1、2011春季學(xué)期,.,1,電泳分析血清蛋白電泳血清免疫固定電泳,何肖娟 南方醫(yī)科大學(xué) 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心,2011春季學(xué)期 19/4,.,2,電泳技術(shù),電泳：溶液中帶電粒子在電場(chǎng)中定向移動(dòng)的現(xiàn)象稱為電泳（electrophoresis）。 電泳技術(shù)是利用帶電粒子在電場(chǎng)作用下定向移動(dòng)的特性，對(duì)混合物組分進(jìn)行分離、純化和測(cè)定的一項(xiàng)技術(shù)。,2011春季學(xué)期 19/4,.,3,電泳的分類,按分離目的：分析電泳和制備電泳 按電場(chǎng)強(qiáng)度：常壓電泳和高壓電泳 按電泳媒介：自由電泳和區(qū)帶電泳 區(qū)帶電泳（按支持介質(zhì)）：淀粉凝膠電泳 濾紙電泳 醋酸纖維素薄膜電泳 瓊脂糖凝膠電泳 聚丙烯酰胺凝膠電泳 按

2、支持介質(zhì)形式：水平式電泳、垂直電泳 按緩沖液pH值：連續(xù)pH和不連續(xù)pH電泳,2011春季學(xué)期 19/4,.,4,臨床電泳項(xiàng)目,臨床上以瓊脂糖電泳法開(kāi)展的電泳項(xiàng)目： 血清蛋白電泳 免疫固定電泳 尿蛋白電泳 同工酶電泳 腦脊液寡克隆電泳 本周氏蛋白電泳 脂蛋白電泳,2011春季學(xué)期 19/4,.,5,血清蛋白電泳（SPE）,檢測(cè)蛋白質(zhì)水平病理改變的方法和手段。 主要用于肝病、腎病、自身免疫病、血液病、多發(fā)性骨髓瘤等蛋白質(zhì)紊亂疾病的診斷。 電泳圖譜不能直接對(duì)臨床疾病進(jìn)行確診，但可通過(guò)特征性圖譜對(duì)某些疾病進(jìn)行分類，評(píng)估疾病的進(jìn)程和活動(dòng)狀況，評(píng)價(jià)治療方案是否有效。,2011春季學(xué)期 19/4,.,6,

3、血清免疫固定電泳（IFE）,是一種包括瓊脂糖凝膠蛋白電泳和免疫沉淀兩個(gè)過(guò)程的操作，是免疫沉淀反應(yīng)的一種混合技術(shù)。 優(yōu)勢(shì)：將血清蛋白電泳、高分辯率、抗原-抗體特異性免疫反應(yīng)等有機(jī)結(jié)合，對(duì)蛋白進(jìn)行分離和定型，形象地觀察Ig的各類重鏈和輕鏈分型。,2011春季學(xué)期 19/4,.,7,血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳結(jié)果,2011春季學(xué)期 19/4,.,8,血清蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)、平均相對(duì)分子量、及正常含量,2011春季學(xué)期 19/4,.,9,正常血清蛋白質(zhì)電泳圖譜,2011春季學(xué)期 19/4,.,10,血清蛋白電泳區(qū)帶,白蛋白區(qū)帶：主要由白蛋白構(gòu)成。 1-球蛋白區(qū)帶： 1-抗胰蛋白酶、 1-脂蛋白、 1-酸性

4、糖蛋白、甲狀腺結(jié)合球蛋白、凝血酶原等。 2-球蛋白區(qū)帶： 2-巨球蛋白、結(jié)合珠蛋白、銅藍(lán)蛋白、 2-脂蛋白、紅細(xì)胞生成素等。 -球蛋白區(qū)帶：主要含鐵蛋白、-脂蛋白、補(bǔ)體C3、C4、2-微球蛋白等。 -球蛋白區(qū)帶含IgG、M、A、D、E免疫球蛋白。,2011春季學(xué)期 19/4,.,11,正常參考值,A：3250g/L(60.371.4%） 1：1040g/L（1.42.9%） 2：610g/L（7.211.3%） ：613g/L（8.112.7%） ：715g/L（8.716.0%）,2011春季學(xué)期 19/4,.,12,2011春季學(xué)期 19/4,.,13,2011春季學(xué)期 19/4,.,14

5、,臨床意義,1、M蛋白（異常免疫球蛋白）血癥： 在-球蛋白區(qū)、-球蛋白區(qū)或兩者之間，出現(xiàn)區(qū)帶細(xì)而濃，有時(shí)呈波浪狀，在光密度計(jì)掃描圖上呈尖陡高峰的M蛋白帶。 2、蛋白質(zhì)缺乏癥 3、腎病 4、急慢性炎癥 5、肝?。焊斡不霈F(xiàn)“-橋” 原發(fā)性肝癌在Alb與1-球蛋白之間出現(xiàn)一小的區(qū)帶，稱為甲胎蛋白帶。,2011春季學(xué)期 19/4,.,15,異常血清蛋白電泳圖譜及臨床分析,急性炎癥及應(yīng)激型：當(dāng)機(jī)體受到各種損傷或炎癥刺激時(shí)的病理現(xiàn)象。 主要特征： Alb減少或正常，1、2-球蛋白增高，-球蛋白增高不明顯，當(dāng)炎癥轉(zhuǎn)為慢性時(shí)，可明顯增加。 病理生理： Alb下降主要是由于蛋白分解亢進(jìn)所致,1和2-球蛋白增加

6、與急性時(shí)相反應(yīng)蛋白1糖蛋白增加有關(guān)，區(qū)帶減少是由于轉(zhuǎn)鐵蛋白分解代謝增加所致。新生兒由于結(jié)合珠蛋白合成功能不完全，當(dāng)有炎癥病灶時(shí)，2區(qū)帶無(wú)明顯增高，而1區(qū)帶可明顯增高。,2011春季學(xué)期 19/4,.,16,腎病型：由于腎小球受損引起低蛋白血癥，蛋白尿，高脂血癥以及全身性水腫。 主要特征： Alb明顯降低，1-球蛋白輕度增加，2-球蛋白明顯增加，-球蛋白降低、正常或增高。小兒類脂樣腎病時(shí)，-球蛋白可降低，有時(shí)可降低至零；成人腎病綜合癥時(shí)，-球蛋白通常增加，特別是狼瘡性腎病。 病理生理： Alb降低是由于腎小球?yàn)V過(guò)增加所致。1-球蛋白增加，主要是小分子量的1糖蛋白增加，可能是為了補(bǔ)償由于Alb降低

7、引起的低滲透壓，雖然1糖蛋白也大量丟失于尿中，但體內(nèi)合成量超過(guò)排泄量，故仍可增高。2-球蛋白明顯增加是由于2-球蛋白和低密度脂蛋白相對(duì)增加所致。球蛋白降低主要是分子量小的轉(zhuǎn)鐵蛋白排泄于尿中所致。-球蛋白降低主要是由于漏出于尿中及體內(nèi)分解亢進(jìn)所造成，而慢性腎炎、狼瘡性腎炎等-球蛋白增加，可能是由于免疫刺激，使IgG增加所致。,2011春季學(xué)期 19/4,.,17,彌漫性肝損傷型 主要特征： Alb明顯降低, 1-球蛋白在輕度時(shí)可略增加，但肝細(xì)胞破壞嚴(yán)重時(shí)，則1、2和球蛋白通常均降低，在膽汁郁積性肝炎時(shí)，2和球蛋白可增高，-球蛋白輕度或中度增高。 病理生理： Alb雖合成減少，但其半衰期長(zhǎng)，其濃度

8、減少多出現(xiàn)于發(fā)病后十天，隨病情恢復(fù)而至正常,若為慢性則逐漸減少,其減少程度與肝炎的嚴(yán)重程度相一致。1-球蛋白在肝炎初期，作為急性期反應(yīng)物質(zhì)常增加，而肝損傷嚴(yán)重時(shí)則降低，在致命的肝功能衰竭時(shí)，1-球蛋白可降低到很低水平。2-球蛋白的降低，可能是由于結(jié)合珠蛋白合成降低所致，但膽汁郁積性肝炎時(shí)，由于脂蛋白增加，可見(jiàn)到2-球蛋白部位增高，當(dāng)急性肝壞死時(shí)，2-球蛋白則明顯減少。球蛋白在肝炎早期幾乎無(wú)變化，當(dāng)肝細(xì)胞損傷嚴(yán)重時(shí)合成減少。幾乎所有肝臟疾病-球蛋白因合成亢進(jìn)均增高，其增加的范圍與疾病的嚴(yán)重程度相一致。,2011春季學(xué)期 19/4,.,18,肝硬化型 主要特征： Alb均有不同程度的降低，1、2和

9、球蛋白正?；蚪档停?G明顯增高且寬度增加，可見(jiàn)-橋。 病理生理： 肝細(xì)胞受損導(dǎo)致Alb明顯降低，-橋的出現(xiàn)與血清免疫球蛋白，特別是IgA、IgM、IgG同時(shí)增加有關(guān)，其中以IgA影響較大，當(dāng)IgA和IgM泳動(dòng)在和之間，使區(qū)帶與區(qū)帶融合而形成-橋。,2011春季學(xué)期 19/4,.,19,原發(fā)性肝癌 主要特征： 在Alb與1-球蛋白之間出現(xiàn)一小的區(qū)帶，稱為甲胎蛋白帶。 病理生理； 肝癌時(shí)，血清中的甲胎蛋白濃度為正常人的數(shù)十乃至數(shù)萬(wàn)倍。,2011春季學(xué)期 19/4,.,20,寬幅高-G血癥型（多株免疫球蛋白增高癥） 主要特征： -G的寬度明顯增加，呈寬幅高峰。 病理生理： 多株漿細(xì)胞以大致相同的速度

10、增殖，大量合成免疫球蛋白所致，呈多株性，若合并急性感染，則1、2明顯增高。,2011春季學(xué)期 19/4,.,21,M蛋白血癥（單株免疫球蛋白異常癥） 主要特征：M蛋白又叫異常免疫球蛋白，其區(qū)帶寬度與Alb帶大致相等或較其狹窄，常分布在2至慢-G部位。 病理生理： M蛋白是由某一細(xì)胞株分泌大量結(jié)構(gòu)相同、電泳遷移率一致的蛋白。多發(fā)性骨髓瘤及原發(fā)性巨球蛋白血癥時(shí)，M蛋白以外的其他免疫球蛋白明顯降低，其可能是由于M蛋白大量消耗氨基酸，致使其他免疫球蛋白相對(duì)合成不足，以及M蛋白代謝亢進(jìn)，其他免疫球蛋白的分解代謝也隨之增加，故而含量降低。,2011春季學(xué)期 19/4,.,22,雙白蛋白血癥型,主要特征：在

11、白蛋白區(qū)有兩個(gè)區(qū)帶，光密度掃描出現(xiàn)雙峰，呈剪刀狀。 產(chǎn)生原因：雙白蛋白血癥分為持久型和暫時(shí)型兩種。持久型主要是一種家族性血清蛋白異常的疾病，極少見(jiàn)，為常染色體不完全顯性遺傳； 而暫時(shí)型主要是指腎功能不全的患者在治療期間使用大劑量的-內(nèi)酰胺類抗生素，可形成快泳動(dòng)性的白蛋白成分，治療中斷即逐漸消失。,2011春季學(xué)期 19/4,.,23,先天性白蛋白缺陷型：,主要特征：由于血清白蛋白的顯著降低，血清總蛋白也隨之降低，1、2球蛋白明顯增高，球蛋白也增高。 嚴(yán);重?zé)o白蛋白血癥時(shí)，白蛋白有時(shí)可降為零。 產(chǎn)生原因：本病是極少見(jiàn)的先天性疾病，可能由于肝細(xì)胞內(nèi)白蛋白合成功能遺傳性缺陷或明顯低下所致。該病患者的白蛋白含量盡管只有正常人的0.05%， 而其血漿膠滲透壓仍為正常人水平的 1/2左右， 這是由于球蛋白代償性增加所致，如傳鐵蛋白為正常人的 20 -3倍， 1巨球蛋白為正常人的3.5倍， 脂蛋白為3