1、血清總蛋白、白蛋白測定（Serum total protein、Albumin test）,臨床生物化學(xué)： 是研究機(jī)體健康和疾病的生物化學(xué)過程。測定體液或組織中的成份以提供對疾病的診斷、治療和預(yù)防。,所用樣品： 血液（血清/血漿）、尿液、腦脊液及體液,測定方法： 凱氏定氮法、雙縮脲法、酚 試劑法、紫外分光光度法、染料 結(jié)合法、比濁法等。,總蛋白測定（一）、 凱氏定氮法 歷史悠久，它是根據(jù)蛋白質(zhì)平均 含氮量16%來計(jì)算蛋白質(zhì)濃度的。 結(jié)果準(zhǔn)確，但方法復(fù)雜 標(biāo)化血清 檢驗(yàn)其他方法,（二）、 雙縮脲法 蛋白質(zhì)中的肽鍵在堿性環(huán)境中能與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物。此反應(yīng)和2個(gè)尿素分子縮合后生成的雙縮脲在

2、堿性環(huán)境中與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物的反應(yīng)相似，故稱為雙縮脲反應(yīng)。,簡單、精密、準(zhǔn)確，為臨床首選的常規(guī)方法，但靈敏度稍差。,（三）、 酚試劑法 運(yùn)用蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基能還原磷鎢酸-磷鉬酸試劑生成鉬藍(lán)來測定蛋白質(zhì)的濃度。 改良法：在酚試劑中加入堿性銅離子。集中了雙縮脲法和酚試劑法的優(yōu)點(diǎn),靈敏度高，但受許多還原物質(zhì)的干擾，限制了它在臨床上的應(yīng)用。,（四）、 紫外分光光度法 蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處有一吸收峰，可用于蛋白質(zhì)含量的測定。,準(zhǔn)確性差，但因未加任何試劑和處理，可保留其生物活性且可回收全部蛋白質(zhì)，故可用于較純的酶和免疫球蛋白測定。,（五） 染料結(jié)合法 在酸

3、性環(huán)境下，蛋白質(zhì)分子帶正電，可與帶負(fù)電的染料結(jié)合產(chǎn)生顏色而測定之。 重復(fù)性好、靈敏度高，BCG 法特異性不高。,（六） 比濁法 某些酸（如三氯醋酸、磺基水楊酸）能與蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生微細(xì)沉淀，測定懸浮液的濁度即可求得蛋白質(zhì)的含量。 簡單、試劑易得，但影響因素太多。,血清總蛋白雙縮脲測定法一、原理：蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性環(huán)境中能與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物。,此反應(yīng)和2個(gè)尿素分子縮合后生成的雙縮脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在堿性環(huán)境中與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物的反應(yīng)相似，故稱為雙縮脲反應(yīng)。,顏色的深淺在一定濃度范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)含量成正比，經(jīng)與同樣處理的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液比較，即可求得

4、蛋白質(zhì)含量,郎伯-比耳定律：溶液的吸光度與溶液濃度成正比 A1 = lgI0 / I = K1C1L1， A2 = lgI0 / I = K2C2L2,由于 分析物質(zhì)相同，處理一樣，比色皿也相同， 故 A1 / A2 = C1 / C2， 則 C1 = C2,A1,A2,二、主要試劑： 雙縮脲試劑（ NaOH 、硫酸銅、 酒石酸鉀鈉、碘化鉀） 蛋白標(biāo)準(zhǔn)（60 g/L）,三、操作步驟加入物（ml） B S2 U2血清 / / 0.05標(biāo)準(zhǔn)液 / 0.05 /雙縮脲試劑 3.0 3.0 3.0 混勻，37，10分鐘，540nm處比色，1cm光徑比色杯，B管調(diào)零,注： 1.非嚴(yán)重黃疸、脂血及高脂血

5、癥血清不用做血清自身對照管。 2.可以用蒸餾水調(diào)零，目的是檢 驗(yàn)各個(gè)試劑的好壞,四、結(jié)果 Au 血清總蛋白（g/L） = X 60 As 五、正常參考范圍 60-80g/L,六、臨床意義1、 總蛋白濃度升高（1）蛋白質(zhì)合成增加：大多見于多發(fā)性 骨髓瘤患者（2）血漿濃縮，如急性失水、外傷性休 克、慢性腎上腺皮質(zhì)功能減退。,2、 總蛋白濃度降低（1）蛋白質(zhì)合成障礙：肝功能嚴(yán)重受 損蛋白質(zhì)合成減少（2）蛋白質(zhì)丟失增加：嚴(yán)重?zé)齻?、?出血、腎病綜合征、潰瘍性結(jié)腸炎（3）營養(yǎng)不良或消耗增加：營養(yǎng)失調(diào)、 低蛋白飲食；患消耗性疾病（4）血漿稀釋：如靜脈注射過多低滲 溶液或各種原因引起的水鈉潴留。,七、注意事

6、項(xiàng)1、黃疸血清、嚴(yán)重溶血、某些試 劑（如葡萄糖、酚酞、溴磺酞 鈉）對本法有明顯干擾，可用 標(biāo)本空白管來消除。2、高脂血癥混濁血清也會(huì)干擾比 色，先用丙酮抽脂后再做。,八、方法學(xué)評價(jià) 準(zhǔn)確性高 重復(fù)性好 優(yōu)點(diǎn) 干擾少 試劑穩(wěn)定 操作簡便、快速 缺點(diǎn) 靈敏度較低 手工和自動(dòng)化都可，已被推薦 為測定血清總蛋白的參考方法。,白蛋白測定 白蛋白是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)。其測定方法主要有鹽析法、電泳法、染料結(jié)合法、免疫法等。,（一）、鹽析法 蛋白質(zhì)分子表面因有水化膜的保護(hù)而穩(wěn)定，如果加入大量中性鹽則電荷被中和、水化膜被破壞，蛋白質(zhì)分子因相互聚積而沉淀析出，此種現(xiàn)象稱為鹽析。,球蛋白分子量較白蛋白大，相等重

7、量的表面積要小，電荷和水化膜也少，故先被沉淀下來，而白蛋白仍留在溶液中，可用測定總蛋白的方法測定之。,常用的中性鹽有半飽和硫酸銨、23%硫酸鈉、雙硫酸（20.8%硫酸鈉和7.0% 亞硫酸鈉溶液） 準(zhǔn)確性差、操作煩瑣，且不宜用自動(dòng)生化分析，基本不用。,（二）電泳法 醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳。 特異性高，準(zhǔn)確性不夠，操作煩瑣費(fèi)時(shí)，且不宜用自動(dòng)生化分析,（三）染料結(jié)合法 根據(jù)白蛋白結(jié)合外源性染料的能力比球蛋白大，故在不分離白、球蛋白的條件下用染料直接測定白蛋白。 有干擾，但靈敏度高、操作簡便、重復(fù)性好，自動(dòng)生化分析儀常用的方法。,（四）免疫學(xué)法 免疫擴(kuò)散法、免疫比濁法（透射比濁法和散射比濁法

8、）、放射免疫法。 特異性好、靈敏度高，但成本較高，費(fèi)時(shí)，一般用于尿液和腦脊液中微量白蛋白的測定。,溴甲酚紫測定血清白蛋白一、原理：在pH5.2的緩沖液及表面活性劑存在下，溴甲酚紫（BCP）可與白蛋白結(jié)合形成綠色復(fù)合物，在603nm波長處有一吸收峰，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，便可計(jì)算血清中的白蛋白濃度。,二、主要試劑： BCP 乙酸鈉 用乙酸調(diào)pH 乙醇 至5.20 Brij-35 白蛋白標(biāo)準(zhǔn)：40g/L,三、操作步驟加入物（ml） B S2 U2血清 / / 0.02標(biāo)準(zhǔn)液 / 0.02 /BCP試劑 3.0 3.0 3.0 混勻，1min后在603nm處比色，B管調(diào)零,四、結(jié)果 Au 血清

9、白蛋白（g/L）= 40 As 五、正常參考范圍 成人36-46g/L,六、臨床意義1、 增高：見于嚴(yán)重脫水所致的血漿濃縮2、 降低：(1) 急性降低：見于大出血和嚴(yán)重?zé)齻?(2) 慢性降低：見于腎病蛋白尿、肝功能 受損、惡性腫瘤、結(jié)核病伴慢性出 血、營養(yǎng)不良等。 （血清白蛋白低于20g/L，臨床上出現(xiàn) 水腫）,七、注意事項(xiàng)1、嚴(yán)重脂肪渾濁血清對測定有干 擾，應(yīng)做自身對照。2、嚴(yán)格控制pH5.20.03 （球蛋白和球蛋白的等電點(diǎn) 接近5.20）3、不可用動(dòng)物血清作質(zhì)控血清,八、方法學(xué)評價(jià) 特異性高、反應(yīng)簡便、快速、完全，干擾少（相對于BCG法）,小結(jié)： 凱氏定氮法是蛋白質(zhì)測定的參考方法，用來標(biāo)化血清和檢驗(yàn)其他測定