1、第37講克隆技術(shù)考試標(biāo)準(zhǔn)知識(shí)含量附加測(cè)試要求第二，克隆技術(shù)1.植物克隆2.動(dòng)物克隆ba在試驗(yàn)中心1克隆一株植物1.植物組織培養(yǎng)(1)理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞的全能性。(2)程序：制備半固體培養(yǎng)基切割小組織塊獲得愈傷組織再生新植株。2.植物細(xì)胞培養(yǎng)和器官培養(yǎng)的措施它由平衡的植物激素比例調(diào)節(jié)。(1)適當(dāng)比例的激動(dòng)素和細(xì)胞分裂素可以誘導(dǎo)芽分化。(2)適量的吲哚乙酸和其他激素能誘導(dǎo)生根。3.原生質(zhì)體培養(yǎng)與植物細(xì)胞工程(1)原生質(zhì)體獲得方法：在0.5 0.6摩爾/升甘露醇溶液環(huán)境(高滲透壓)下，用纖維素酶和果膠酶的混合溶液處理根尖、葉片、愈傷組織或懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，去除細(xì)胞壁，獲得球形原生質(zhì)體。(2)植物細(xì)胞工程

2、的操作流程具有外源遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的新植株(3)細(xì)胞產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)：生產(chǎn)一些重要的細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物(如一些中藥)。診斷和思考1.判斷下列陳述是對(duì)還是錯(cuò)(1)可以誘導(dǎo)棉花根尖細(xì)胞形成幼苗，反映細(xì)胞全能性()(2)植物的每個(gè)細(xì)胞都可以在體內(nèi)和體外顯示細(xì)胞的全能性()(3)在誘導(dǎo)菊花莖段形成試管苗的過(guò)程中，不會(huì)發(fā)生細(xì)胞增殖和分化()(4)愈傷組織是由外植體的去分化和再分化形成的()(5)用纖維素酶和果膠酶水解獲得的植物原生質(zhì)體失去其全能性()2.改善植物組織、細(xì)胞、器官培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)之間的關(guān)系3.改進(jìn)植物細(xì)胞工程的操作流程圖主題群植物的組織培養(yǎng)和克隆技術(shù)的應(yīng)用1.以下關(guān)于植物克隆的敘述是錯(cuò)

3、誤的()A.單倍體可以通過(guò)離體花藥培養(yǎng)獲得B.器官發(fā)生可以通過(guò)平衡植物激素種類來(lái)實(shí)現(xiàn)C.中藥成分如人參皂苷可以通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生d .誘變、培養(yǎng)和篩選植物愈傷組織，獲得新品種回答乙據(jù)分析，器官發(fā)生和形態(tài)發(fā)生可以通過(guò)平衡植物激素來(lái)調(diào)節(jié)。2.下圖顯示了植物組織培養(yǎng)的過(guò)程。根據(jù)圖分析，下列說(shuō)法是正確的()A.植物根尖細(xì)胞的全能性強(qiáng)于植物根尖細(xì)胞B.試管培養(yǎng)基含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，不含有機(jī)物C.試管中的細(xì)胞具有細(xì)胞質(zhì)豐富、細(xì)胞核大、空泡多的特點(diǎn)D.可以通過(guò)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的比例來(lái)誘導(dǎo)不同的植物器官答案D分析因?yàn)槭怯缮系慕M織形成的個(gè)體，兩者的全能性應(yīng)該是相同的，而A是錯(cuò)誤的；在從到的過(guò)程中，植物細(xì)

4、胞不能進(jìn)行光合作用，所以試管中含有蔗糖等有機(jī)物，所以B是錯(cuò)誤的；試管中的細(xì)胞是小液泡的愈傷組織細(xì)胞，所以C是錯(cuò)誤的。無(wú)所不能的，體現(xiàn)(實(shí)現(xiàn))無(wú)所不能的(1)全能性：理論上，活細(xì)胞是全能性的。(2)體現(xiàn)全能性：只有發(fā)展成為完整的個(gè)體，才能實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的全能性。在測(cè)試中心2克隆動(dòng)物1.動(dòng)物細(xì)胞和組織培養(yǎng)(1)動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞和組織培養(yǎng)。(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)包括三個(gè)階段：切割組織塊、分散組織細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)。機(jī)械消化和胰酶消化通常用于分散組織細(xì)胞。(3)初級(jí)文化和亞文化的含義原代培養(yǎng)：從體內(nèi)取出后立即進(jìn)行細(xì)胞和組織培養(yǎng)的過(guò)程。傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分成幾部分，接種到幾部分培

5、養(yǎng)基中，使其能夠繼續(xù)生長(zhǎng)和增殖。(4)動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程：組織切片胰蛋白酶酶解原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)。2.細(xì)胞系和細(xì)胞株(1)細(xì)胞系類型：連續(xù)細(xì)胞系(惡性細(xì)胞系：同種異體致瘤性；永生細(xì)胞系：保持接觸抑制現(xiàn)象，不致癌)和有限細(xì)胞系。(2)細(xì)胞株：通過(guò)某種選擇或純化方法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞。它可以分為連續(xù)細(xì)胞系和有限細(xì)胞系。3.克隆培養(yǎng)法(1)概念：將單個(gè)細(xì)胞從群體中分離出來(lái)，并分別培養(yǎng)，使其繁殖成新的細(xì)胞群體的技術(shù)。(2)基本要求：必須確認(rèn)克隆來(lái)自單個(gè)細(xì)胞。(3)提高細(xì)胞克隆形成率的措施如下：(1)選擇合適的培養(yǎng)基；加入血清；用滋養(yǎng)層支持生長(zhǎng)；激素刺激；使用CO2培養(yǎng)箱

6、；調(diào)節(jié)酸堿度.4.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)及其應(yīng)用(1)細(xì)胞融合概念：指在一定條件下，將兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。原理：細(xì)胞膜流動(dòng)性。誘導(dǎo)融合的方法A.物理方法和化學(xué)方法：電激發(fā)法、聚乙二醇等。生物方法：滅活病毒(如仙臺(tái)病毒)。(2)細(xì)胞雜交概念：不同基因型細(xì)胞間的融合是細(xì)胞雜交。過(guò)程應(yīng)用：由于染色體在細(xì)胞雜交中容易丟失，基因定位可以通過(guò)檢測(cè)特定染色體丟失與雜交細(xì)胞特定基因產(chǎn)物(蛋白)減少之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系來(lái)進(jìn)行。(3)雜交瘤技術(shù)及單克隆抗體制備工藝(1)根據(jù)上圖改進(jìn)以下流程：為什么選擇B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合？答：選擇B淋巴細(xì)胞：如果采用單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖形成一個(gè)細(xì)胞群，這樣的細(xì)

7、胞群可以產(chǎn)生化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。b .選擇骨髓瘤細(xì)胞：在體外培養(yǎng)條件下，腫瘤細(xì)胞(如骨髓瘤細(xì)胞)具有無(wú)限增殖的特點(diǎn)。5.動(dòng)物的克隆和繁殖(1)動(dòng)物細(xì)胞全能性的表達(dá)程度受精卵是全能的。多能細(xì)胞只有分化成各種組織細(xì)胞的潛力。單基因細(xì)胞只能分化為一種細(xì)胞。高分化細(xì)胞不再分化為其他細(xì)胞。(2)動(dòng)物難以克隆的根本原因在動(dòng)物個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞分化導(dǎo)致細(xì)胞中基因的差異表達(dá)，細(xì)胞基因組中基因的活性非常不完全。(3)核移植實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物克隆與繁殖核移植：用一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核代替另一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，形成一個(gè)重建的“合子”。動(dòng)物的克隆和繁殖診斷和思考1.判斷下列陳述是對(duì)還是錯(cuò)(1)連續(xù)細(xì)胞系的大多數(shù)細(xì)胞具有二

8、倍體核型()(2)制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，首先用剪刀切割肝組織，然后用胃蛋白酶處理()(3)在肝細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，通常向培養(yǎng)基中引入5%的CO2以刺激細(xì)胞呼吸()(4)與克隆羊等哺乳動(dòng)物相關(guān)的技術(shù)包括胚胎移植、細(xì)胞培養(yǎng)和核移植()(5)植物原生質(zhì)體融合和動(dòng)物細(xì)胞融合的原理相同()(6)在體內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，以獲得能夠產(chǎn)生單克隆抗體的胚胎()2.比較細(xì)胞系和細(xì)胞系的列表方法類型來(lái)源特征克隆有限細(xì)胞系通常通過(guò)二倍體細(xì)胞的傳代培養(yǎng)來(lái)建立接觸抑制；無(wú)法持續(xù)培養(yǎng)連續(xù)細(xì)胞系通過(guò)傳代細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)構(gòu)建發(fā)生了轉(zhuǎn)化，且大多數(shù)具有非整倍體核型。有些具有同種異體致瘤性；有些是不朽的，但不是致癌的細(xì)胞系有限細(xì)胞應(yīng)變通過(guò)某些選

9、擇或純化方法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞通道數(shù)量有限一般來(lái)說(shuō)，它具有恒定的核型、同工酶類型、病毒敏感性和生化特性連續(xù)細(xì)胞系它可以連續(xù)傳遞多次3.在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，也有必要分散動(dòng)物細(xì)胞，這類似于觀察植物細(xì)胞在有絲分裂中的解離。這兩種治療方法的最大區(qū)別是什么？在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，動(dòng)物細(xì)胞經(jīng)處理后仍保持活性。然而，在植物細(xì)胞的解離過(guò)程中，細(xì)胞被解離液殺死并失去活性。4.通過(guò)動(dòng)物體細(xì)胞核移植獲得的克隆動(dòng)物的遺傳物質(zhì)與供體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)完全相同嗎？提示并不完全一樣。核遺傳物質(zhì)是相同的，但是細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)幾乎與提供去核卵的個(gè)體相同(在分析遺傳物質(zhì)的來(lái)源時(shí)，我們必須注意核遺傳物質(zhì)和細(xì)胞

10、質(zhì)遺傳物質(zhì)之間的區(qū)別)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)分析、單克隆抗體制備及動(dòng)物克隆和繁殖過(guò)程1.以下關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的說(shuō)法是正確的()A.大多數(shù)連續(xù)細(xì)胞系的細(xì)胞具有二倍體核型B.在適當(dāng)?shù)臈l件下，一些癌細(xì)胞可以轉(zhuǎn)化為正常細(xì)胞通過(guò)培養(yǎng)多個(gè)祖細(xì)胞形成的細(xì)胞群是克隆沒(méi)有克隆培養(yǎng)的細(xì)胞系的細(xì)胞具有相同的特征回答乙連續(xù)細(xì)胞系的大多數(shù)細(xì)胞具有非整倍體核型；癌細(xì)胞仍可逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞，如小鼠致畸癌細(xì)胞可分化為各種正常體細(xì)胞；普通祖細(xì)胞培養(yǎng)形成的細(xì)胞群為克隆；未經(jīng)克隆培養(yǎng)的細(xì)胞系是異質(zhì)的。2.以下對(duì)制備單克隆抗體過(guò)程示意圖的描述不正確()A.表示免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞是從小鼠脾臟中提取的B.促進(jìn)細(xì)胞融合的方法可由聚乙二醇介

11、導(dǎo)中的篩選是通過(guò)抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行的D.可以無(wú)限增殖回答一免疫B淋巴細(xì)胞可從小鼠脾臟或血漿中提取，骨髓瘤細(xì)胞可從小鼠骨髓中提取。單克隆抗體是用免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞獲得的，融合方法可以是化學(xué)法聚乙二醇、生物法滅活病毒等。如果我們想篩選能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群，我們可以檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)，如果有反應(yīng)，就意味著抗體產(chǎn)生了。融合細(xì)胞具有親本的特征，不僅可以無(wú)限增殖，還可以產(chǎn)生單個(gè)抗體。3.這張照片顯示了哺乳動(dòng)物的生殖過(guò)程。其中b是卵細(xì)胞，c是體細(xì)胞。以下陳述不正確()A.動(dòng)物 的形成過(guò)程分別屬于有性生殖和無(wú)性生殖B.基因突變、基因重組等。可能發(fā)生在生產(chǎn)動(dòng)物的過(guò)程中C.動(dòng)物的產(chǎn)生表明動(dòng)物細(xì)胞核是全能的D.在甲、乙、丙細(xì)胞的形成過(guò)程中，只有丙細(xì)胞是有絲分裂的回答乙分析動(dòng)物由受精形成，屬于有性生殖，動(dòng)物通過(guò)核移植技術(shù)的形成和利用原理是動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性，動(dòng)物的形成過(guò)程屬于無(wú)性繁殖，A和C是正確的；a細(xì)胞和B細(xì)胞分別由精原細(xì)胞和卵原細(xì)胞減數(shù)分裂形成，C細(xì)胞是體細(xì)胞，由有絲分裂形成，D細(xì)胞是正確的。在生產(chǎn)動(dòng)物的過(guò)程中沒(méi)有基因重組，所以B是錯(cuò)誤的。單克隆抗體制備中幾個(gè)問(wèn)題的分析(1)對(duì)動(dòng)物免疫的原因：B淋巴細(xì)胞必須經(jīng)歷一個(gè)免疫過(guò)程，即與抗原接觸，增殖并分化為具有特定免疫功能的B淋巴細(xì)胞，然后才能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。因此，與骨髓瘤細(xì)