1、液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)簡(jiǎn)介Introduction in the Application of Liquid Chromatography Mass Spectrometry,s1020429 張晶晶 s1020432 焦廣睿,前言,輸入文本內(nèi)容,輸入文本內(nèi)容,輸入文本內(nèi)容,輸入文本內(nèi)容,液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)簡(jiǎn)介,1,題目,題目,題目,題目,Click to add title,Click to add title,Click to add title,Click to add title,1,2,3,4,Contents,Add Your Text in here,Add Your Text in here,

2、Add Your Text in here,Add Your Text in here,Add Your Text in here,圖解,輸入數(shù)字內(nèi)容,內(nèi)容,內(nèi)容,內(nèi)容,內(nèi)容,題目,題目,題目,題目,色譜質(zhì)譜的在線聯(lián)用將色譜的分離能力與質(zhì)譜的定性功能結(jié)合起來,色譜,質(zhì)譜,實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜 混合物更準(zhǔn) 確的定量和 定性分析,LC-MS GC-MS,簡(jiǎn)化了樣 品的前處 理過程,液質(zhì)聯(lián)用與 氣質(zhì)聯(lián)用互 為補(bǔ)充，分 析不同性質(zhì) 的化合物,LC-MS 的特長(zhǎng),MS,LC-MS,試樣中的各成分根據(jù)固 定相（柱填料）對(duì)流動(dòng) 相中組份保留能力的不 同，進(jìn)行分離，根據(jù)成 分的性質(zhì)采用UV、熒 光、電導(dǎo)等檢測(cè)器。這 些

3、檢測(cè)器對(duì)物質(zhì)的定性 主要根據(jù)保留時(shí)間，定 量根據(jù)峰強(qiáng)度和面積。 色譜儀在分離能力上優(yōu) 越，但是，對(duì)多成分同 時(shí)分析有些成分幾乎同 時(shí)從柱中洗脫的情況， 難于做到準(zhǔn)確的定性、 定量。,將試樣成分使用不同方 法進(jìn)行離子化，根據(jù)所 得離子在真空中的質(zhì)荷 比進(jìn)行分離，是測(cè)定各 離子強(qiáng)度的高靈敏度檢 測(cè)方法。所得的質(zhì)譜由 于可表示某質(zhì)荷比的離 子存在的程度，非常有 助于定性分析。質(zhì)量數(shù) 在分子中是特有的信息， 而MS 可以直接取得這些 信息。但是，這是在單一 成分測(cè)定時(shí)的情況，而在 多數(shù)成分同時(shí)進(jìn)樣時(shí)極難 進(jìn)行質(zhì)譜的解析。,分離能力優(yōu)越的LC 與定性能力優(yōu)越的MS 相結(jié)合的裝置，采用掃描測(cè)定所得的質(zhì)譜,

4、提供來自LC 洗脫成分中的分子量與結(jié)構(gòu)信息，根據(jù)其他LC 檢測(cè)器所得的保留時(shí)間對(duì)定性補(bǔ)充（圖1）。另外，在SIM（選擇離子監(jiān)測(cè)）中利用質(zhì)量數(shù)的高選擇性有效的進(jìn)行檢測(cè),即使LC 分離不充分，也可進(jìn)行避開雜質(zhì)影響進(jìn)行定量分析。兼?zhèn)浞治鰧?duì)象和選擇性好的特點(diǎn)。,LC,液質(zhì)聯(lián)用與氣質(zhì)聯(lián)用的區(qū)別,氣質(zhì)聯(lián)用儀(GC-MS)是最早商品化的聯(lián)用儀器，它的優(yōu)點(diǎn)受到廣泛承認(rèn)。在物質(zhì)分離、定性這方面GC-MS 是有效的手段，但是，可分析的試樣只限分析小分子、易 揮發(fā)、熱穩(wěn)定高、能氣化的化合物；用電子轟擊方式（EI）得到的譜圖， 可與標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)對(duì)比。 也就是說LC-MS 具有分析試樣的適用范圍廣的優(yōu)點(diǎn)。 液質(zhì)聯(lián)用(LC-

5、MS)主要可解決如下幾方面的問題： 不揮發(fā)性化合物分 析測(cè)定； 極性化合物的分析測(cè)定； 熱不穩(wěn)定化合物的分析測(cè)定； 大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析測(cè)定； 沒有商品化 的譜庫(kù)可對(duì)比查詢，只能自己建庫(kù)或自己解析譜圖。,現(xiàn)在，液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-MS）已在制藥、環(huán)境、食品、工業(yè) 材料等領(lǐng)域廣泛使用。,LC-MS 的裝置構(gòu)成,質(zhì)譜儀是由導(dǎo)入試樣的HPLC 單元、LC與MS 的接口部分、試樣離子化效導(dǎo)入生成離子的靜電透鏡部、將離子按質(zhì)荷比m/z 分離的質(zhì)譜分析部和檢測(cè)被分離的離子的檢測(cè)部構(gòu)成。 根據(jù)離子化的不同有各種不同種類，這里展示采用一般LC-MS 檢測(cè)器的大氣壓離子化四極桿

6、MS 的構(gòu)成（圖2）。在大氣壓離子化部分包括電噴霧離子源（ESI）、大氣壓化學(xué)離子（APCI）等，起到與HPLC 接口和離子源的作用。這里產(chǎn)生的離子，脫溶劑后通過八極桿等聚焦，導(dǎo)入四極桿。在四極桿上加直流與高頻交流電壓，只讓具有目標(biāo)m/z 的離子通過。將到達(dá)檢測(cè)器的離子流轉(zhuǎn)化成信號(hào)，在PC 上讀取。,HPLC部,PC部,檢測(cè)器,大氣壓離子化,進(jìn)行MS/MS的儀器從原理上分為兩類,第一類儀器利用質(zhì)譜在空間中的順序，是由兩臺(tái)質(zhì)譜儀串聯(lián)組裝而成。 即前面列出的串列式多級(jí)質(zhì)譜儀。,第二類利用了一個(gè)質(zhì)譜儀時(shí)間順序上的離子儲(chǔ)存能力，由具有儲(chǔ)存離子 的分析器組成，如離子回旋共振儀（ICR）和離子阱質(zhì)譜儀。但

7、不能進(jìn) 行母離子掃描或中性丟失。,儀器和工作原理簡(jiǎn)介,LC系統(tǒng) 接口和離子化方式 質(zhì)量分析器 儀器的基本功能 離子極化方式 碰撞誘導(dǎo)裂解（CID） 掃描類型和掃描方式 LC-MS儀器組成框架圖 真空系統(tǒng) 樣品 液相色譜儀 接口 質(zhì)量分析器 數(shù)據(jù)處理,LC系統(tǒng),與傳統(tǒng)的LC系統(tǒng)組成相同檢測(cè)器 UV MS 色譜泵能在低流速下，提供流量準(zhǔn)確、穩(wěn)定的流動(dòng)相 流動(dòng)相不能含非揮發(fā)性鹽類（如磷酸緩沖鹽和離子對(duì)試劑） 流動(dòng)相低濃度電解液和高比例有機(jī)相易獲高離子化效率,接口和離子化方式,接口的作用 將流動(dòng)相及其樣品氣化 分離出去大量的流動(dòng)相分子 完成樣品分子的電離 接口和離子化方式 接口的類型 傳送帶接口（MB

8、） 粒子束接口（PB） 直接導(dǎo)入接口（DLI） 連續(xù)流動(dòng)快原子轟擊（CFFAB） 熱噴霧接口（TSP） 大氣壓離子化接口（API） ） 大氣壓離子化接口（API） （1）電噴霧電離（ ESI） （2）大氣壓化學(xué)離子化（ APCI） ）,（1）電噴霧電離（EPI）,流出液在高電場(chǎng)下形成帶電噴霧，在電場(chǎng)力作用下穿過氣簾； 氣簾的作用：霧化；蒸發(fā)溶劑；阻止中性溶劑分子 特點(diǎn) ： 通常小分子得到M+H+ 、M+Na+ 或M-H-單電荷離子測(cè)定混合物；最軟的電離技術(shù)，通常只產(chǎn)生分子離子峰； 生物大分子產(chǎn)生多電荷離子，其易形成多電荷離子的特性可分析蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子； 通過調(diào)節(jié)離子源電壓控制離子的

9、碎裂（源內(nèi)CID） 測(cè)定化合物結(jié)構(gòu)。,大氣壓化學(xué)離子化（APCI）,樣品液從由具有霧化氣套管的毛細(xì)管端流出，經(jīng)氮?dú)饬黛F化， 通過加熱管被氣化 后經(jīng)電暈尖端放電，溶劑分子被電離形成溶劑離子，然后霧化氣和這些溶劑分子與氣態(tài)樣品分子反應(yīng)，得到樣品分子的準(zhǔn)分子離子 特點(diǎn) 通常用于分析有一定揮發(fā)性的中等極性和弱極性 小分子化合物分析； 相較EPI對(duì)溶劑、流速和添加物的依賴性?。?適應(yīng)高流量的梯度洗脫或高低水溶液變化的流動(dòng)相； 通過調(diào)節(jié)離子源電壓控制離子的碎裂（源內(nèi)CID）測(cè)定化合物結(jié)構(gòu)。,質(zhì)量分析器,雙聚焦扇形磁場(chǎng)-電場(chǎng)串聯(lián)儀器(sector). 四極質(zhì)譜儀(Q). 離子阱質(zhì)譜儀（TRAP） 飛行時(shí)間質(zhì)

10、譜儀(TOF). (TOF) 傅里葉變換-離子回旋共振質(zhì)譜儀(FT-ICRMS). 四極+TOF（Q-TOF） 串列式多級(jí)質(zhì)譜儀三重四極（QqQ） (MS/MS) TOF+TOF,質(zhì)量分析器,.四極桿質(zhì)量分離器,質(zhì)量分析器,1.四極桿質(zhì)量分離器由四根平行的圓柱形電極組成，電極分兩組，分別加上直流電和具有一定振幅和頻率的交流電。當(dāng)來自離子源的樣品離子沿電極間軸向進(jìn)入電場(chǎng)后，會(huì)在極性相反的電極間產(chǎn)生振蕩。電極間軸向進(jìn)入電場(chǎng)后，會(huì)在極性相反的電極間產(chǎn)生振蕩。給定電壓條件下，只有沒m/z在某范圍的離子沿間軸線做有限振幅的穩(wěn)定的振蕩運(yùn)動(dòng) LC-MS(四極桿)聯(lián)用儀器結(jié)構(gòu)示意圖,2.離子阱質(zhì)量分析器,特定

11、m/z離子在阱內(nèi)一特定軌道上穩(wěn)定旋轉(zhuǎn)， 改變端電極電壓，不同m/z離子端電極電壓，不同離子飛出阱到達(dá)檢測(cè)器,3.飛行時(shí)間質(zhì)量分析器,-270v 負(fù)高壓,2.8kv 負(fù)高壓,抽真空,試樣 離子流,接 收 器,漂移時(shí)間,質(zhì)量分析器,4.串聯(lián)四極質(zhì)譜儀(MS/MS) 三重四極（QqQ） 離子源第一分析器 碰撞室 第二分析器接收器 MS1 MS2 Q1 Q2 Q3 優(yōu)點(diǎn)：質(zhì)譜的化學(xué)噪聲降低， 較單級(jí)分析有更高專屬性和 靈敏度； 缺點(diǎn)：質(zhì)量范圍及分辨率有限，不能進(jìn)行高分辨測(cè)定。,二 儀器的基本功能 離子極化方式 碰撞誘導(dǎo)裂解（CID）質(zhì)譜 掃描類型和掃描方式,離子極化方式 ESI中正、負(fù)離子方式： 中正

12、離子溶液中預(yù)先形成的，酸性分子形成負(fù)離子，堿性分子形成正離子； 正離子檢測(cè)方式下， 通常準(zhǔn)分子離子以質(zhì)子加合離子 或加合其他離子的形式存在。 離子極化方式 APCI中正離子方式： 中正離子方式 e + N2 N2+. + H2O H2O +. + H2O H3O+ + M APCI中負(fù)離子方式： 樣品的準(zhǔn)分子離子（M-H）-一般是OH-爭(zhēng)奪 樣品的準(zhǔn)分子離子（ 一般是OH 質(zhì)子而形成的 N2+. + e N2 + H2O +. H3O+ + HO. (M+H)+ + H2O,正、負(fù)離子模式的選擇： 選擇的一般原則為： ? 正離子模式：適合于堿性樣品，可用乙酸或甲酸 正離子模式： 對(duì)樣品加以酸化

13、。樣品中含有仲氨或叔氨時(shí)可優(yōu) 先考慮使用正離子模式。 ? 負(fù)離子模式：適合于酸性樣品，可用氨水或三乙 負(fù)離子模式： 胺對(duì)樣品進(jìn)行堿化。樣品中含有較多的強(qiáng)伏電性 基團(tuán)，如含氯、含溴和多個(gè)羥基時(shí)可嘗試使用負(fù) 離子模式。 碰撞誘導(dǎo)裂解（CID）譜 選擇一定質(zhì)量的離子作為母體離子進(jìn)入碰撞室，室內(nèi) 充有靶子反應(yīng)氣體，發(fā)生離子分子碰撞反應(yīng)，從而 產(chǎn)生子離子，再經(jīng)MS2的分析器及接受器得到子 離子質(zhì)譜，稱做CID (collision-induced dissociation)譜 碰撞氣體：N2、He、Ar、Xe、CH4等 目的：裂解某一或某些特定的分子離子，給出其碎 片離子從而獲得針對(duì)這一分子離子的結(jié)構(gòu)信

14、息,掃描類型和掃描方式,掃描類型： 全掃描（full scan） 提供樣品中每個(gè)分析物的全部質(zhì)譜 選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM） 用于痕量分析，專屬性遠(yuǎn)高于SIM 掃描方式： 子離子掃描（product ion scan） 母離子掃描（precursor ion scan） 中性丟失掃描（neutral loss scan）,LC-MS分析條件的選擇和優(yōu)化,1.接口的選擇,2.正、負(fù)離子模式的選擇,3.流動(dòng)相的選擇,4.流量和色譜柱的選擇,5.輔助氣體流量和溫度的選擇,LC-MS分析 條件的選擇 和優(yōu)化,LC-MS分析條件的選擇和優(yōu)化,1.接口的選擇： ESI 適合于中等極性到強(qiáng)極性的化合物分子，特別

15、是那 些在溶液中能預(yù)先形成離子的化合物和可以獲得多個(gè)質(zhì)子的大分子 （如蛋白質(zhì)） APCI 不適合可帶多個(gè)電荷的大分子，其優(yōu)勢(shì)在于弱極 性或中等極性的小分子的分析。 2.正、負(fù)離子模式的選擇： 選擇的一般原則為： 正離子模式：適合于堿性樣品，可用乙酸或甲酸對(duì)樣品加以酸化。樣 品中含有仲氨或叔氨時(shí)可優(yōu)先考慮使用正離子模式。 負(fù)離子模式：適合于酸性樣品，可用氨水或三乙胺對(duì)樣品進(jìn)行堿化。 樣品中含有較多的強(qiáng)伏電性基團(tuán)，如含氯、含溴和多個(gè)羥基時(shí)可嘗試 使用負(fù)離子模式。 3.流動(dòng)相的選擇 常用的流動(dòng)相為甲醇、乙腈、水和它們不同比例的混合物以及一些易 揮發(fā)鹽的緩沖液，如甲酸銨、乙酸銨等，還可以加入易揮發(fā)酸堿

16、如甲 酸、乙酸和氨水等調(diào)節(jié) pH 值。 LCMS 接口避免進(jìn)入不揮發(fā)的緩沖液，避免含磷和氯的緩沖液，含 鈉和鉀的成分必須lmmol/l。（鹽分太高會(huì)抑制離子源的信號(hào)和堵 塞噴霧針及污染儀器） 含甲酸 （或乙酸） 2。 含三氟乙酸0.5。 含三乙胺l。含醋酸銨10 一 5 mmol/l。 送樣前一定要摸好 LC 條件，能夠基本分離，緩沖體系符合 MS 要求。,4.流量和色譜柱的選擇 不加熱 ESI 的最佳流速是 150ulmin，應(yīng)用 4.6 mm 內(nèi)徑 LC 柱時(shí) 要求柱后分流，目前大多采用 l2.1 mm 內(nèi)徑的微柱，TIS 源最高允 許 lmlmin，建議使用 200400ulmin AP

17、CI 的最佳流速lmlmin，常規(guī)的直徑 4.6mm 柱最合適。 為了提高分析效率，常采用 100 mm 的短柱（此時(shí) UV 圖上并不能 獲得完全分離，由于質(zhì)譜定量分析時(shí)使用 MRM 的功能，所以不要求各 組分沒有完全分離）。這對(duì)于大批量定量分析可以節(jié)省大量的時(shí)間。 5.輔助氣體流量和溫度的選擇 霧化氣對(duì)流出液形成噴霧有影響，干燥氣影響噴霧去溶劑效果，碰撞氣影響二級(jí)質(zhì)譜的產(chǎn)生。 操作中溫度的選擇和優(yōu)化主要是指接口的干燥氣體而言， 一般情況下 選擇干燥氣溫度高于分析物的沸點(diǎn) 20 左右即可。對(duì)熱不穩(wěn)定性化 合物，要選用更低的溫度以避免顯著的分解。 選用干燥氣溫度和流量大小時(shí)還要考慮流動(dòng)相的組成，

18、 有機(jī)溶劑比例 高時(shí)可采用適當(dāng)?shù)偷臏囟群土髁啃∫稽c(diǎn)的。,樣品的預(yù)處理,樣品的預(yù)處理,從保護(hù)儀器角度出發(fā),從 ESI 電離的過程分析,防止固體小顆粒堵塞進(jìn)樣管道和噴嘴，防止污染 儀器，降低分析背景，排除對(duì)分析結(jié)果的干擾。 要求獲得最佳的分析結(jié)果,ESI 電荷是在液 滴的表面， 樣品與雜質(zhì)在液滴 表面存在競(jìng)爭(zhēng)， 不揮發(fā)物（如磷酸鹽等）防礙帶 電液滴表面揮發(fā)，大量雜質(zhì)防礙帶電樣品離子進(jìn) 入氣相狀態(tài)， 增加電荷中和的可能。,樣品的預(yù)處理,樣品的預(yù)處理常用方法 a）超濾 b）溶劑萃取去鹽 c）固相萃取 d）灌注（Perfusion）凈化去鹽 e）色譜分離 反相色譜分離 親和技術(shù)分離 f）甲醇或乙腈沉淀蛋

19、白 g）酸水解，酶解 h）衍生化 化合物鑒別 全掃描方式（Q1 掃描） 全掃描數(shù)據(jù)采集可以得到化合物的準(zhǔn)分子離子， 從而可判斷出化合 物的分子量， 用于鑒別是否有未知物， 并確認(rèn)一些判斷不清的化合物， 如合成化合物的質(zhì)量及結(jié)構(gòu)。 子離子分析（ MS/MS ） 子離子， 用于結(jié)構(gòu)判斷(得到化合物的二級(jí)譜圖即碎片離子)和選 擇離子對(duì)作多種反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。 子離子譜圖與錐體電壓斷裂譜圖（源內(nèi) CID）可能十分相似，所不 同的是子離子質(zhì)譜圖已知只有一種質(zhì)量通過 MS1，因此也已知所有碎 片離子都是由我們所選定的母離子所產(chǎn)生的，所以我們更相信由 MS/MS 產(chǎn)生的譜圖的純度。 用大氣壓電離質(zhì)譜儀可以

20、得到分子量信息,三LC-MS技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用,藥物代謝研究 天然產(chǎn)物天然藥物的研究 中草藥成分分析， 中藥指紋圖譜研究 體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究 藥物篩選研究,藥物代謝研究,藥物代謝與藥物動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)上的最新重大進(jìn)展是LC-MS-MS 的使用，電噴霧 （ESI）和大氣壓化學(xué)電離（APCI）以及大氣壓光電離（APPI）是其主要的離子源，由于具有高靈敏度（ng/mlpg/ml），高選擇性（檢測(cè)特定的碎片離子）、高效率（每天可檢測(cè)幾百個(gè)生物樣品和對(duì)藥物結(jié)構(gòu)的廣泛適用性，對(duì)液態(tài)樣品和混合樣品的分離能力高，可通過二級(jí)離子碎片尋找原型藥物并推導(dǎo)其結(jié)構(gòu)，LC-ESI-MS-MS 已廣泛地應(yīng)用于藥物代謝研究

21、中一期生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)和二期結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)物的鑒定、復(fù)雜生物樣品的自動(dòng)化分析以及代謝物結(jié)構(gòu)闡述等，已在世界上大型制藥企業(yè)中取代 HPLC而占據(jù)了主導(dǎo)地位，其測(cè)試的樣品量占總量的 70%以上。,天然產(chǎn)物天然藥物的研究,目前中藥開發(fā)研究有兩條途徑。一條途徑是從單一植物中提取一種有效成分(單體化合物)或提取物開發(fā)成新藥。 另一途徑則是中藥復(fù)方制 劑的開發(fā)研究。 采用現(xiàn)代多種儀器聯(lián)用新技術(shù)， 特別是高效液相色譜/質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用 (HPLC-MS/MS)， 可對(duì)其十幾種乃至幾十種化學(xué)成分進(jìn)行指紋圖譜分離 鑒定。再?gòu)闹讣y圖譜中選擇四、五種指標(biāo)成分(有效成分或特征成分) 進(jìn)行定量，可以確定出簡(jiǎn)化的指紋圖譜和指標(biāo)成分

22、，又是最合理的中藥復(fù)方質(zhì)量控制的方法，是研究中藥復(fù)雜體系，尤其是復(fù)方的有力工具。國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者已進(jìn)行了復(fù)方丹參、清開靈、瀉心湯、人參或黨參制劑等中藥中的主要成分的分析。,臨床診斷和疾病生物標(biāo)志物的分析,歐美等目前已廣泛采用 HPLC/MS/MS 法用于臨床診斷以及疾病生物標(biāo) 志物的研究、檢測(cè)，具有專一性好、靈敏度高、成本低、分析快速， 經(jīng)濟(jì)效益可觀等特點(diǎn)。目前可進(jìn)行新生兒遺傳疾病篩選（PKU、MCAD 等四十種左右）、新生兒性激素變異的檢測(cè)、男女激素的監(jiān)測(cè)、老年 癡呆癥的早期診斷、抗排異藥物的檢測(cè)、磷酸脂的檢測(cè)、血紅蛋白變 異檢測(cè)、糖化血紅蛋白（糖尿病早期檢測(cè)）、某些心臟病、癌癥疾病 篩查如乳

23、腺癌等等（Biomarker 法、通過鑒定 DNA 損傷程度測(cè)定）、 藥物劑量監(jiān)測(cè)、藥物相互作用監(jiān)測(cè)、地區(qū)性突發(fā)性中毒病人的毒物檢 測(cè)等。,殘留、法醫(yī)學(xué)和環(huán)境樣品測(cè)定,專家指出，中國(guó)入世后，食品工業(yè)最大的問題就是安全壁壘，這將 給中國(guó)的進(jìn)出口和國(guó)內(nèi)企業(yè)帶來極大的威脅。 美國(guó)食品與藥品管理局 (FDA)、歐盟、日本、韓國(guó)等主要貿(mào)易國(guó)和地區(qū)公布了在進(jìn)口動(dòng)物源 性食品中禁止使用的藥物名單，提高了最高限量標(biāo)準(zhǔn)。這就要求中國(guó) 加強(qiáng)農(nóng)、畜、水產(chǎn)品中的農(nóng)藥、獸藥等殘留的控制和檢測(cè)。 同樣隨著人類對(duì)生存環(huán)境的倍加關(guān)注，要求對(duì)環(huán)境中各種污染物、有 害或有毒物以及法庭科學(xué)中毒物、濫用藥物等進(jìn)行更加嚴(yán)格的監(jiān)控。 而

24、配以 ESI、APCI 和 APPI 離子化技術(shù)的 LC/MS/MS 以分析速度快、靈 敏度高、特異性好等特點(diǎn)廣泛應(yīng)用與殘留和毒物分析。目前已成功地 進(jìn)行數(shù)百種農(nóng)藥、獸藥、抗生素、興奮劑類殘留和毒物、毒素如氯霉 素、磺胺類、硝基呋喃類、毒品、多環(huán)芳烴等等化合物的檢測(cè)。,下面講解應(yīng)用示例-高效液相色譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定清開靈復(fù)方中膽酸,采用 HPLC/MS/MS 技術(shù)，從清開靈注射液中，通過分子量、二級(jí)質(zhì)譜 碎片信息定性測(cè)定了清開靈復(fù)方中的膽酸。 直接進(jìn)樣實(shí)驗(yàn)。清開靈注射液經(jīng)過初步化學(xué)處理后采用電噴霧（ESI） 離子源，在負(fù)離子掃描方式下，得到一極質(zhì)譜圖、即分子離子峰 M-H-，再用二級(jí)質(zhì)譜（

25、MS/MS）掃描目標(biāo)分子離子的碎片峰。再以相同的實(shí)驗(yàn)條件對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測(cè)定，做出其一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜圖。通過對(duì)樣品進(jìn)行分子離子峰的掃描發(fā)現(xiàn)M-H-的峰中有一個(gè)很強(qiáng)的 407，根據(jù)樣品處理過程以及對(duì)復(fù)方各單味藥材的研究，其應(yīng)該為一 有機(jī)酸的負(fù)離子峰，并初步推斷其為膽酸。（膽酸的分子量為 408）。 如圖所示：通過對(duì)照樣品(右)和標(biāo)準(zhǔn)品（左）的二級(jí)質(zhì)譜圖，發(fā)現(xiàn)其 主要碎片峰均吻合較好。,如何用 API LC-MS/MS 檢測(cè)硝基呋喃類代謝物,第一步：配制衍生化后的硝基呋喃代謝物標(biāo)準(zhǔn)溶液，乙腈/水體系， 濃度 10PPM 確認(rèn)儀器已經(jīng)校準(zhǔn)，氣體、電壓工作正常。 測(cè)試條件： 離子化方式: ESI+ 進(jìn)樣 5ul/min， Q1 SCAN 觀察 M/Z 335，236，249，209 及同位素內(nèi) 標(biāo)峰，通過調(diào)節(jié) DP，使這幾個(gè)峰最強(qiáng)。 注意：1 如買來的是已經(jīng)衍生化的標(biāo)準(zhǔn)