1、發(fā)布日期 20061113欄目化藥藥物評價化藥質(zhì)量控制標(biāo)題磷脂類產(chǎn)品中溶血磷脂的控制作者張震 陳海峰部門正文內(nèi)容審評四部審評八室 張震 陳海峰 磷脂是一類含有磷酸的脂類化合物，廣泛存在于自然界的動植物體內(nèi)，是生物膜的主要組成成分，并參與細(xì)胞膜對蛋白質(zhì)的識別和信號傳導(dǎo)。機體中主要含有兩大類磷脂，甘油磷脂和鞘磷脂。甘油磷脂以甘油為母體結(jié)構(gòu)，一般常見的磷脂類化合物如磷脂酰膽堿（PhosphatidylCholine，PC）、磷脂酰乙醇胺（Phosphatidyl Ethanolamine，PE）、磷脂酰絲氨酸（PS）、磷脂酰肌醇（PI）等皆屬于甘油磷脂；鞘磷脂以神經(jīng)鞘氨醇為母體構(gòu)成。1、磷脂的結(jié)構(gòu)

2、從結(jié)構(gòu)上分析，磷脂類化合物一般由具有強極性的親水性部分和1622個碳的脂肪酸疏水鏈構(gòu)成，脂肪酸主要包括軟脂酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸和花生四烯酸等。由于構(gòu)成磷脂的脂肪酸具有不同的長度和不飽和度，因而磷脂類產(chǎn)品皆為混合物。 磷脂類化合物在藥物制劑工業(yè)中應(yīng)用廣泛，可作為營養(yǎng)輸液劑中的活性成分，也是脂肪乳劑、脂質(zhì)體等靜脈制劑中常用的乳化劑。其中最常用的磷脂為卵磷脂。卵磷脂按其來源不同可分為蛋黃卵磷脂和大豆卵磷脂（又稱大豆磷脂）。卵磷脂的主要成分為磷脂酰膽堿，另外，還含有少量磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇等成分。蛋黃卵磷脂和大豆卵磷脂的區(qū)別在于磷脂結(jié)構(gòu)中脂肪酸的不飽和度不同，大豆磷脂具有

3、更高的不飽和度。卵磷脂的基本結(jié)構(gòu)如下： 2、溶血磷脂 溶血磷脂是磷脂的降解產(chǎn)物，由于最常用的磷脂類化合物為卵磷脂，因而溶血磷脂一般是指溶血卵磷脂，或稱溶血磷脂酰膽堿（Lyso-phosphatidylCholine，L-PC），此外，還有溶血磷脂酰乙醇胺等。 溶血磷脂是磷脂1位或2位酯鍵水解或酶解產(chǎn)生的單鏈脂肪酰磷脂衍生物。按磷脂酯鍵斷裂的方式不同，溶血磷脂可分為溶血磷脂2和溶血磷脂1。溶血磷脂是機體內(nèi)磷脂的正常代謝產(chǎn)物，體內(nèi)磷脂代謝產(chǎn)生溶血磷脂的過程由磷脂酶A1和磷脂酶A2催化。磷脂酶A1可催化甘油磷脂的第1位酯鍵斷裂，生成溶血磷脂2；而磷脂酶A2可催化甘油磷脂的第2位酯鍵斷裂，生成溶血磷脂

4、1。 在磷脂類產(chǎn)品的制備和貯藏過程中磷脂也會發(fā)生部分分解，生成溶血磷脂。正常情況下，由于化學(xué)位阻的原因，磷脂類產(chǎn)品中溶血磷脂1和溶血磷脂2的比例大約為1：9，即溶血磷脂2占絕大比例。溶血磷脂（溶血磷脂酰膽堿）的結(jié)構(gòu)如下： 溶血磷脂是一類具有較強表面活性的性質(zhì)，能使紅細(xì)胞及其他細(xì)胞膜破裂，引起溶血或細(xì)胞壞死。但在正常生理條件下，由于體內(nèi)磷脂酶的存在位置和存在數(shù)量受到嚴(yán)格控制，因而機體并不會受到傷害。體內(nèi)的溶血磷脂可通過磷脂酶B代謝脫去另一分子脂肪酸轉(zhuǎn)變?yōu)楦视土姿崮憠A，使其失去溶解細(xì)胞膜的作用。三、磷脂類產(chǎn)品中溶血磷脂的測定和控制 由于溶血磷脂的溶血或溶解細(xì)胞膜作用，因而除溶血磷脂類產(chǎn)品（可制成脂

5、質(zhì)體，為活性成分，用于治療動脈粥樣硬化）外，磷脂類產(chǎn)品中皆要對其中溶血磷脂的量進行嚴(yán)格控制。溶血磷脂的含量測定一般可采用HPLC法或TLC法。近年來，還發(fā)展了一些測定的新方法、新技術(shù)。 HPLC法是磷脂及溶血磷脂含量控制的常用方法。由于磷脂分子中同時含有親水和疏水部分，因而所表現(xiàn)出來的表面活性給磷脂的色譜分析帶來困難。另外，磷脂類化合物紫外吸收一般都較弱，加大了檢測難度。雖然近年來HPLC技術(shù)取得了較大進步，但磷脂類產(chǎn)品色譜分析的分辨率、準(zhǔn)確度和測定動力學(xué)問題仍不令人十分滿意。 采用HPLC法測定溶血磷脂的含量一般采用正相色譜法，多采用硅膠柱，以己烷/庚烷異丙醇系統(tǒng)為流動相，梯度洗脫，蒸發(fā)光散

6、射檢測器進行檢測。由于磷脂的表面活性，一般采用流動相或具有高極性的有機溶劑（如氯仿甲醇）來溶解樣品，較少使用水來溶解樣品。 TLC薄層掃描是測定磷脂和溶血磷脂含量的另一種可行方法。為了獲得滿意的結(jié)果，一般多采用二維TLC法或帶有自動掃描的多重顯層TLC法（Multiple Development TLC），另外，為提高測定的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度，應(yīng)盡可能采用高質(zhì)量的商業(yè)化薄層板。 31P-NMR法是近年來發(fā)展的磷脂含量測定的新方法。該方法可以在不將各種磷脂及溶血磷脂分離的情況下選擇性地測定各種磷脂的含量，具有較高的分辨率，能夠很好地鑒別和定量各種不同磷脂，是一種較有前途的磷脂含量測定方法，但由于核磁共振儀器價格較為昂貴，限制了該方法的廣泛應(yīng)用。 關(guān)于磷脂類產(chǎn)品中溶血磷脂的限度控制，目前尚未有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。一般要求在卵磷脂原料中將溶血磷脂酰膽堿的量控制在3.0或3.5以下。有時，當(dāng)卵磷脂純度級別較低，其中的磷脂酰乙醇胺的含量較高時，還需要對其中的溶血磷脂酰乙醇胺的量進行控制