1、蔬果農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)，農(nóng)業(yè)部食品質(zhì)量監(jiān)督檢測中心(石河子)，1，專業(yè)精制，食品安全問題的概要，食品安全問題(1)名詞意義1食品安全是指食品中不含有可能損害人體健康的有毒、有害物質(zhì)和要素。 食品安全是食品衛(wèi)生的重要組成部分。 2所謂食品安全性，是指食品在按原來的用途生產(chǎn)或吃的時候，不會給消費者帶來損害的保證。 3所謂食品安全問題，是指食品按原來的方法吃時有可能損害人體健康的物質(zhì)和要素。 2、專業(yè)精制，(2)農(nóng)產(chǎn)品安全指標(biāo)農(nóng)產(chǎn)品安全指標(biāo)主要包括以下內(nèi)容： 1、嚴(yán)重危害人體健康的指標(biāo)，如致病菌、毒素、貝類毒素； 2、農(nóng)產(chǎn)品污染指標(biāo)3，包括農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、重金屬、細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群群等化學(xué)和微

2、生物污染指標(biāo)，農(nóng)產(chǎn)品渡渡鳥大頭針為假，如甲醛、清潔海綿、漂白劑、防腐劑、著色劑等4，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性。 3、專業(yè)提純；(3)農(nóng)產(chǎn)品安全問題、目前研究成果表明，農(nóng)產(chǎn)品安全主要存在以下問題： 1生物毒素生物毒素主要是指生物自然產(chǎn)生的毒素，主要包括(1)貝類毒素種類：麻痹癥貝類毒素(PSP )拉肚子性貝類毒素； (DSP )特征：由于加熱不易破壞，其危害性相當(dāng)大。 4、專業(yè)提純、PSP存在： PSP存在于五洲四海中，并在羅布星空衛(wèi)視和蟹類中發(fā)現(xiàn)了PSP毒素。 臨床癥狀：該毒素可引起神經(jīng)系統(tǒng)疾病，包括發(fā)抖、興奮、嘴唇皮肉之苦和麻木感，嚴(yán)重時可引起呼吸系統(tǒng)麻木，是領(lǐng)便當(dāng)，致命毒素。 DSP的存在：在加

3、拿大、亞洲、新吉蘭特、歐洲等貝類生物中發(fā)現(xiàn)了DSP。 臨床癥狀： PSP毒素可引起輕微的胃腸道疾病，但不是致命毒素。 5、專業(yè)提純；(2)又稱真菌毒素、真菌毒素，是某些真菌的代謝產(chǎn)物，目前發(fā)現(xiàn)的真菌毒素有十多種，如黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、博來霉素等常見產(chǎn)毒真菌為黃曲霉、青霉、長霉。 (注意：霉菌菌株不一定存在真菌毒素。 真菌毒素不一定表面能觀察到發(fā)霉現(xiàn)象，兩者之間不存在必然的因果關(guān)系)、6、專業(yè)精制、真菌存在于許多農(nóng)產(chǎn)品中，真菌毒素直接或間接進(jìn)入食物鏈會使動植物食品受到毒素污染。 在許多真菌毒素中，黃曲霉毒素是眾所周知的最危險的毒素之一，是強致癌物質(zhì)。 這是化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)，現(xiàn)已鑒定了B1、

4、B2、G1、G2、M1、M2、P1、q、H1、GM、B2a和毒醇的1.2種類。 其中B1毒性最強。 7、專業(yè)純化，2轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的安全性，轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的含義是：農(nóng)產(chǎn)品中是否含有轉(zhuǎn)基因生物成分，利用轉(zhuǎn)基因植物或動物或微生物生產(chǎn)的農(nóng)產(chǎn)品，轉(zhuǎn)基因食品對人類無毒無副作用尚未得到證實，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品和非轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品“實質(zhì)上同等目前世界上比較一致的見解是，生物科技產(chǎn)品(轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品)對人類健康和生態(tài)環(huán)境存在潛在的危險。8、專業(yè)精制、3化學(xué)物質(zhì)危害、化學(xué)物質(zhì)危害主要包括5個方面：化學(xué)肥料我國是世界上化學(xué)肥料施用量最大的國家。 氮肥(純n )年用量在2500萬噸以上，單位面積施用量是世界平均水平的3倍。 肥料施用不當(dāng)

5、，濫用化學(xué)肥料生產(chǎn)的蔬菜對人體健康的威脅不亞于蔬菜上殘留的農(nóng)藥。 硝酸鹽本身對人體無害，但在土壤、人的口腔和胃中轉(zhuǎn)化成亞硝酸鹽，會對人體造成危害。9、專業(yè)提純、亞硝酸鹽危害主要表現(xiàn)在兩個方面： a :大量富集可能引起中毒，長期攝入，可能引起消化系統(tǒng)癌變，如胃腫瘤、大腸癌等B :NO3- NO2-胺類化合物亞硝胺(高致癌原)重金屬對鎘、汞、 危害鉻對人體具有蓄積性，半壽期長，可引起急性或慢性毒性反應(yīng)，可引起畸形、致癌、突然變異的潛在危害。 危害的高低依次為鎘、汞、金屬鉛、砷、鉻。 目前，我國兒童金屬鉛污染比較嚴(yán)重。1.0、專業(yè)提純、農(nóng)藥殘留危害，我國是世界農(nóng)藥施用量最大的國家，年施用量超過130

6、萬噸，單位面積施用量是世界平均水平的2倍。 我國與歐美等發(fā)達(dá)國家相比，農(nóng)藥的生產(chǎn)使用有很大差異。 主要是高毒性農(nóng)藥的使用量多，具體為a :農(nóng)藥的使用以殺蟲劑為主，占總使用量的68%的b :殺蟲劑中有機磷農(nóng)藥占了70%以上。 我國每年都發(fā)生農(nóng)藥中毒事件，蔬菜有機磷農(nóng)藥中毒尤為突出。 水果、蔬菜的有機磷農(nóng)藥被人體吸收，通過血液輸送到人體的器官，損害器官。 中毒表現(xiàn)：汗、肌肉顫抖、心率增加、瞳孔縮小等. 1.1、專業(yè)精制、添加劑主要在：中添加著色劑、著色劑、脫色劑、防腐劑等，表現(xiàn)苯甲酸、山梨酸、亞硝酸鹽、亞硫酸鹽等。 也有無知和非法混入。 例如：甲醛、蘇丹紅、吊床、清潔海綿等。 獸藥殘馀獸藥殘馀是指

7、動物產(chǎn)品可食部分中含有的獸藥母體化合物和/或其代謝產(chǎn)物、獸藥相關(guān)雜質(zhì)的殘馀。1.2、專業(yè)精制、獸藥殘留類型： 1、原料藥； 2 .動物體內(nèi)藥物的代謝產(chǎn)物3 .藥物或者其代謝產(chǎn)物和內(nèi)因性高分子的共價鍵物質(zhì)。 藥物殘留是家畜和魚的養(yǎng)殖過程中用于防治的抗生素、磺胺類等化學(xué)藥劑，它們往往使藥物殘留在食品動物組織中。 剩下的藥通過食物進(jìn)入體內(nèi)。 1.3、專業(yè)提純、動物性食品中的藥物殘留對人體健康的影響一直是諸多問題。 一般認(rèn)為，在先、藥物殘留會增加人體藥劑耐受力和藥劑耐受力細(xì)菌個體群的增加，增加潛在的安全問題。 但是，最近的研究表明，有效的抗生素是致癌物質(zhì)，人體吃多了會引起細(xì)胞球癌。 使獸藥無效：鹽酸克

8、羅托洛、利多巴胺。 二農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全相對性、1.4、專業(yè)提純、二農(nóng)產(chǎn)品的相對性、無論是否為人所知，任何農(nóng)產(chǎn)品中都或多或少存在對人類健康有害的物質(zhì)，絕對安全的農(nóng)產(chǎn)品是云同步，農(nóng)產(chǎn)品中含有的有害物質(zhì)含量較少，在正常范圍內(nèi)不會對人體健康造成危害一方面人類能做的是認(rèn)識農(nóng)產(chǎn)品中的有害物質(zhì)的研究，另一方面盡量減少或者清除農(nóng)產(chǎn)品中的有害物質(zhì)，吃安全的農(nóng)產(chǎn)品。1.5、專業(yè)純化、三農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測方法的特征和分類；(1)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測的特征農(nóng)產(chǎn)品快速檢測，理想的方法是在做好購買試劑的準(zhǔn)備后，從試劑的配置，包括樣品的處理時間在內(nèi)，在幾分鐘或十幾分鐘內(nèi)得到檢測結(jié)果，但這種方法還很少。 我們所說的快速

9、檢查是一種相對概念，是一種比普通檢查和傳統(tǒng)方法縮短1/2或1/3時間得到檢查結(jié)果的方法，被認(rèn)為是一種快速的方法。1.6、專業(yè)提純、快速檢測主要從3個方面體現(xiàn)： 1實驗準(zhǔn)備簡單，使用試劑少，2樣品處理簡單后可檢測，或者采用先進(jìn)快速的樣品處理方法，提高樣品處理效率。 3簡單、快速、準(zhǔn)確的分析方法可以在短時間內(nèi)檢測出處理后的樣本的結(jié)果。、1.7、專業(yè)提純、(二)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測方法分類、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測技術(shù)從上世紀(jì)5.0年代開始，經(jīng)過5.0年以上的發(fā)展，尤其是經(jīng)過2.0年以上的快速發(fā)展，檢測技術(shù)已涵蓋農(nóng)產(chǎn)品安全各方面，快速檢測方法已達(dá)到百種以上。 根據(jù)不同的指標(biāo)，這些個的方法可以分為不同

10、的種類。 目前主要有以下分類方法：從現(xiàn)場快速檢測實驗室快速檢測、1.8、專業(yè)純化2定性定量：從定性快速檢測(現(xiàn)場多)半定量快速檢測(現(xiàn)場多)定量快速檢測3檢測原理：生物測定法-發(fā)光細(xì)菌或易感性家蠅分子生物學(xué)法生化法有機磷農(nóng)藥快速測定法， 瓦斯氣體光譜法、1.9、專業(yè)提純四.農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀(一)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀(二)中國農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測方法的研究受到各國政府的高度重視，成為當(dāng)前研究的熱門課題之一。 成熟水果、蔬菜農(nóng)藥殘留檢測方法主要有以下幾個方面1化學(xué)法。 該方法是以氣體色譜法為代表的經(jīng)典分析方法。 特點：靈敏度

11、高、準(zhǔn)確、可定量測定大部分農(nóng)藥殘留，但測定時間長、成本高、操作復(fù)雜，不適于市場抽查監(jiān)督管理。2.0、專業(yè)純化、2種生物測定法以發(fā)光細(xì)菌或易感性家蠅為測定材料的分子生物學(xué)法采用免疫應(yīng)答如酶催化劑免疫應(yīng)答，特異性酶催化劑免疫試劑盒的生物化學(xué)測定法利用膽堿酯酶抑制原理，僅限于可抑制膽堿酯酶活性的農(nóng)藥。2.1、專業(yè)提純、目前在我國成型的農(nóng)藥殘留快速測定法1農(nóng)藥殘留試紙法(農(nóng)藥速測卡法、酶催化劑試劑法或STRIP法) 2酶催化劑片法(農(nóng)藥速測卡法) 3農(nóng)藥殘留分光光度法(抑制率法) 4酶催化劑免疫試劑盒法-分子生物學(xué)法5有機磷農(nóng)藥速測法、2.2、專業(yè)提純、蔬果農(nóng)藥殘留快速測定技術(shù)酶催化劑活性是指酶催化劑

12、常態(tài)，適合物質(zhì)合成和分解的條件PH8溫度3738， 存在2.3、丙精制、2乙酰膽堿酯酶酶促反應(yīng)促進(jìn)、酶催化劑基質(zhì)(硫代膽堿能系統(tǒng))硫膽堿冰乙酸乙酰膽堿酯酶擬除蟲菊酯類等農(nóng)藥酶活性受到抑制的酶顯色劑基質(zhì)分解產(chǎn)物黃色溶液、24、丙精制3有機磷或氨基甲酸酯系農(nóng)藥的酶反應(yīng)， 能夠抑制乙酰膽堿酯酶有機磷或氨基甲酸酯系農(nóng)藥酶活力，顯色劑酶催化劑無分解物無色溶液基質(zhì)顯色劑(硫膽堿能系統(tǒng))少量分解物鵝黃色溶液活性得到抑制， 含有有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥基質(zhì)的丁基膽堿酯酶樣品活性不正常含有有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥，2.5，專門提純4 .在某些條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率

13、與農(nóng)藥濃度呈正相關(guān)， 正常情況下，酶催化劑催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物(膽堿能系統(tǒng))的水解作用，其水解作用產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計在412nm處測定吸光率的時間變化值，根據(jù)算出抑制率的抑制率，可以判斷樣品中是否含有高用量的有機磷和氨基甲酸類農(nóng)藥。 2.6，專業(yè)精制，二檢驗范圍和靈敏度，一檢驗對象蔬菜：葉菜、蔬菜、豆菜、瓜菜等(胡蘿卜、韭菜、蔥、大蒜、茯苓白、蘑菇等除外)水果：蘋果、梨、桃、草莓等。、2.7、專業(yè)提純、2農(nóng)藥范圍、農(nóng)藥：A :有機磷類甲胺磷、硫磷、氧化樂果、甲氧芐啶、久效磷、敵恐怖、甲氧芐啶等(靈敏度0.5-5mg/kg的甲硫磷、磺胺硫磷、甲基硫磷、毒死蜱、樂果等b :

14、氨基甲酸酯類：克百威、阿爾及爾、減多威、丙硫氯韋、丁硫氯韋(0.2-2.5mg/kg )。2.8、專業(yè)精制、三種試劑的配制和保存、1 .專用酶催化劑(乙酰膽堿酯酶)的配制：酶催化劑時，請用緩沖液溶解。酶液的活性請保存在A00.3以上。 粉狀的酶催化劑(密封)在儲藏于冷凍室時用提取液溶解，溶解的酶液分為24個瓶，暫時儲藏于冷凍室，使用時解凍，使用后的酶液儲藏于冷藏室(05)，4天以內(nèi)用完，酶液最多不能重復(fù)解凍2次。 不這樣做會影響酶催化劑，2.9，專業(yè)精制，2 .基質(zhì)(硫膽堿能系統(tǒng))的制備：取出基質(zhì)25mg，加入蒸餾水3.0mL溶解，搖勻保存到冰箱中。 儲存期間在兩周以下。 保存：固體(密封)和

15、溶解的基質(zhì)必須保存在冷凍庫的冷凍室中。 溶解后，長時間不使用時，儲存在冷凍庫的冷凍室中，使用時解凍。 分別取160mg顯色劑和15.6mg碳酸水素納金屬釷，用緩沖液20mL溶解。 保存：固體和溶解的顯色劑請保存在冷凍庫的冷藏室(3-5)中。 思考問題：為什么用緩沖液配置顯色劑？ 3.1、專業(yè)純化、4 .萃取劑(PH8.0緩沖液)的制備：分別提取磷酸氫二鉀元素11.9g和磷酸二氫二鉀元素3.2g，用蒸餾水1000溶解。 保存：固體和溶解后的提取試劑可在常溫下保存。 思考問題：為什么用緩沖液作為萃取劑？3.2、專業(yè)純化、四取樣要求、葉菜：用進(jìn)樣器隨機采集不同株葉。 果菜和水果類：采用進(jìn)樣器沿果菜表

16、面取約1厘米厚的樣品。選擇3.3、專業(yè)精制、五檢驗工藝、1、代表性樣品，將表面泥漿洗掉，切成1cm見方的東鱗西爪，取1g樣品，裝入萃取瓶中，5mL緩沖液，振動12min，倒入提取液，靜置35min，待機. 2，對照溶液試驗：為試管進(jìn)一步加入酶液0.1mL、顯色劑0.1mL振蕩后，放置3.7成分以上(樣品的每批的控制時間必須一致)。 加入0.1mL基質(zhì)開始振蕩后，測定液立即發(fā)生顯色反應(yīng)，記錄3min內(nèi)的吸光率變化A0. 3，樣品溶液測定：在試管之前加入樣品提取液2.5mL，其他操作與對照相同，反應(yīng)3min的吸光率變化值A(chǔ)t .不記錄3.4 6檢驗結(jié)果計算式、Ao- At抑制率() 100% Ao

17、 Ao:為基質(zhì)反應(yīng)3分鐘后和3分鐘前的吸光值之差A(yù)t :試樣基質(zhì)反應(yīng)3分鐘后和3分鐘前的吸光值之差、3.5、專業(yè)精制、7檢驗結(jié)果判定，1 .檢驗結(jié)果判定結(jié)果為酶催化劑被抑制的程度(抑制率)，蔬菜試樣提取液對酶催化劑的抑制率陽性結(jié)果的樣品需要反復(fù)檢查2次以上。 對于陽性結(jié)果的樣品，可以通過其他方法進(jìn)一步確定具體的農(nóng)藥品種和含量。 3.6、專業(yè)精制、2檢定結(jié)果表明，檢定結(jié)果中有時抑制率為負(fù)。 抑制率為負(fù)的抑制率超過100，只要抑制率在-10%和110之間，都是正常的情況下，根據(jù)測定結(jié)果的要求進(jìn)行判定。 抑制率超過這個范圍的話，表示操作錯誤，需要再次檢查。、3.7、專業(yè)提純、八、酶催化劑抑制率法對農(nóng)藥某些檢測