷酸通過磷酸二聚DNA鏈連接到一個互補的DNA鏈，2) DNA雙鏈上的兩個縫隙載體所需條件：對1 2個或2個以上限制性酶體點受體細(xì)胞無害。引進基因在受體細(xì)胞中復(fù)制和表達，具有9335特定標(biāo)記基因，便于篩選。質(zhì)粒動植物病毒(3)噬菌體衍生物，如果目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能克隆或轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物有可預(yù)測的效果嗎？作為分子運輸車載體，如果沒有切割部位會怎么樣？霍亂菌有質(zhì)

8、粒多限制酶切點，你想用它作為分子運輸車嗎？目標(biāo)基因是否進入了受體細(xì)胞，如何知道？(最常用)，質(zhì)粒是一種簡單的、具有自我復(fù)制功能的雙鏈環(huán)DNA分子，獨立于細(xì)菌核DNA。，常用載體質(zhì)粒：克隆和插入目的基因一起克隆，切割部位，標(biāo)記基因的存在，用含有氨芐西林的培養(yǎng)基確認(rèn)，獨立于細(xì)菌核DNA的可自我復(fù)制的小環(huán)DNA分子，1)載體DNA必須至少有一個限制性酶的切割部位，以便將目的基因插入載體。插入目標(biāo)基因的這種限制酶的接觸必須超出質(zhì)粒本身所需的基因片段，才能通過插入目標(biāo)基因被禁用。(2)載體DNA具有自我復(fù)制功能，或整合在受體染色體DNA中，與染色體DNA的克隆一起復(fù)制。(。(3) DNA必須有標(biāo)記基因，以便重組后進行重組篩選。(4)載體DNA是安全的，不應(yīng)該傷害受體細(xì)胞，也不應(yīng)該進入受體細(xì)胞以外的其他生物細(xì)胞。(。(5)載體DNA分子適合提取及體外操作，太大操作困難。實際上，自然存在的質(zhì)粒DNA分子并沒有完全具備這些條件，需要人工轉(zhuǎn)化，以用于基因工程的操作。摘要，限制性內(nèi)切酶，主要是原核生物中特異性(識別序列)DNA分子，磷酸二酯結(jié)合產(chǎn)生粘滯端或扁平端的基因工程基本操作程序，1