1、腫瘤免疫細胞治療的臨床應(yīng)用，為什么要進行腫瘤免疫治療？ 細胞免疫效應(yīng)細胞毒性t細胞(CTL )腫瘤免疫的主要途徑是釋放毒性物質(zhì)，誘發(fā)靶細胞上的死亡受體，直接溶解靶細胞，分泌IFN-間接殺傷腫瘤細胞，在機體上發(fā)揮免疫監(jiān)視作用。 是自然殺傷細胞(NK )固有免疫的主要效應(yīng)細胞之一，是機體防御機制的一部分，不是MHC限制，而是無需調(diào)節(jié)宿主及其免疫功能。 作用類似于CTL，還可以分泌大量細胞因子調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng)。 樹突狀細胞(DC )等專業(yè)抗原可傳遞給細胞，輔助t、b細胞特異地參與殺傷腫瘤的過程。 免疫逃逸機制，在腫瘤發(fā)生時，通過免疫細胞治療，從根本上提高機體免疫功能，控制腫瘤的發(fā)展！ 免疫細胞治療通

2、過采集成體免疫細胞，達到在體外分離、激活、培養(yǎng)擴增或增加靶向性后回到患者體內(nèi)，殺死體內(nèi)腫瘤細胞，打破免疫耐受，激活、增強機體免疫能力的治療方法。 我們提供的免疫細胞，靜脈/灌注：局部注射用0.9%氯化鈉注射液稀釋的細胞制劑100ml :未稀釋的細胞制劑1ml，細胞來源的選擇原則，MHC的遺傳限制70年代R.M .金納澤等人在小鼠實驗中殺傷t細胞和目標細胞的MHC不一致就沒有殺傷作用MHC (主要組織相容性復合體)也被稱為HLA基因復合體。 位于動物或人的某對染色體的特定區(qū)域，呈高度多態(tài)性，只要沒有卵和雙胞胎，就很難存在MHC完全一致的個體。 在不同細胞表面表達，參與抗原呈遞，制約細胞之間的相互

3、識別和免疫應(yīng)答的誘導。 所有有核細胞表面表達MHC-系分子，MHC-系分子主要表達在APC表面。 DC、CTL細胞優(yōu)先選擇體外外周血來源的免疫細胞，NK的KIR-配體不匹配患者自身的NK由于功能不全，不能識別殺傷腫瘤細胞，影響臨床療效。 kir配體失配，異體NK細胞被活化、擴增。 由于非腫瘤組織缺乏激活NK細胞所需的配體，或者這些激活的配體在腫瘤和非腫瘤組織的表達上有差異，異基因反應(yīng)性NK細胞可以有效殺傷腫瘤，不損傷正常組織。 臍血來源的優(yōu)勢免疫原性低。 與患者的自體細胞相比，患者自身的免疫功能不影響體外分離和擴增效果細胞的數(shù)量。 (DC不能體外擴增) CIK的主要效應(yīng)細胞是CD3 CD56，

4、具有NK非MHC限制性特征。 DC、CIK細胞可根據(jù)患者情況，選擇臍帶血來源的免疫細胞。 NK細胞優(yōu)先來自體外外周血的免疫細胞。 免疫細胞治療原則、免疫細胞治療篩選標準、適應(yīng)證：應(yīng)用常規(guī)治療部分緩解患者治療后腫瘤完全消失，但有復發(fā)、轉(zhuǎn)移風險的傳統(tǒng)治療治療無效患者。 生物治療的效果與殘留病灶的大小成反比，殘留病灶越小，效果越禁忌癥： t淋巴細胞病變引起的腫瘤(NK細胞除外)。 由于晚期/腫瘤負荷大的患者惡性病質(zhì)嚴重的免疫抑制，疫苗不能誘導有效的抗腫瘤免疫者。 靶向性CTL適應(yīng)癥通過免疫組織化等方法檢查活檢或手術(shù)得到的腫瘤組織，MHC-系分子為陽性的患者。 如果患者不能獲得腫瘤組織，患者還沒有達到

5、晚期或惡性，可能會接受治療。 建議進行MHC-系的分子檢查。 停止化學療法和放射線治療后，末梢血白血球恢復到正常值或者接近正常值(使用白血球上升藥的正常值除外)。 靶向性CTL篩選腫瘤抗原治療CEA、CK19、PSA、AFP、PAP、SCC的血清檢測值異常：患者不需要相應(yīng)的腫瘤抗原免疫組織化檢測結(jié)果，可以直接接受靶向性CTL細胞治療。如果上述腫瘤標志物血清檢測值正常，患者就必須提供腫瘤組織免疫組織化檢測結(jié)果，并提供目標抗原靶。 免疫細胞的臨床應(yīng)用預處理、腫瘤患者的免疫耐受狀態(tài)對腫瘤特異性和非特異性細胞治療的臨床效果有很大影響。 預處理宿主可以糾正免疫抑制的微環(huán)境，提高細胞的免疫活性，延長細胞內(nèi)

6、的生存時間，最終達到最佳臨床治療效果。 淋巴細胞的減少可誘導機體自我穩(wěn)定增殖，新生的早期t細胞迅速分泌IFN，具有殺傷活性，以排斥腫瘤為媒介。 自我穩(wěn)定增殖恢復無力的CD8 T細胞的響應(yīng)能力。 預處理后，可去除生物抑制性細胞，減少內(nèi)源性淋巴細胞的各種調(diào)節(jié)性細胞因子，如IL-2、IL-7、IL-15、IL-21等競爭消耗，同時降低輸血免疫效果細胞的增殖激活閾值，提高殺傷活性。 目前備受關(guān)注的抑制細胞亞群CD4 CD25的調(diào)節(jié)性t細胞(Tregs )髓系異質(zhì)細胞(MDSCs )的預處理方案是非清髓性放射治療、化療研究吉西他濱降低MDSScs舒尼尼尼尼(索恩)能有效地轉(zhuǎn)移性腎癌患者體內(nèi)的MDSCs數(shù)

7、、免疫細胞的臨床應(yīng)用方案、單細胞治療方案CIK細胞療程： 11010/程，即10個細胞療程：靜脈注射治療方案： 2份、4份、1/隔NK細胞療程： 5109/療程，即10個細胞療程：靜脈注射療程： 2份、4份、1/隔日作為機體自然免疫的主要效果細胞，這里也用于識別、殺傷MHC-系分子顯示陰性的腫瘤細胞，控制感染靶向性CTL細胞(不推薦單獨應(yīng)用)療程： 2108/療程，即5個細胞療程：靜脈注射治療方案：選擇一次回或兩次回，主要可以殺傷、識別對MHC-系分子表達陽性的腫瘤細胞。 靶向性細胞治療療程內(nèi)細胞數(shù)相對較少，患者進行常規(guī)治療后，要在機體免疫功能相對穩(wěn)定的前提下開展，以最大限度地發(fā)揮療效。 DC

8、細胞(不推薦單獨應(yīng)用)療程：48106/療程，即48個細胞療程：腫瘤內(nèi)注射治療方案：12 106/次、1/周、4周對體表轉(zhuǎn)移性腫瘤患者，激活自身/供體t淋巴細胞，發(fā)揮抗腫瘤效果聯(lián)合治療方案(推薦) DC CIK CIK的效果細胞主要有CD3 CD8和CD3 CD56兩種，發(fā)揮主要功能的是CD3 CD56，該細胞僅占2030%。 為了提高CIK的功能，激活需要抗原呈遞的CD3 CD8細胞。 可以選擇直流聯(lián)合應(yīng)用程序。 PS的應(yīng)用必須放在PS之前。 NK靶向性CTL利用靶向性CTL識別殺傷MHC-系分子陽性的靶向細胞。 應(yīng)用NK的非MHC限制性特征，識別殺傷生物mhci系分子陰性細胞。 局部全身治

9、療路徑有體表轉(zhuǎn)移瘤的患者建議DC局部注射其他細胞的靜脈回輸應(yīng)用。 向有胸、腹腔惡性液體積存患者的DC局部注入其他細胞的靜脈回送應(yīng)用CIK、NK、CTL可以進行治療程序量以上的局部腔內(nèi)灌注靜脈回送。 建議在IL-2聯(lián)合應(yīng)用細胞治療的同時治療IL-2，調(diào)整患者的免疫功能，延長細胞體內(nèi)活性，提高殺傷腫瘤細胞的效率。 可以選擇靜脈注射的途徑，或直接將IL-2注入細胞懸濁液中，與細胞同時輸血。 首次應(yīng)用時，為了觀察患者對IL-2的耐受性，推薦劑量為50萬單位。如果患者沒有明顯的副作用和過敏反應(yīng)，在第二次細胞治療中，每次輸入細胞的同時，可以輸入100200萬單位的IL-2。 建議療程的間隔至少進行4個療程

10、以上的細胞治療。 期、期患者，建議以六個月為一周期治療。 期以后的患者，建議以3個月為一個周期進行治療。 處于病情進展期的患者，建議24周可以進行下一個周期的治療。 臨床治療時機的選擇，有利于手術(shù)患者術(shù)后、切口愈合后患者的腫瘤負荷顯著降低，發(fā)揮免疫治療效果。 去除體內(nèi)殘留的微小殘留病灶，預防復發(fā)、轉(zhuǎn)移。 迅速提高機體免疫功能，為患者爭取下一階段放射化療治療的最佳時期。 建議對CIK細胞進行廣泛治療，然后根據(jù)患者情況與其他細胞結(jié)合治療。 可以在放療患者放療結(jié)束后或放療期間的放療后破壞腫瘤基質(zhì)，有利于免疫細胞到達腫瘤部位。 放療可促進腫瘤細胞MHC-系分子的表達，有利于DC細胞抗原的識別、加工和提

11、示。 清除循環(huán)腫瘤細胞和放療中脫出的腫瘤細胞，預防復發(fā)、轉(zhuǎn)移。 化療患者可以在化療間隙進行細胞治療，例如化療后57天的骨髓抑制期，細胞治療后約57天可以進行下一周期的化療。 化療后，打破機體免疫耐受，降低Tregs等負面控制因子，有助于發(fā)揮免疫治療效果。 可以去除殘留的微小病灶，預防復發(fā)、轉(zhuǎn)移。 可以減輕化療的副作用。 對于不能或害怕化療的患者，可以單獨進行細胞治療。 去除腫瘤細胞，抑制病情發(fā)展。 改善機體免疫功能后，可根據(jù)患者情況，嘗試化療治療。 失去手術(shù)、放射治療、化療治療機會的晚期患者可以單獨進行細胞治療。 提高機體的免疫功能。 提高患者的生活質(zhì)量。 清除腫瘤細胞，控制病情發(fā)展，評價療效

12、，主要評價指標：完全緩解(CR )、部分緩解(PR )、穩(wěn)定(SD )、進展(PD )總生存期(OS )、無進展生存期(PFS )、治療失敗時間(TTF )的次要評價指標： KPS，QOL腫瘤相關(guān)抗原檢測： ce CK19等細胞免疫功能檢測： t細胞亞群： CD3、CD4、CD8 Treg:CD4 CD25 high、cd4cd25 highfoxp 3c ik:cd3c d56 NK:cd3-cd56細胞因子檢測：如TNF-、IFN-，在細胞治療上治療前輕輕搖動細胞制劑，避免劇烈振動。 因為細胞有抱團的特性，所以有可能形成微小的絮凝物(成塊的細胞)，可以用微彈和其他方法將其分開。 靜脈治療需

13、要輸血器。 治療前后需要沖洗0.9%氯化鈉注射液。 點滴時，先以20-30滴/分鐘的滴速慢慢地點滴10-15分鐘，觀察到患者沒有不舒服感后，可以以80-90滴/分鐘的滴速治療，建議每個細胞在30分鐘內(nèi)結(jié)束點滴。 細胞袋治療后必須低溫保存24小時，如果出現(xiàn)不良反應(yīng)，應(yīng)該立即將保存的細胞袋送到實驗室進行檢查。 末梢血采集的注意事項，通知了實驗室的人采血袋/肝素鈉抗凝固管的準備。 采血前4h內(nèi)不應(yīng)該吃富含高蛋白質(zhì)和脂肪的食物，要喝糖水，或吃點小飯，以免血液中含有過敏物質(zhì)。 采集時不輸液。 患者外周血白細胞數(shù)4109/L。 采集的外周血標本保存在28，避免振動，12小時內(nèi)由實驗室負責人運送。 采集量：

14、 CIK，DC:80100ml NK:50ml靶向性CTL:80150ml，臨床典型例，右肺門占位并腰椎轉(zhuǎn)移，右肺無張。 胸悶、心悸、咳嗽、咳痰，痰中有血、腰痛，長時間不能一動不動。 沒有進行放療、化療治療，病情惡化。 CIK細胞治療后：胸部壓迫感、腰痛比前逐漸減輕，座位時間比前延長，治療后25天復查CT。 肺癌晚期(靜脈注射)，肺癌骨轉(zhuǎn)移(靜脈注射)，病情介紹：患者男，77歲。左肺腺癌經(jīng)化療后病情較穩(wěn)定，無明顯臨床不舒服癥狀。 調(diào)查了CEA 11.8ng/ml，稍高一點，然后給與“伊利亞特奧沙利鉑”兩個周期的化療，再研究了CEA。 治療：給臍帶血CIK細胞3個療程。 治療后：探討CEA 5.

15、9ng/ml，較前明顯下降，接近正常范圍。 左肺鱗狀細胞癌(靜脈注射)，病情介紹：“咳嗽，咳痰4月馀”入院，胸部CT提示：左肺門占位； 病例學診斷：腺癌。 前后給予全身化療3個療程，治療前患者一般情況良好，無明顯不適，但影像學檢查未見明顯變化。 治療：給臍血CIK細胞1個療程。 治療后：治療后兩周復查胸部CT顯示病情較前好轉(zhuǎn)，結(jié)合主管醫(yī)生的意見認為與CIK細胞治療有關(guān)。 治療前、治療后原發(fā)性肝癌(靜脈注射)，病情介紹：患者男，61歲，慢性乙型肝炎20馀年，因“食欲不振、無力”入院。 住院時腹部CT和MRT均顯示肝內(nèi)多發(fā)結(jié)節(jié)影，分散分布于全肝，AFP持續(xù)上升，肝功能A/G一直保持在0.5，給予阿

16、德福韋和護肝治療，AFP沒有明顯降低，A/G沒有改善。 治療：治療臍帶血CIK細胞2個療程。 治療后：各指標明顯好轉(zhuǎn)，3月后恢復正常，但MRT復查，肝內(nèi)占據(jù)比以前明顯縮小，AFP恢復正常。 治療前后比較，卵巢癌肝轉(zhuǎn)移(靜脈注射)，病情介紹：患者女性，48歲。 診斷為卵巢癌和肝內(nèi)多發(fā)轉(zhuǎn)移。 CA125 1132U/。 給予“紫杉醇鉑”化療5個周期，化療后的再檢CT顯示肝內(nèi)病灶比以前縮小，無明顯變化。 CA125 2223.7U/ml比以前明顯上升，臨床癥狀反復。 患者拒絕繼續(xù)進行化療。 治療：給臍帶血CIK細胞1個療程。 治療后：患者腹痛、乏力感較前明顯減輕，飯量較前增加。 已檢查CA125 2

17、3.4U/ml并已正常。 轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤(靜脈局部)，病情介紹：患者女，84歲。 因“食道癌胃癌術(shù)后7月馀”入院。 前后給予3個療程的單劑化療，效果差，病情進展性惡化，相繼出現(xiàn)飲食困難、多發(fā)轉(zhuǎn)移、食道氣管瘀，為解決飲食問題，給予胃瘀術(shù)。 之后，由于患者體質(zhì)差，經(jīng)不起化療，所以給“替吉奧”口服化療，與臍帶血來源的CIK細胞治療合作控制病情。 住院時患者病情穩(wěn)定，一般情況尚可，KPS評分70分，體檢：左頸部4.2x2.5cm淋巴結(jié)，質(zhì)硬，無壓痛，活動差。 入院后對左頸部腫瘤進行射頻消融術(shù)，效果差，腫瘤較前增大。 食管癌多發(fā)轉(zhuǎn)移(靜脈局部)，治療：給CIK細胞治療1個療程的DC細胞靜脈注射1次，在DC細胞頸部腫瘤內(nèi)注射3次。 治療后：患者左頸部腫瘤比前縮小約1cm左右。 該患者前后給予CIK細胞治療9個療程，每次治療后生活質(zhì)量比以前提高，精神狀態(tài)比以前明顯好轉(zhuǎn)。 肺癌和胸腔積液(靜脈灌注)，治療前，患