1、實(shí)驗(yàn)須知,(biochemistry),基本操作,一、玻璃儀器的洗滌與清潔,（一）新購(gòu)玻璃儀器的清洗：新購(gòu)來的玻璃儀器，其表面附有游離質(zhì)，可先用肥皂水洗側(cè)，再用流水沖洗，浸泡 1 - 2 % Hcl 中過夜，再用流水沖洗，最后用蒸餾水沖洗2 - 3 次，在干燥箱中烤干，或晾干備用。,一、玻璃儀器的洗滌與清潔,（二）使用過的玻璃儀器清洗：1 一般玻璃儀器：如試管、燒杯、錐形瓶等，先用自來水洗刷至無污物，再選用大小合適的毛刷故洗衣粉或肥皂水，將器皿內(nèi)外壁細(xì)心刷洗，再用自來水沖洗干凈，洗至容器內(nèi)壁光潔不掛水珠為止，最后用蒸餾水沖洗2 一3 次，倒置在清潔處晾干，急用時(shí)可用干燥箱烤干。,一、玻璃儀器的

2、洗滌與清潔,2 容量?jī)x器：吸量管、滴定管、容量瓶等，使用后應(yīng)立即浸泡于清水中，勿使沾污物質(zhì)干涸，并及時(shí)用流水沖洗干凈，稍干后再用鉻酸洗液浸泡數(shù)小時(shí)，然后用自來水反復(fù)沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗2 一3 次，晾干備用。,一、玻璃儀器的洗滌與清潔,3 比色杯：用畢立即用自來水反復(fù)沖洗干凈，如洗不凈時(shí)，可用鹽酸或適當(dāng)溶劑沖洗，再用自來水沖洗干凈切忌用試管刷或粗糙的布或紙擦洗，以免損壞比色杯透光度，亦應(yīng)避免用較強(qiáng)的堿液或強(qiáng)氧化劑清洗，洗凈后倒置晾干備用,二、吸量管的種類和使用,（一）分類生化常用的吸管有三類：1 奧氏吸量管： 供準(zhǔn)確量取0.5mL 、1mL 、2 mL液體時(shí)用。每根吸管上只有一個(gè)刻度，放

3、液時(shí)必須吹出最后殘留在吸量管尖端的液體。,二、吸量管的種類和使用,2 移液管：供準(zhǔn)確量取5mL 、10mL 、25mL 等較多體積液體時(shí)用。每根吸量管上只有一個(gè)刻度，放出液體流畢后，將吸量管尖在容器內(nèi)壁上繼續(xù)停留15 秒，注意不要吹出尖端內(nèi)的最后部分,二、吸量管的種類和使用,3 刻度吸量管：供量取10ml以下的任意體積的液體時(shí)用。每根吸量管上都有許多等分刻度，一般刻度包括尖端部分，欲將所量取液體全部放出時(shí)，須將殘留管尖的液體吹出。在吸量管的上端常標(biāo)有吹字，此類吸量管又稱全流出式。,（二）吸量管的使用,1 選擇：使用前先根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)奈抗?，刻度吸量管的總?cè)萘孔詈玫扔诨蛏源笥谧畲笕∫毫颗R用前

4、要看清容量和刻度 2 執(zhí)管：用拇指和中指（輔以無名指），拿住吸管上部，用食指堵住管上口和控制液流刻度數(shù)字要對(duì)向自己。,3 取液：另一只手捏壓橡皮球，將吸量管擂入液體內(nèi)（不得懸空，以免液體吸入球內(nèi)），用橡皮球?qū)⒁后w吸至最高刻度上端 1 一2cm 處，然后迅速用食指按緊管上口，使液體不致于從管下口流出。 4 調(diào)準(zhǔn)刻度：將吸量管提出液面，吸粘性較大的液體時(shí)，先用毽紙擦干管尖外壁，然后用食指控制液流使之緩慢下降至所需刻度（此時(shí)液體凹面、視線和刻度應(yīng)在同一水平面曰，立即按緊吸量管上口,5 放液：放松食指，讓液體自然流入受器內(nèi)，放液時(shí)，管尖最好接觸受器內(nèi)壁，但不要擂入受器內(nèi)原有的液體中，以免污染吸量管和試

5、劑。6 洗滌：吸血液、血清等粘稠液體及標(biāo)本(尿液）的吸量管，使用后要及時(shí)用自來水沖洗干凈。吸一般試劑的吸量管可不必馬上沖洗，實(shí)驗(yàn)完畢后再?zèng)_洗。沖洗干凈后，晾干去水分，再浸泡于鉻酸洗液中，數(shù)小時(shí)后取出，再用流水沖凈，最后用蒸餾水沖洗，晾干備用,四、溶液的混勻,（一）旋轉(zhuǎn)混勻法用手持容器，使溶液作離心旋轉(zhuǎn)，適用于未盛滿液體的試管或小n 器皿，如錐形瓶。旋轉(zhuǎn)試管時(shí)最好用手腕旋轉(zhuǎn)。 （二）指彈混勻法左手持試管七端，用右手指輕軒彈動(dòng)試管下部，使管內(nèi)溶液作旋渦運(yùn)動(dòng),（三）倒轉(zhuǎn)混勻法適用于有塞量筒和容量瓶、試管內(nèi)容物的混勻。一般試管內(nèi)容物的混勻可用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口倒轉(zhuǎn)混勻。 （四）吸盤管混勻

6、法用吸最管將溶液反復(fù)吸放數(shù)次，使溶液充分混勻。 （五）玻棒攪動(dòng)法適用于燒杯內(nèi)容物的混勻，如固體試劑的溶解和混勻,（六）甩動(dòng)混勻法右手持試管上部，輕輕甩動(dòng)振搖，即可混勻 （七）電磁攪拌混勻法在電磁攪拌機(jī)上放置燒杯，在燒杯內(nèi)放人封閉于玻璃或塑料管中的小鐵棒，利用磁力使小鐵棒旋轉(zhuǎn)以達(dá)到混勻杯中液體的目的。適用于酸堿自動(dòng)滴定，梯度滴定等。 （八）振蕩器混勻法利用振蕩器使容器中的內(nèi)容物振蕩，達(dá)到混勻的目的,五、過濾,是分離沉淀和池液的一種方法，可用于收集濾液，收集或洗滌沉淀。生化實(shí)驗(yàn)的過德，操作與化學(xué)相同，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：（一）制備血濾液等實(shí)驗(yàn)過濾時(shí)，要用干擄紙而不能用水把濾紙先弄濕，因?yàn)闈駷V紙會(huì)影響血

7、液稀釋的體積。（二）折疊濾紙的角度應(yīng)與漏斗相合，使濾紙上緣能與漏斗壁完全吻合，不留縫隙。一般采用平折法（即對(duì)折后再對(duì)折）。,五、過濾,（三）向漏斗中加溶液時(shí)最好使用玻棒引流，倒人速度不要太快，不得使液面超過濁紙上緣。 （四）較粗的過濾可用脫脂棉或紗布代替濾紙，有時(shí)可用離心沉淀法代替過濾法,六、離心機(jī)的使用方法,欲使沉淀與母液分開，過濾和離心都可達(dá)到目的，但當(dāng)沉淀粘稠，或穎粒大小能通過濾紙，總?cè)葑钐儆指宥繙y(cè)定時(shí)，使用離心沉淀法比過濾法要好使用離心機(jī)前，應(yīng)先栓查離心機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)狀態(tài)是否平穩(wěn)，以確定離心機(jī)的性能，檢查套管與離心管大小是否相配，套管是否鋪好軟墊（用棉花、或橡皮）套管底部有無碎玻片或漏孔（

8、碎玻片必須取出，漏孔須修補(bǔ)好）。,六、離心機(jī)的使用方法,檢查合格后，將一對(duì)離心管放人一對(duì)套管中，然后連交管一起分置粗天平兩側(cè)，用滴管向較輕的一側(cè)離心管與套管之間加水，直至天平兩側(cè)彼此相等為止。將各對(duì)已平衡的套管連同內(nèi)容物放投于離心機(jī)內(nèi)，兩個(gè)等重的管必須放于對(duì)稱位置放妥后，接通電源開關(guān)，逐步扭動(dòng)轉(zhuǎn)速旋鈕，緩慢增加離心機(jī)轉(zhuǎn)速，直至所濡的轉(zhuǎn)速。達(dá)規(guī)定時(shí)間后將轉(zhuǎn)速旋鈕逐步回零，待離心機(jī)停穩(wěn)后，取出離心管, 吸光分析, 原理 光的本質(zhì)是電磁波的一種，有不同的波長(zhǎng)。 400nm的光線 （紫外線） 400750nm的光線（可見光） 750nm的光線（紅外線）,光線通過透明溶液介質(zhì)時(shí)，其輻射的波長(zhǎng)一部分被吸收

9、，一部分透過，因此光線射出溶液后，部分光波減少?？衫萌芤簩?duì)光線的吸收和透過的特性進(jìn)行物質(zhì)的定性定量分析。如：可見光通過有色溶液，或紅外線通過多種氣體時(shí)，部分被吸收。,T =I/I0100% A =-logT T(透光度）A(吸光度）,T和A的關(guān)系：T越大，則A越小；T越小則A越大。A與溶液的性質(zhì)（溶質(zhì)），溶液的濃度，溶液的厚度等密切相關(guān)，它們之間的關(guān)系可用Lambert-Beer 定律表示：,Lambert-Beer定律 A=KCl or A=Cl K（吸光常數(shù)）C（溶液濃度）L（溶液厚度） K的定義:與C、l無關(guān)，表示的是單位濃度的溶液，單位厚度的比色皿中，在一定波長(zhǎng)下的吸光度。 （與溶質(zhì)

10、、溫度、入射波長(zhǎng)及儀器等相關(guān)，這些條件一定時(shí)為常數(shù)。 K的單位：C為g/L，K為吸光率 C 為mol/L,k為摩爾吸光率，用表示,A與入射光線波長(zhǎng)()的關(guān)系 溶液對(duì)光線有選擇性地吸收作用，對(duì)不同波長(zhǎng)的光線的吸收能力不同，即物質(zhì)對(duì)某一波長(zhǎng)的光線有最大吸收（最大吸收波長(zhǎng)max）。 Lambert-Beer公式是吸光分析進(jìn)行物質(zhì)定量測(cè)定中用到的基本公式，通過公式我們可由測(cè)得的A來推算出溶液的濃度C。, 吸光分析的計(jì)算 公式法： 樣品量少時(shí)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管求未知溶液的濃度或含量 標(biāo)準(zhǔn)管：與被測(cè)溶液物質(zhì)相同，濃度已知（CS） 樣品管：濃度未知（CX） 標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管同樣處理后讀取吸光度，測(cè)得AS,AX,CX

11、=CSAX/AS, 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 樣本量大時(shí)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求物質(zhì)的含量或濃度 作法：一為樣品管（濃度未知CX）； 配置5-10個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按一定操作方法處理顯色后，最大波長(zhǎng)讀取吸光度，得到A1-A5以溶液濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，若被測(cè)物質(zhì)對(duì)光的吸收符合Lambert-Beer公式,則得到一條通過原點(diǎn)的直線，即標(biāo)準(zhǔn)曲線也稱工作曲線,Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線 721型分光光度計(jì)，2006年9月13日,注意事項(xiàng)： 作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線至少要5個(gè)點(diǎn)，為減少誤差每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管應(yīng)作2個(gè)平行管 一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果測(cè)定條件（試劑、方法、儀器等）不變，可供多次使用，否則應(yīng)重新繪制。 被測(cè)物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)用相同的方法、試劑、儀器和溫度 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)