1、項目六 無菌和無菌操作技術,無菌：沒有活的微生物存在的狀態(tài)。 無菌操作技術：用于防止微生物進入無菌范圍造成污染的操作技術。,一、無菌的環(huán)境 二、無菌的器具、培養(yǎng)基 三、無菌操作技術 四、基本規(guī)則,一、無菌的環(huán)境,1、無菌室 2、超凈工作臺 3、生物安全柜 4、火焰周圍,1、無菌室,標準無菌室的要求： 房間設置（外面有緩沖室）、空氣過濾、墻面、墻角、微生物操作相關設備、紫外燈等。,無菌室布局,如條件有限，可在微生物實驗室內專辟一個小房間作為無菌室?？梢杂冒宀暮筒ＡЫㄔ?，面積4-5 平方米即可。,板材和玻璃隔出的無菌室,2、超凈工作臺,超凈工作臺是一種提供局部無塵無菌工作環(huán)境的垂直單向流型空氣凈化

2、設備。,超凈工作臺,3、生物安全柜,生物安全柜外形與超凈臺類似，也提供局部無塵無菌工作環(huán)境。但它設置了風槽，氣流不會吹向使用者，可以有效保護使用者。,生物安全柜,4、火焰周圍,通常使用酒精燈、煤氣燈，其火焰周圍是無菌區(qū)域（直徑10cm左右）。 這并不是利用高溫殺死細菌，而是利用向上的單向氣流形成一個無菌區(qū)域。,火焰周圍是無菌區(qū)域,二、無菌的器具、培養(yǎng)基,1、玻璃、金屬等器具 干熱滅菌法 2、玻璃、金屬、含水物品 高壓蒸汽滅菌法 3、金屬、玻璃器具 火焰滅菌法 4、液體或水溶性物質 過濾除菌法,1、玻璃、金屬等器具-干熱滅菌法,設備：電烘箱 用途：用于玻璃器皿、金屬器具等耐熱物品的烤干和滅菌。

3、條件：160-165，滅菌 1-2小時。,2、玻璃、金屬、含水物品等-高壓蒸汽滅菌法,設備：高壓蒸汽滅菌鍋 用途：培養(yǎng)基、生理鹽水、廢棄物、采樣器、紗布、衣物的滅菌。 條件：121 水蒸氣 15分鐘,培養(yǎng)基一般使用高壓蒸汽滅菌法,3、一些金屬、玻璃器具-火焰滅菌法,即在火焰外焰上灼燒進行滅菌。 用途：接種環(huán)、接種針；涂布器；試管管口、錐形瓶瓶口等的滅菌。,4、液體或水溶性物質-過濾除菌法,器具：細菌過濾器 用途：不耐高溫的液體、水溶性物質的除菌。,細菌過濾器,三、無菌操作技術,我們通過一定的技術來保證目的微生物、培養(yǎng)基不被環(huán)境微生物污染，這些技術就是無菌操作技術。 包括手部清潔消毒，用接種針、

4、接種環(huán)、吸量管、涂布棒等工具進行各種操作等等。,1、手部清潔消毒,洗手：手部有可見灰塵時、飯前、便后，用水和肥皂洗手； Handrub（揉手）：手部較清潔時，75%乙醇或者醇基消毒劑揉手。,動作：手掌-手背-指縫-手指-拇指-指尖-手腕,2、培養(yǎng)皿操作,培養(yǎng)皿開合：單手打開和蓋上皿蓋， 包括持皿法和皿加法兩種。 此操作用于制作培養(yǎng)基平板、接種等。,持皿法,皿加法,3、接種環(huán)操作,包括灼燒接種環(huán)、接種、劃線等。,灼燒接種環(huán) 先斜放外焰灼燒接種環(huán)，然后垂直放置后繼續(xù)灼燒，再斜燒金屬桿。 現(xiàn)在紅外接種環(huán)滅菌器使用也比較廣泛。,紅外接種環(huán)滅菌器,用接種環(huán)進行接種,用接種環(huán)進行劃線,4、涂布棒操作,灼燒滅菌： 可以沾酒精然后灼燒，灼燒范圍要包括其桿部。,涂布： 將菌液滴在培養(yǎng)基表面中央。右手拿涂布棒將菌液沿一條直線來回推動，然后沿一垂直線來回推動，平板邊緣處可改變方向再涂幾次。,涂布,5、試管操作,單試管操作 （注意左右手的使用）,雙試管操作,四、基本規(guī)則,不得留長指甲，頭發(fā)需扎好； 無