1、,醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)（第5版） 第三章 細(xì)胞生物學(xué)的研究方法,1,PPT學(xué)習(xí)交流,上次課 第一節(jié) 顯微鏡技術(shù) 第二節(jié) 細(xì)胞的分離培養(yǎng) 第三節(jié) 細(xì)胞組分的分離和培養(yǎng),2,PPT學(xué)習(xí)交流,本次課主要內(nèi)容,第四節(jié) 細(xì)胞化學(xué)和細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù) 第五節(jié) 細(xì)胞功能基因組學(xué)研究技術(shù) 第六節(jié) 生物大分子的結(jié)構(gòu)測定,3,PPT學(xué)習(xí)交流,第四節(jié) 細(xì)胞化學(xué)和細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù),細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（cytochemistry technique)一類將細(xì)胞形態(tài)觀察與細(xì)胞成分分析結(jié)合起來，是在保持組織或細(xì)胞原有結(jié)構(gòu)的情況下利用生物大分子、小分子、無機(jī)離子的物理、化學(xué)特性來研究他們在細(xì)胞內(nèi)的分布、數(shù)量級動態(tài)變化。細(xì)胞化學(xué)技術(shù)不是

2、單一的技術(shù)，而是一整套有關(guān)聯(lián)的技術(shù)，包括酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、放射自顯影技術(shù)、原位雜交技術(shù)等,4,PPT學(xué)習(xí)交流,一、酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 通過酶的特異細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)來顯示酶在細(xì)胞內(nèi)的分布及酶活性強(qiáng)弱的一種技術(shù)。,5,PPT學(xué)習(xí)交流,光鏡樣品： 固定（酶固定結(jié)構(gòu)固定） 冷凍切片 細(xì)胞化學(xué)反應(yīng) （酶反應(yīng)捕捉反應(yīng)） 光鏡觀察 電鏡樣品： 固定（酶固定結(jié)構(gòu)固定）切組織片細(xì)胞化學(xué)反應(yīng) （酶反應(yīng)捕捉反應(yīng)）脫水包埋 超薄切片電鏡觀察,6,PPT學(xué)習(xí)交流,舉例：過氧化物酶 peroxidase ,(POX) 1.原理 血細(xì)胞中的POX能分解H2O2而釋放出新生態(tài)氧，后者 可使聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)沉淀于細(xì)

3、胞質(zhì)酶活力處。 2.正常陽性細(xì)胞: . 中性粒細(xì)胞呈均勻顆粒狀藍(lán)黑色陽性。 . 嗜酸性粒細(xì)胞呈均勻粗大顆粒狀藍(lán)色陽性。 . 單核細(xì)胞呈彌散細(xì)顆粒狀藍(lán)色陽性。,7,PPT學(xué)習(xí)交流,中性粒細(xì)胞呈 粗顆粒強(qiáng)陽性,單核細(xì)胞呈 彌散弱陽性,8,PPT學(xué)習(xí)交流,二、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（Immunocytochemistry） 利用抗原和抗體的結(jié)合具有高敏感性和特異性的特點，用已知的經(jīng)過標(biāo)記的抗體檢測組織與細(xì)胞中相應(yīng)抗原的方法。,9,PPT學(xué)習(xí)交流,宮頸鱗癌細(xì)胞的免疫組化染色,宮頸鱗癌細(xì)胞的免疫組化染色,顯示NRDRB1蛋白在宮頸鱗癌組織中有特異表達(dá)，棕色為陽性表達(dá)。,10,PPT學(xué)習(xí)交流,三、放射自顯影術(shù)(

4、autoradiography) 放射自顯影技術(shù)是利用放射性同位素的電離輻射對乳膠（含AgBr或AgCl）的感光作用，對細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行定性、定位與半定量研究的一種細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體、組織和細(xì)胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用機(jī)理、作用部位等等。 常用的弱放射性同位素35S、14C、3H等及強(qiáng)放射性同位素32P。,11,PPT學(xué)習(xí)交流,缺點：觀察固定后的細(xì)胞內(nèi)分子分布情況，與活細(xì)胞中的分布存在一定距離。 活細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù),12,PPT學(xué)習(xí)交流,四、活細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù) （一）離子探針進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)離子的實時監(jiān)測 原理：一些染料專一地與某種離子結(jié)合后會產(chǎn)生熒 光或

5、改變本身熒光的發(fā)射波長與強(qiáng)度，從而 通過熒光檢測可以顯示該離子的量。 應(yīng)用：細(xì)胞內(nèi)離子的實時檢測 。,13,PPT學(xué)習(xí)交流,(二）綠色熒光蛋白（GFP) 應(yīng)用：用于顯示特定蛋白質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)的定位，間接研究蛋白之間的相互作用。 原理：構(gòu)建熒光蛋白基因與目的蛋白基因的融合基因表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染特定細(xì)胞，可以在熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察目的蛋白在細(xì)胞內(nèi)的位置及隨時間變化情況。 特點：融合蛋白不影響目的蛋白的真實定位，熒光蛋白僅僅是一個和標(biāo)記物。 缺點：無法對幾種蛋白質(zhì)檢的相互作用提供直接證據(jù)。 其他熒光蛋白：黃色熒光蛋白（YGP)、藍(lán)色熒光蛋白（BGP)、青色熒光蛋白（CGP)等,14,PPT學(xué)習(xí)交流

6、,15,PPT學(xué)習(xí)交流,16,PPT學(xué)習(xí)交流,（三) 熒光共振能量轉(zhuǎn)移（fluorescence resonance energy transfer，F(xiàn)RET） 應(yīng)用：用于顯示特定蛋白質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)的定位，間接研究蛋白之間的相互作用。 原理：當(dāng)熒光工體與熒光受體分子彼此接近而供體的發(fā)射光譜與受體的激發(fā)光譜重疊時就會通過偶極子相互作用，實現(xiàn)了能量向鄰近的受體分子轉(zhuǎn)移，一種非輻射能量躍遷，通過熒光顯微鏡可以觀察到這種改變。 特點：受、供體的激發(fā)光要足夠分得開；供體的發(fā)光光譜與受體的激發(fā)光譜要重疊。 常見的FRET熒光染料Cy3-Cy5；Alexa546-Alexa647；Texas Red-Tetra

7、methylrhodamine等。,17,PPT學(xué)習(xí)交流,18,PPT學(xué)習(xí)交流,（四）單分子示蹤 單分子熒光成像 優(yōu)勢：樣品激發(fā)范圍小，光子收集效率高，高量子產(chǎn)能高信噪比熒光基團(tuán)及低成本熒光。 應(yīng)用：配體與受體地 結(jié)合、蛋白質(zhì)的集合和解釋，蛋白、mRNA等生物大分子的動力學(xué)行為及蛋白、病毒的示蹤。 原子力顯微鏡 優(yōu)勢：在溶液和室溫下進(jìn)行操作、分辨率高，適合生理條件下顯示生物分子的特異性相互作用。,19,PPT學(xué)習(xí)交流,第五節(jié) 細(xì)胞功能基因組學(xué)研究技術(shù),一、基因表達(dá)的定量分析 二、基因表達(dá)的上調(diào)和下調(diào)技術(shù) 三、蛋白質(zhì)相互作用的研究技術(shù) 四、蛋白質(zhì)與核酸的相互作用研究技術(shù) 五、生物芯片技術(shù) 六、蛋

8、白質(zhì)組學(xué)技術(shù) 七、高通量測序技術(shù) 八、模式動物個體水平的基因操作技術(shù),20,PPT學(xué)習(xí)交流,一，基因表達(dá)的定量分析 （一）印跡雜交技術(shù) 定量檢測基因表達(dá)變化的基本方法 Northern blotting 檢測特異性mRNA的技術(shù)，變性處理（甲醛、戊二醛）。 Westen Blotting 檢測蛋白質(zhì)分子，可檢測同一蛋白質(zhì)不同修飾方法，如磷酸化、甲基化、泛素化，考察蛋白質(zhì)含量、大小、和活性狀態(tài)的重要方法。 優(yōu)點：低成本、結(jié)果準(zhǔn)確、少有假象。 缺點：低通量的檢測技術(shù)、步驟繁瑣、花費時間長，,21,PPT學(xué)習(xí)交流,22,PPT學(xué)習(xí)交流,（二）原位雜交技術(shù)(In situ hybridization，

9、ISH) 基因表達(dá)的時空信息 基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列，將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件：組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物,23,PPT學(xué)習(xí)交流,24,PPT學(xué)習(xí)交流,U,U,U,G,G,C,U,A,G,A,A,G,C,G,A,U,C,C,C,G,U,C,C,G,A,C,G,RNA探針,待測mRNA,酶標(biāo)抗體,標(biāo)記物,原位雜交原理

10、,25,PPT學(xué)習(xí)交流,（三）熒光實時定量PCR （Real-time PCR） 檢測基因表達(dá)表達(dá)的常規(guī)方法 1985年，Kary Mullis在Cetus公司工作期間，發(fā)明了PCR。1993年獲得了諾貝爾化學(xué)獎。 Mullis要合成DNA引物來進(jìn)行測序工作，卻常為沒有足夠多的模板DNA而煩惱。1983年4月的一個星期五晚上，他開車去鄉(xiāng)下別墅的路上,猛然閃現(xiàn)出“多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”的想法。,26,PPT學(xué)習(xí)交流,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）：是在體外對特定的DNA序列進(jìn)行的重復(fù)性復(fù)制反應(yīng)（擴(kuò)增）。 反應(yīng)體系： 模板DNA； 耐熱的DNA聚合酶； 引物

11、； 4種脫氧核苷酸（dNTP）； 反應(yīng)緩沖液。,27,PPT學(xué)習(xí)交流,實時熒光定量PCR技術(shù) 是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。 反應(yīng)步驟： (1) 95變性：DNA雙鏈解離； (2) 55退火：DNA鏈與引物互補結(jié)合； (3) 72延伸：DNA聚合酶作用下的互補鏈合成。,28,PPT學(xué)習(xí)交流,二、 基因表達(dá)的上調(diào)和下調(diào)技術(shù) 基因克?。褐竎DNA克隆，即將mRNA逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA或通過體外聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)得到的基因片段，插入到能進(jìn)行自我復(fù)制的載體（通常是質(zhì)粒），實現(xiàn)在受體細(xì)菌內(nèi)大量擴(kuò)增的過程。 轉(zhuǎn)染（tr

12、ansfection）：將帶有外源性基因的克隆載體或表達(dá)載體導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程。 在表達(dá)載體啟動子的驅(qū)動下，外源基因?qū)@得過表達(dá)（over-expression），從而實現(xiàn)上調(diào)細(xì)胞中的目的基因表達(dá)。,29,PPT學(xué)習(xí)交流,（一）外源性基因在細(xì)胞中的過表達(dá)是上調(diào)基因表達(dá)的主要方式,30,PPT學(xué)習(xí)交流,（二）RNA干擾技術(shù)是下調(diào)基因表達(dá)的常用方法 RNA干擾（RNA interference, RNAi）是通過小干擾RNA ( small interference RNA, siRNA ) 造成目的mRNA特異性降解來高效、特異的阻斷體內(nèi)特定基因表達(dá)，誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型，從而使基因

13、轉(zhuǎn)錄后沉默的一種現(xiàn)象。,31,PPT學(xué)習(xí)交流,三、 蛋白質(zhì)相互作用的研究技術(shù) 研究蛋白質(zhì)相互作用是理解細(xì)胞生命過程的關(guān)鍵。 （一）免疫沉淀 偶聯(lián)在凝膠顆粒或磁珠上的目的蛋白的抗體將細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合沉淀出來，在此過程中能夠與目的蛋白發(fā)生相互作用的蛋白被同時沉淀下來，利用SDS-PAGE、免疫印跡或生物質(zhì)譜等技術(shù)隊沉淀中的蛋白進(jìn)行鑒定。 缺點：無法動態(tài)檢測，存在假陽性。 應(yīng)用：驗證蛋白-蛋白的相互作用。,32,PPT學(xué)習(xí)交流,33,PPT學(xué)習(xí)交流,（二）酵母雙雜交 視已知蛋白的cDNA序列為誘餌(bait)，將其與DNA結(jié)合域融合，構(gòu)建成誘餌質(zhì)粒。 將待篩選蛋白的cDNA序列與

14、轉(zhuǎn)錄激活域融合，構(gòu)建成文庫質(zhì)粒。 將這兩個質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化于酵母細(xì)胞中。 酵母細(xì)胞中誘餌蛋白若能與待篩選的未知蛋白特異性地相互作用，則可激活報告基因的轉(zhuǎn)錄；反之，則不能。 缺點：只能說明兩個蛋白之間有相互作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，并不標(biāo)示這兩個蛋白在細(xì)胞內(nèi)一定會相遇或這種相互作用在活細(xì)胞中確實存在，需要用免疫共沉淀進(jìn)行驗證。,34,PPT學(xué)習(xí)交流,（三）吞噬體展示可篩選存在相互作用的蛋白質(zhì) 被篩選蛋白cDNA與噬菌體的衣殼蛋白DNA構(gòu)建成融合基因，使被篩選蛋白在噬菌體的表面進(jìn)行表達(dá)；將目的蛋白固定在平板或小珠上，與展示不同篩選蛋白的噬菌體文庫進(jìn)行孵育；洗去未結(jié)合噬菌體，分離特異性結(jié)合的噬菌體，噬菌體擴(kuò)增，多次

15、重復(fù)上述分離過程富集特異性結(jié)合的噬菌體，基因測序得到基因編碼蛋白。,35,PPT學(xué)習(xí)交流,四 蛋白質(zhì)與核酸相互作用的研究技術(shù) 蛋白質(zhì)與核酸（DNA和RNA）的相互作用是基因表達(dá)調(diào)控的基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)與基因組DNA相互作用參與基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控、蛋白質(zhì)（RNA結(jié)合蛋白，RBP)與RNA特性結(jié)合完成轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平的RNA加工、修飾、轉(zhuǎn)運、定位和降解等過程。,36,PPT學(xué)習(xí)交流,（一）染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)研究DNA和蛋白質(zhì)的相互作用 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation，簡稱ChIP）原理是：在生理狀態(tài)下把細(xì)胞內(nèi)的DNA與蛋白質(zhì)交聯(lián)在一起，通過超聲或酶處理將

16、染色質(zhì)切為小片段后，利用抗原抗體的特異性識別反應(yīng)，將與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段沉淀下來。交聯(lián)反應(yīng)的逆轉(zhuǎn)和DNA的純化，DNA的鑒定。 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)一般包括細(xì)胞固定，染色質(zhì)斷裂，染色質(zhì)免疫沉淀，交聯(lián)反應(yīng)的逆轉(zhuǎn)，DNA的純化，以及DNA的鑒定。,37,PPT學(xué)習(xí)交流,38,PPT學(xué)習(xí)交流,（二）紫外交聯(lián)免疫沉淀研究RNA與RNA結(jié)合蛋白相互作用 應(yīng)有：在全基因組水平揭示RNA和RBP相互作用。 原理：用254nm紫外光照射使細(xì)胞中的RNA分子與RNA結(jié)合蛋白發(fā)生共價結(jié)合，以RBP的特異性抗體將RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體沉淀后，回收其中的RNA片段，經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄后對RNA分子測序，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)RNA與R

17、BP之間的相互關(guān)系。應(yīng)有限制性酶切位點和識別序列的引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，可使CLIP分辨率達(dá)到單個堿基水平，即iCLIP。 缺點：交聯(lián)效率低，難以區(qū)別結(jié)合和非結(jié)合RNA序列，254nm可誘發(fā)細(xì)胞DNA損傷并結(jié)合新的RBP。 改進(jìn)技術(shù)：光活化核糖核苷增強(qiáng)的交聯(lián)免疫沉淀技術(shù)（PAR-CLIP),紫外交聯(lián)免疫共沉淀測序(CLIP seq)即紫外交聯(lián)免疫沉淀結(jié)合高通量測序.,39,PPT學(xué)習(xí)交流,五，生物芯片技術(shù) 應(yīng)用：基因差異表達(dá)分析 ， DNA測序、基因突變及多態(tài)性掃描，基因組DNA突變及染色體變異檢測 原理：采用光導(dǎo)原位合成或微量點樣等方法，將大量生物大分子如核酸片段、多肽分子甚至組織切片、細(xì)胞等生物

18、樣品有序地固化于支持物的表面，組成密集二維分子排列，然后與已標(biāo)記的待測生物樣品中的靶分子雜交，通過特定的儀器對雜交信號的強(qiáng)度進(jìn)行快速、并行、高效地檢測分析，從而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。 按照芯片上固定的生物分子的不同，可分為：基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片及組織芯片。 從其功能不同的角度，又可分為：測序芯片、表達(dá)芯片和比較基因組雜交(CGH)芯片。,40,PPT學(xué)習(xí)交流,基因芯片（Genechip） 又稱DNA芯片,是根據(jù)核酸雜交的原理，將大量探針分子固定于支持物上，然后與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過檢測雜交信號的強(qiáng)度及分布來進(jìn)行分析 。,41,PPT學(xué)習(xí)交流,42,PPT學(xué)習(xí)交流,43,PPT學(xué)

19、習(xí)交流,蛋白質(zhì)芯片(proteinchip) 利用抗體與抗原特異性結(jié)合即免疫反應(yīng)的原理，將蛋白質(zhì)分子（抗原或抗體）結(jié)合到固相支持物上，形成蛋白質(zhì)微陣列，即蛋白質(zhì)芯片 。,44,PPT學(xué)習(xí)交流,六 蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics) 技術(shù) 蛋白質(zhì)組（proteome）Proteins expressed by a genome（基因組表達(dá)的所有蛋白質(zhì)）,指在特定時空條件下某種細(xì)胞、組織或器官所有含有的全部蛋白質(zhì)。 蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)以特定時空條件下某種細(xì)胞、組織或器官所含有的全部蛋白質(zhì)的存在即其活性方式為研究對象的學(xué)科。,45,PPT學(xué)習(xí)交流,雙相電泳技術(shù) 質(zhì)譜法 蛋白質(zhì)鑒定質(zhì)譜

20、：電噴霧電離質(zhì)譜（ESI-MS)、基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS) 蛋白質(zhì)的質(zhì)譜測序：串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）,46,PPT學(xué)習(xí)交流,七、高通量測序技術(shù) 高通量測序技術(shù)（High-throughput sequencing）又稱深度測序(deepsequencing)，“下一代”測序技術(shù)（Next-generation sequencing technology），以能一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定。 高準(zhǔn)確性，高通量，高靈敏度，和低運行成本等突出優(yōu)勢，可以同時完成傳統(tǒng)基因組學(xué)研究（測序和注釋）以及功能基因組學(xué) （基因表達(dá)及調(diào)控，基因功能，蛋白/核

21、酸相互作用）研究。,47,PPT學(xué)習(xí)交流,原理：將DNA固定在芯片上，測序反應(yīng)以大規(guī)模陳列姓氏排列，邊合成邊測序，不依賴于電泳，陳列上的DNA合成石的單個堿基改變所發(fā)出的熒光信號被檢測器捕獲并轉(zhuǎn)化為一個測序峰值，從而獲得序列信息。熒光信號可以由被熒光標(biāo)記的dNTP產(chǎn)生，也可以由DNA合成時所觸發(fā)的酶催化底物激發(fā)出的熒光形成。 主要有Roche的454焦磷酸測序技術(shù)、Illumina公司的Solexa聚合酶合成測序技術(shù)、ABI公司的SOLiD 連接酶測序技術(shù)。,48,PPT學(xué)習(xí)交流,49,PPT學(xué)習(xí)交流,與其他技術(shù)結(jié)合：與逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)結(jié)合，可進(jìn)行高通量的RNA測序，即RNA-seq；與染色質(zhì)免疫共

22、沉淀（ChIP）或紫外交聯(lián)免疫沉淀（CLIP）結(jié)合，形成ChIP-seq或CLIP-seq技術(shù)、與基因組甲基化檢測技術(shù)相結(jié)合，形成Methyl-seq技術(shù)。,50,PPT學(xué)習(xí)交流,八、模式動物個體水平的基因操作技術(shù) 基因敲除(knockout)是指一種遺傳工程技術(shù)，針對某個序列已知但功能未知的序列，改變生物的遺傳基因，令特定的基因功能喪失作用，從而使部分功能被屏障，并可進(jìn)一步對生物體造成影響，進(jìn)而推測出該基因的生物學(xué)功能。 基因同源重組是指當(dāng)外源DNA片段大且與宿主基因片段同源性強(qiáng)者并互補結(jié)合時，結(jié)合區(qū)的任何部分都有與宿主的相應(yīng)片段發(fā)生交換(即重組)的可能 。,51,PPT學(xué)習(xí)交流,采用方法

23、1. 把待研究的基因DNA直接注射到受精卵的細(xì)胞核中。 2.在培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）基因 組中改變或加入一個基因，隨后把所有基因改變的ES細(xì)胞注入胚泡，使其成為內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的一部分。是基因敲除的常見方法。,52,PPT學(xué)習(xí)交流,53,PPT學(xué)習(xí)交流,第六節(jié) 生物大分子的結(jié)構(gòu)測定,生物大分子的結(jié)構(gòu)域功能有著密不可分的關(guān)系，特別是對于種類繁多、結(jié)構(gòu)復(fù)雜的蛋白周三維結(jié)構(gòu)的分析，是掌握生物大分子功能，理解生命現(xiàn)象的重要手段。,54,PPT學(xué)習(xí)交流,一，磁共振技術(shù) 核磁共振光譜（Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, NMR ） 原理：將自旋核放入磁場中，用適宜頻率的電磁波照射，它們會吸收能量，發(fā)生原子核能級的躍遷，同時產(chǎn)生核磁共振信號，檢測這種信號，并以波譜的形式顯示。主要的自旋核為氫原子核。 優(yōu)勢：不需要蛋白質(zhì)結(jié)晶；在溶液中進(jìn)行檢測便于檢測蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化，如自身折疊或與底物結(jié)合時的變化；可以測定RNA分子的三維結(jié)構(gòu)和糖蛋白中的復(fù)雜的糖側(cè)鏈的結(jié)構(gòu)特點。,55,PPT學(xué)習(xí)交流,二，X-射線衍射技術(shù) X-射線衍射技術(shù)（X-ray diffraction，XRD）是利用晶體形成的X射線衍射，對物質(zhì)進(jìn)行內(nèi)部原子在空