1、.,1,南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院 顧光煜,全自動(dòng)生化分析儀 基本知識(shí)與工作原理,.,2,一、自動(dòng)生化分析儀的分類,根據(jù)反應(yīng)裝置： 連續(xù)流動(dòng)式、離心式和分立式 根據(jù)反應(yīng)介質(zhì)： 液相化學(xué)、干式化學(xué) 根據(jù)反應(yīng)通道： 單通道、多通道 根據(jù)自動(dòng)化程度： 全自動(dòng)、半自動(dòng) 根據(jù)儀器的復(fù)雜程度： 小型、中型和大型 根據(jù)分析系統(tǒng)試劑開(kāi)放程度： 封閉系統(tǒng)、開(kāi)放系統(tǒng),.,3,1.連續(xù)流動(dòng)式生化分析儀,比例泵 空氣分段 透析器 管道式，攜帶污染,.,4,.,5,2.離心式全自動(dòng)生化分析儀,幾乎“同步分析” 隨機(jī)任選式（早期的必須按項(xiàng)目順序） 比色杯人工清洗？（一次性）,.,6,3.分立式生化分析儀,目前使用生化分析

2、儀主要此種類型。 比色杯 袋式儀器可以自動(dòng)制作比色杯 比色杯可以兼作反應(yīng)杯 比色杯不能作流動(dòng)比色池（半自動(dòng)）,.,7,4.干式生化分析儀 干片分：擴(kuò)散層、試劑層、指示劑和支持層。 利用“反射光度法”和“差式電位法”檢測(cè)。 以液體樣品中的“水”為溶劑。 理論基礎(chǔ)：KubelkaMunk理論。,.,8,5.半自動(dòng)生化分析儀,光源（石英鹵素?zé)簦?常用“干涉濾光片”分光 微量流動(dòng)比色池。 終點(diǎn)法項(xiàng)目通常在“儀器”外孵育，時(shí)間和溫度的準(zhǔn)確性常影響測(cè)定結(jié)果。,.,9,例1 臨床上所指的封閉式全自動(dòng)生化分析儀主要是 A 質(zhì)控物封閉 B 試劑封閉 C 環(huán)境封閉 D 儀器封閉 E 技術(shù)人員封閉,.,10,例2

3、全自動(dòng)生化分析儀可分為小型、中型、大型，其依據(jù)是： A 單通道和多通道數(shù)量 B 儀器可測(cè)定項(xiàng)目的多少 C 測(cè)定程序可否改變 D 儀器的復(fù)雜程度、功能和單位時(shí)間測(cè)試數(shù)量 E 是否可以同步分析,.,11,例3 全自動(dòng)與半自動(dòng)生化分析儀共同之處為 A 取樣 B 加試劑混合 C 檢測(cè)波長(zhǎng) D 孵育反應(yīng) E 清洗系統(tǒng),.,12,例4 干化學(xué)式自動(dòng)生化分析儀所用的光學(xué)系統(tǒng)為 A 分光光度計(jì) B 原子吸光儀 C 反射比色計(jì) D 固定閃爍計(jì)數(shù)器 E 免疫比濁計(jì),.,13,例5 關(guān)于分立式全自動(dòng)生化分析儀的比色杯的闡述，錯(cuò)誤的是： A 比色杯可以是反應(yīng)杯 B 比色杯可以自動(dòng)制作 C 比色杯可以是流動(dòng)比色池 D

4、比色杯可以是石英玻璃 E 比色杯可以是硬質(zhì)塑料,.,14,二、自動(dòng)生化分析儀的安裝與準(zhǔn)備,1.工作環(huán)境 空間、電源（UPS)、避免直射陽(yáng)光、 環(huán)境溫度和濕度、電磁輻射、化學(xué)品。 2.水 蒸餾水、去離子水、反滲透水。 3.純水等級(jí)：一般二級(jí) 二級(jí)純水微生物含量： 最大每毫升菌落數(shù)103。,.,15,例6 臨床生化實(shí)驗(yàn)室一般采用NCCLS所規(guī)定的二級(jí)純水，其微生物菌落（CFU/ml)應(yīng)低于 A 1 B 10 C 100 D 1000 E 100000,.,16,例7 臨床生化實(shí)驗(yàn)室用水一般采用： A 一級(jí)水 B 二級(jí)水 C 三級(jí)水 D 次級(jí)水 E 自來(lái)水,.,17,三、全自動(dòng)生化分析儀 基本結(jié)構(gòu)及

5、工作原理,1.樣品系統(tǒng) 專用樣品杯和直接用采血試管 凝塊和氣泡檢出功能 自動(dòng)沖洗功能 樣品預(yù)稀釋、后稀釋、加倍、標(biāo)準(zhǔn)原液系列稀釋等不同的稀釋方式。,.,18,2.試劑系統(tǒng) 冷藏功能 液面感應(yīng)及氣泡檢出 雙試劑與多試劑 試劑瓶的防蒸發(fā)與死體積 試劑條碼,.,19,3.條形碼系統(tǒng) 三組成部分：掃描系統(tǒng)、信號(hào)整形、譯碼器 黑條白空相間的條碼符號(hào) 光電轉(zhuǎn)換元件 常用條碼類型：Code39, Code128等,.,20,4.反應(yīng)系統(tǒng) 4.1 反應(yīng)盤 4.2 混合裝置 多用特氟隆不沾涂層的攪拌棒 4.3 溫控裝置 理想的溫度波動(dòng)應(yīng)小于0.1 3種方式：空氣浴、水浴、恒溫液間接加熱 強(qiáng)生干化學(xué)儀用空氣浴恒溫

6、,.,21,5.清洗系統(tǒng) 一般先用堿性液沖洗、再用酸性液沖洗、最后用去離子水沖洗。 6.管路系統(tǒng) 管路系統(tǒng)的老化或長(zhǎng)期使用后反應(yīng)廢物的沉積阻塞常造成反應(yīng)結(jié)果的重復(fù)性差。,.,22,7.比色系統(tǒng) 7.1 光源 鹵素?zé)舨ㄩL(zhǎng)300800nm 氙燈 波長(zhǎng)285750nm 使用壽命1000h左右，光源能量對(duì)340nm影響最大。 7.2 比色杯 常用石英、硬質(zhì)玻璃、優(yōu)質(zhì)塑料 光徑0.50.7cm。,.,23,7.3 單色器 朗伯比爾定律 濾光片、棱鏡、光柵分光 多采用光柵分光 多采用后分光測(cè)量技術(shù) 光源 比色杯 單色光器 檢測(cè)器 7.4 檢測(cè)器 發(fā)光二極管 8 程序控制系統(tǒng),.,24,9. 攜帶污染 常規(guī)

7、清洗不能完全消除攜帶污染 9.1 常見(jiàn)原因 共用系統(tǒng) 保養(yǎng)不當(dāng)（污垢、老化） 清洗液使用不當(dāng) 排列順序不合理 9.2 計(jì)算 小于0.3%為正常 9.3 常見(jiàn)組合,.,25,例8 自動(dòng)生化分析儀比色分析常用的檢測(cè)器是 A 固定閃爍計(jì)數(shù)器 B 硒電池 C 鎳氫電池 D 二極管 E 光電倍增管,.,26,例9 自動(dòng)生化分析儀的光源能量降低對(duì)單色光影響最大的波長(zhǎng)是 A 340nm B 405nm C 450nm D 500nm E 630nm,.,27,例10 自動(dòng)生化分析儀清洗加樣針主要為了 A 提高分析精密度 B 提高分析準(zhǔn)確度 C 防止交叉污染 D 提高反應(yīng)速度 E 提高分析的靈敏度,.,28,

8、例11 大多數(shù)全自動(dòng)生化分析儀比色杯的光徑是 A 0.50.7cm B 0.81.0cm C 1.11.9cm D 2.03.9cm E 4.0cm,.,29,例12,.,30,例13,.,31,例14 全自動(dòng)生化分析儀比色杯的材料常采用 A 光學(xué)玻璃或一般塑料 B 普通玻璃或硬質(zhì)塑料 C 隔熱玻璃或普通塑料 D 石英玻璃或優(yōu)質(zhì)塑料 E 優(yōu)質(zhì)塑料或普通玻璃,.,32,例15 目前全自動(dòng)生化分析儀最常用的光柵分光方式為 A 前分光 B 中分光 C 后分光 D 前中后分光 E 前后分光,.,33,例16 干式生化分析儀保持恒溫的方式是 A 空氣式恒溫器加熱 B 水浴式循環(huán)直接加熱 C 恒溫液循環(huán)間

9、接加熱 D 金屬直接加熱 E 反應(yīng)液直接加熱,.,34,例17 全自動(dòng)生化分析儀的試劑與樣品的混合裝置類型為 A 攪拌棒 B 加溫 C 機(jī)械振蕩 D 加樣針 E 加混合液,.,35,例18 某實(shí)驗(yàn)室全自動(dòng)生化分析儀近兩天發(fā)現(xiàn)部分結(jié)果明顯不穩(wěn)定，儀器自檢正常，測(cè)定過(guò)程沒(méi)有錯(cuò)誤報(bào)警，如果是交叉污染因素，首先應(yīng)考慮為 A 清洗劑的類型是否正確 B 清洗用水是否符合要求 C 管路沖洗是否徹底 D 反應(yīng)杯是否需更新 E 用校準(zhǔn)品對(duì)儀器進(jìn)行重新校正。,.,36,例19 340nm波長(zhǎng)屬于 A 可見(jiàn)光 B 紫外光 C 紅外光 D 近紅外光 E 遠(yuǎn)紅外光,.,37,例20,.,38,例21,.,39,四、全自

10、動(dòng)生化分析儀常用分析技術(shù),1.光譜分析技術(shù) 單波長(zhǎng)、雙波長(zhǎng)甚至多波長(zhǎng) 主波長(zhǎng)，特有波長(zhǎng)；副波長(zhǎng)，為消除干擾而設(shè) 單波長(zhǎng)易受溶血、黃疸、脂濁的干擾；雙波長(zhǎng)可消除上述干擾，減少雜散光、噪音干擾 常用雙波長(zhǎng) 比濁 340/700nm； Hb 340/380；NADH 340/380、340/405； ALP 405/476；Trinder 520/600。,.,40,1.1 波長(zhǎng)選擇的三個(gè)條件 待測(cè)物質(zhì)的光吸收最大 吸收峰寬而鈍 常見(jiàn)干擾物在該波長(zhǎng)下光吸收最小 1.2 吸收光譜分析 Lambert-Beer定律,.,41,1.3 散射光譜分析 散射光譜分析法 光線通過(guò)溶液混懸顆粒后的光吸收或光散射程

11、度的定律方法。 透射比濁法 散射比濁法 目前，全自動(dòng)生化分析儀主要采用透射比濁法。,.,42,2.電化學(xué)分析技術(shù) 是利用物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)，測(cè)定化學(xué)電池的電位、電流或電量的變化的分析方法。 基本公式：能斯特（Nernst)方程。 測(cè)量電極與參比電極 K+電極 頡氨霉素；Na+ 玻璃電極；Cl- 銀氯化銀電極；CO2 氣敏電極,.,43,例22,.,44,例23,.,45,例24,.,46,例25,.,47,例26,.,48,例27,.,49,例28 鈉電極屬于 A 晶體電極 B 氣敏電極 C 玻璃電極 D 酶電極 E 膜電極,.,50,例29 很多分析儀都采用雙波長(zhǎng)或多波長(zhǎng)的光路技術(shù)，是為了減少

12、 A 試劑的干擾 B 樣品中黃疸、溶血、脂血的干擾 C 儀器光源的波動(dòng) D 批間差異 E 批內(nèi)差異,.,51,例30,.,52,例31,.,53,例32,.,54,五、全自動(dòng)生化分析儀常用測(cè)定項(xiàng)目 的反應(yīng)原理,終點(diǎn)分析法 連續(xù)監(jiān)測(cè)法 干化學(xué)分析法 電化學(xué)分析法,.,55,1. 常用分析方法 連續(xù)監(jiān)測(cè)法的定義 終點(diǎn)法定義 零級(jí)反應(yīng)期 一級(jí)反應(yīng)期,.,56,2. NAD(P)H系統(tǒng)指示的反應(yīng) 還原型NAD(P)H在340nm有吸收峰；氧化型NAD(P)則沒(méi)有。,.,57,2.1 利用NAD(P)HNAD，吸光度下降的： ALT AST LD-P UN K+酶法 TCO2酶法,.,58,2.2 利用

13、NADNAD(P)H，吸光度升高的： CK CK-MB TBA LD-L Glu-HK TBA,.,59,3. Trinder反應(yīng) Glu-GOD 肌苷肌氨酸氧化酶法 尿酸 GPO-PAP T-Ch,HDL/LDL-Ch,.,60,4.苯衍生物指示反應(yīng) ALP GGT NAG,.,61,5.免疫透射比濁法 型膠原 TnI Hs-CRP，LP(a) 尿微量白蛋白，前白蛋白 胱抑素C 載脂蛋白,.,62,6. 離子選擇電極法 K+ Na+ Cl- TCO2,.,63,7. 常見(jiàn)受溶血影響較大的項(xiàng)目 K+ LDH CK AST ALT Mg,.,64,8.終點(diǎn)法反應(yīng)的項(xiàng)目 Glu-GOD，肌苷肌氨酸

14、氧化酶法，尿酸，TG-GPO-PAP，T-Ch， 9.速率法反應(yīng)的項(xiàng)目 ALT，AST，ALP，GGT，TBA，CK,LD， Glu-HK，UN，NAG，,.,65,9.其他 9.1 反應(yīng)底物 ALT L丙氨酸-酮戊二酸 ALP 磷酸苯二鈉 9.2 用全血標(biāo)本：糖化血紅蛋白,.,66,例33,.,67,例34,.,68,例35,.,69,例36,.,70,例37,.,71,例38,.,72,例39,.,73,例40,.,74,例41,.,75,例42,.,76,例43,.,77,例44,.,78,例45,.,79,例46,.,80,例47 關(guān)于ALT測(cè)定中，敘述正確的是 A L-丙氨酸與-酮戊

15、二酸為反應(yīng)底物 B NADH在氧化還原反應(yīng)中起作用 C 第一步反應(yīng)中的L-丙氨酸將進(jìn)入下一步反應(yīng) D 在偶聯(lián)反應(yīng)中，生化儀將在455nm處檢測(cè)吸光度下降速率 E LD主要作用于第一步反應(yīng),.,81,例48 若遇到溶血標(biāo)本時(shí)，受影響較小的項(xiàng)目是 A LDL-C B LDH C CK D AST E ALT,.,82,例49 在下列反應(yīng)中，需要谷氨酸脫氫酶的是： A 酶速率法測(cè)定尿素 B 葡萄糖氧化酶法測(cè)定 C 肌苷酶法測(cè)定 D 尿酸酶法測(cè)定 E 膽固醇酶法測(cè)定,.,83,例50 血清前白蛋白測(cè)定，臨床上常用的方法是 A 溴甲酚綠法 B 凱氏定氮法 C 雙縮脲法 D 免疫比濁法 E 磺柳酸法,.,84,例51 酶法測(cè)定甘油三酯常用的方法是 A 終點(diǎn)法 B 速率法 C 免疫比濁法 D 化學(xué)修飾法 E 固定時(shí)間法,.,85,例52 自動(dòng)生化分析儀中連續(xù)監(jiān)測(cè)法的讀數(shù)方式 A 在一定的時(shí)間范圍內(nèi)連續(xù)讀各吸