1、a,1,臨床基因擴增實驗室的管理,泰興市第二人民醫(yī)院檢驗科 趙建平,a,2,實驗室管理,管理應該目標明確，減少不確定性和不必要的損失，通過預先設立的標準對工作進行及時的修改或者糾正。以求最快最好地達到預期的目的 各實驗室的管理包括各種規(guī)章制度、各種分析儀器的校準、維護、保養(yǎng)，檢驗項目的標準操作程序（SOP）、工作流程、生物安全、標本的采集、標識、保存、運送、驗收、檢測結(jié)果的記錄、檢驗人員的準入和培訓以及臨床和患者等方面的抱怨、緊急防范措施等等。,a,3,第一節(jié) 臨床基因擴增實驗室的設置,a,4,實驗室設置原則,目的：確?；驍U增實驗室的質(zhì)量和檢驗結(jié)果的準確性 原則：各區(qū)獨立 注意風向 因地制宜

2、 方便工作 功能區(qū)的設置： 1.試劑準備區(qū) 2.模板制備區(qū) 3.擴增區(qū) （產(chǎn)物分析區(qū)） 注：各區(qū)必須要有明確的標識。,a,5,工作流向,試劑準備區(qū) 模板制備區(qū) 擴增區(qū)（產(chǎn)物分析區(qū)） 注：各區(qū)之間應有傳遞窗，用于傳遞實驗過程中的物品。,a,6,各功能區(qū)內(nèi)設置相應的儀器和設備 模板制備區(qū)設生物安全柜 各功能區(qū)內(nèi)的任何物品不可移至其他功能區(qū) 原則： 各功能區(qū)互相獨立 設緩沖區(qū)，將各區(qū)域間完全分隔 各區(qū)物品專用,a,7,第二節(jié)臨床基因擴增實驗室的各種規(guī)章制度,a,8,實驗室內(nèi)務管理制度 實驗室人員配置及管理制度 生物防護與安全制度 實驗室廢棄物處理制度 實驗室清潔消毒制度 臨床標本的管理制度 實驗室記

3、錄的管理制度 質(zhì)量控制工作管理制度 抱怨制度 等等,a,9,實驗室內(nèi)務管理制度,非本室工作人員未經(jīng)允許不得進入實驗室（實驗室進出登記表） 各區(qū)用品不得混用 進入實驗室的人必須遵守實驗室單一流向的規(guī)定，禁止逆向走動。 每天了解儀器的運作情況及試劑使用情況 確保儀器整潔安全，試劑合格使用。 注意保持實驗室衛(wèi)生整潔，嚴禁在實驗室內(nèi)抽煙、吃零食等 下班前檢查門窗水電，節(jié)假日指定人負責檢查實驗室的儀器設備。,a,10,實驗室人員配置及管理制度,有經(jīng)驗的醫(yī)學檢驗專業(yè)人員 實驗室工作人員應該參加衛(wèi)生部或省臨檢中心舉辦的PCR技術培訓并取得合格證 在上崗前必須學習并且掌握PCR實驗管理文件、基因擴增技術的基本

4、原理、基因診斷項目的臨床意義及應用、生物防護的內(nèi)容以及意義。 嚴格遵守SOP文件的規(guī)定按照標準操作規(guī)程操作 注：建立工作人員檔案。,a,11,生物防護與安全制度,目的：保證實驗室、實驗人員和外部環(huán)境 的安全 標本的采集與標本運送過程中，標本容器應該完好無泄漏，處理標本時應穿工作服戴手套，當有標本破裂并泄漏于工作臺面時，立即用沾有10%次氯酸鈉紗布或者海綿覆蓋30分鐘，等試驗結(jié)束后，用75%酒精擦凈。最后用紫外燈照射30分鐘以上。 當試驗過程中手被銳器所刺破，立即脫下手套，擠壓傷處使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要時進行預防補救措施。 實驗室臺面在工作前后都要用10%次氯酸鈉擦凈，試驗結(jié)束后紫

5、外燈照射60分鐘。 注：涉及的表格由實驗室消毒登記表、紫外線消毒登記表。,a,12,實驗室廢棄物處理制度,目的：防止實驗室污染，維護實驗室清潔。 使用過的一次性消耗品（吸頭、離心管等）先放入10%次氯酸鈉溶液浸泡24小時后再放入黃色垃圾袋，使用過的未被標本污染的手套、鞋套等直接放入黃色垃圾袋（垃圾袋中所裝入的容量不超過其總?cè)萘康乃姆种?，交醫(yī)院集中處理 日常生活中的垃圾如紙屑按一般垃圾交醫(yī)院處理 注：涉及表格廢棄物處理登記表,a,13,實驗室儀器設備的管理制度,目的：保證基因擴增實驗室儀器設備得到妥善的管理，控制儀器設備良好的工作狀態(tài)。 實驗人員必須熟悉儀器性能方允許操作，嚴格遵守標準操作程

6、序，所有儀器須有專人負責，儀器使用前必須檢查是否完好，一旦發(fā)現(xiàn)問題及時向負責人反映，不得擅自拆裝。 注意保持儀器的衛(wèi)生清潔，非儀器操作人員應盡量少入。 定期校準和維護PCR儀、離心機、水浴箱、冰箱等儀器設備，并有記錄。 注：涉及表格儀器設備維護保養(yǎng)記錄表，冰箱溫度記錄表，設備校準記錄表，設備維修記錄表。,a,14,試劑管理制度,實驗室應根據(jù)工作需要定期提交試劑申請單，做到及時盤存清點。 所有試劑做到來源渠道正規(guī)，質(zhì)量保證。 實驗室應對試劑庫存定期檢查，不得用過期變質(zhì)的試劑。 試劑保存應嚴格按照規(guī)定存放，確保有效期內(nèi)能有效地使用，杜絕浪費。 試劑外借一律須經(jīng)實驗室負責人同意，劇毒試劑必須有專人保

7、存，并有明確使用登記。 易燃易爆試劑應分開存放，遠離火源和電源。,a,15,標本采集、驗收、保存制度,采集的容器 采集的量 如果是抗凝血抗凝劑的種類（不可使用肝素抗凝） 送檢的時間（一般兩小時內(nèi)） 如果容器破裂或者抗凝血的抗凝劑成分不對，標本的病人姓名性別等于檢驗單不符等其他原因，可拒收表格。在拒收標本上登記，同時填寫不合格標本處置單，并隨同申請單返送相應的科室，必要時電話告知相關科室醫(yī)生或護士。 全血標本保存24小時內(nèi)可放在4度左右冰箱內(nèi)，長期保存須分離出血清（血漿）保存于零下20度以下。 注：涉及表格接收標本記錄表、拒收標本記錄表、標本保存記錄表。,a,16,抱怨處理制度,患者對服務態(tài)度的

8、處理方式 接到抱怨后，由實驗室負責人責成相關人員向患者致歉，對患者提出的合理要求及時進行處理，調(diào)查事情的原委，根據(jù)調(diào)查結(jié)果對相關負責人進行處罰并記錄。 患者對結(jié)果準確性抱怨的處理方式 為患者展示原始實驗數(shù)據(jù)，向患者解釋相關試驗程序和可能的臨床情況，幫助患者解除疑慮。如果確有試驗結(jié)果不符合有效性要求或者出現(xiàn)錯誤，則應及時糾正錯誤，重新試驗以得到準確結(jié)果，同時向患者致歉，以爭取得其諒解，同時對責任人進行相應處罰并記錄。 醫(yī)生對檢測結(jié)果和臨床診斷的符合率抱怨的處理方式 針對醫(yī)生抱怨的檢查項目進行從實驗前到試驗后的全程調(diào)查，查找是否存在影響結(jié)果的因素并形成書面報告，對調(diào)查發(fā)現(xiàn)的問題進行針對性解決。 醫(yī)

9、生對結(jié)果發(fā)放時效性抱怨的解決方式 1.嚴格按承諾時間發(fā)放臨床報告 2.如有特殊情況及時與醫(yī)生做好溝通。 注：涉及表格抱怨登記表,a,17,第三節(jié)：臨床基因擴增實驗室操作指導書（SOP）,a,18,各種儀器設備的標準操作維護程序 （PCR擴增儀、離心機、干式恒溫器、生物安全柜、移液器、冰箱、可移動紫外線消毒車等。） 各種儀器設備標準校準程序 （溫度計、移液器、PCR擴增儀等） PCR標本唯一標識編號規(guī)則（120525B05） 臨床標本的采集及處理的標準操作程序 各種病原體擴增熒光檢測標準操作程序 室內(nèi)質(zhì)量控制、室間質(zhì)評標準操作程序,a,19,第四節(jié)：臨床基因擴增實驗室的質(zhì)量保證,a,20,臨床基

10、因擴增實驗室的室內(nèi)質(zhì)量控制,a,21,分析前的質(zhì)量控制,實驗室的正確設置 儀器設備的管理 試劑的質(zhì)量 一次性消耗品的質(zhì)量（ 離心管不含有PCR擴增抑制物品、帶漏芯吸頭也要達到相應的要求以免造成標本間的交叉污染） 人員的培訓 規(guī)范操作,a,22,分析中的質(zhì)量控制,核酸提取 1.標本制備最好在生物安全柜內(nèi)進行，可防止標本氣溶膠的擴散。 2.在實驗操作過程中要經(jīng)常更換手套，因為手套的污染很容易導致標本間的交叉污染，如打開裝有核酸模板樣本的離心管時，手套指尖很容易污染。 實驗過程中增設弱陽性質(zhì)控、陰性血清質(zhì)控空白管對照,a,23,弱陽性質(zhì)控常見的失控原因,1。核酸提取中的隨機誤差如核酸提取中的丟失、樣

11、本中擴增抑制物的殘留。 儀器的問題如擴增儀孔間溫度不均一、孔內(nèi)溫度與所示溫度不一致 試劑的問題如探針純度不夠、Taq酶的失活等,a,24,陰性質(zhì)控血清檢測結(jié)果為陽性的原因,實驗室以前擴增產(chǎn)物的污染 實驗操作所致標本間的交叉污染 擴增反應試劑的污染,a,25,空白管對照的種類,反應液空白管對照 試劑空白管（在整個實驗過程中開口放置于核酸提取的操作臺面區(qū)域內(nèi)3060分鐘，然后進行擴增在反應液空白管為陰性的情況下如果出現(xiàn)陽性提示可能出現(xiàn)實驗室污染。）,a,26,擴增產(chǎn)物分析,通過標準曲線對未知模板進行定量分析 1。根據(jù)試劑盒的要求先確定基本的基線和域值。 2.初步分析未知模板的定量結(jié)果，根據(jù)當時曲線的情況可適當調(diào)整域值。 3.查看此次實驗結(jié)果的斜率、截距、相關系數(shù)是否在合理范圍內(nèi)。查看空白管、弱陽性管、陰性質(zhì)控管、室內(nèi)質(zhì)控管結(jié)果是否在預知范圍內(nèi)，如果都在控，結(jié)果可報。,a,27,如何分析患者的測定結(jié)果,橫向分析如HBVDNA與乙肝兩對半比對 縱向分析與患者以往相同項目的檢測結(jié)果比對 弱陽性標本有典型擴增曲線但結(jié)果在檢測下限(把低值的標本再做一次，或者加大樣本量重做一次),a,28,室間質(zhì)評,a,29,室間質(zhì)評是實驗室質(zhì)量控制體系中重要部分，是保證患者