1、層析，CHROMATOGRAPHY，1，把握：色譜分析法的概念，熟悉一般原理凝膠色譜分析法的基本原理色譜分析法過程以及柱的要求：色譜分析法技術(shù)的分類凝膠色譜分析法的特征凝膠的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)了解：凝膠的選擇柱，樣品，洗脫劑的選擇凝膠的保存， 利用混合物中各成分的物理化學(xué)性質(zhì)的差異(溶解度、分子極性、分子大小、分子形狀、吸附能力、分子親和性等)，使各成分集中分布在支撐體上的不同區(qū)域，從而分離各成分。 3、庫(kù)吉卜賽人歷史，古羅馬人使用混合染料(類似于放射紙色譜分析法)，1903(1906 )年，米歇爾塔什維特使用色譜分析法1931年，Kuhn使用柱色譜分析法類胡蘿卜素1941年， Martin和Syng

2、e提出了分配色譜1941年的Martin和James發(fā)明了氣體色譜法1955年，誕生了第一個(gè)商品氣體色譜法，顯示了現(xiàn)代色譜分析法分析的建立1956年，Stahl系統(tǒng)是薄層色譜法(TLC )，4，1958年， Stein和Moore開發(fā)了氨基酸分析修訂，確定了核糖核酸的分子構(gòu)造的Horvvath和Huber等人在高速液相色譜法(high-performanceliquidchromatography，HPLC )修訂1975年，Small等人在離子色譜分析20世紀(jì)80年代， 超臨界色譜分析法20世紀(jì)90年代，提出陽離子電泳毛細(xì)管的技術(shù)并用、大分子色譜分析法分離、色譜分析法制備有望進(jìn)一步發(fā)展，5、

3、色譜分析法進(jìn)程有兩個(gè)相，一個(gè)稱為固定相，另一個(gè)稱為移動(dòng)相。 因?yàn)楦鞒煞质艿降墓潭ㄏ嗟碾娮韬鸵苿?dòng)相的推力的影響不同，所以各成分的移動(dòng)速度也不同，各成分被分離。 6、7、2 .色譜分析法技術(shù)的分類，1 .按照兩相所處的狀態(tài)，以液體為流動(dòng)相的色譜分析法稱為液相色譜分析法，以氣體為流動(dòng)相的色譜分析法稱為氣相色譜分析法。 該固定相可以是以固體為吸附劑的固定相和以涂布在固體載體表面的液體為固定相的兩種狀態(tài)。8、色譜分析法、氣相色譜分析法、液相色譜分析法、氣固色譜分析法；gas-solidchromatty 液固色譜分析法(liquid-solid chromatography )、液液色譜分析法(liqu

4、id-liquid chromatography )、9、2 .色譜分析法分配色譜(partition chromatography ) -不同成分的流動(dòng)相與固定相中的分配系數(shù)不同10、離子交換色譜(ion-exchange chromatography ) -利用絡(luò)離子交換劑和各成分間的絡(luò)離子親和性的不同進(jìn)行色譜分析法分離的方法。 凝膠色譜分析法(gel chromatography) -利用不同成分間分子大小的差異，利用通過凝膠介質(zhì)時(shí)受到的塊作用的差異進(jìn)行分離的方法。 親和色譜法(affinity chromatography) -利用生物大分子間特別有親和力的不同進(jìn)行分離純化的方法。 列

5、色譜分析法(colum chromatography) -將固定相放入色譜分析法列中，將樣品移動(dòng)到單向式中，通過各成分與流動(dòng)相一起移動(dòng)進(jìn)行分離的方法。 12、紙層分析(paper chrmatography) -以紙為液體載體，將樣品點(diǎn)展開到紙上直至分離鑒定的方法。 薄層色譜法(thin layper chromatography) -將適當(dāng)?shù)奈絼┰诓ＡО寤蚱渌牧媳“迳箱伾媳?，將樣本點(diǎn)向上展開以達(dá)到分離鑒定的方法。 13，3 .色譜分析法的一般原理，14，1 .分配系數(shù)(Partition chromatography )混合物在色譜分析法過程中色譜分析法技術(shù)無論采用哪兩種狀態(tài)的相(流動(dòng)

6、相和固定相)都能取得分配平衡，一種物質(zhì)在兩個(gè)特定相中的分配程度15、分配系數(shù)-一種物質(zhì)被分配到兩個(gè)特定的相中，特定溫度下的該系數(shù)的值為一個(gè)常數(shù)，即固定相中的：溶質(zhì)的濃度Cs K=溶質(zhì)的流動(dòng)相中的濃度Cm，16，有效分配系數(shù)：定義為一個(gè)相中的化合物的總量除以其他相中的總量時(shí)，實(shí)際上不同的層析機(jī)理不同，吸附層析中k為吸附平衡常數(shù)的分配色譜，k為分配系數(shù)的離子交換色譜，k為交換常數(shù)，17，分配系數(shù)k的值大，表明物質(zhì)在色譜分析法被固定相吸附，流動(dòng)相移動(dòng)速度慢，在固定相中殘留時(shí)間長(zhǎng)，洗脫液出現(xiàn)峰。 當(dāng)分配系數(shù)k值小時(shí)，該物質(zhì)在洗脫液中迅速出現(xiàn)峰。 18、從混合物中分離純化的生物物質(zhì)的純度取決于混合物中各

7、成分的k值的差異程度。 如果混合物中的各成分的k值大不相同，則可以比較容易地分離混合物中的生物物質(zhì)。 相反，k值的差較小，難以分離混合物中的生物物質(zhì)。 19，2 .探討層析中的遷移情況采用常規(guī)平衡過程研究方法，將層析柱分成幾個(gè)連續(xù)部分，各系統(tǒng)達(dá)到平衡。 理論板數(shù)(n ) :在色譜分析法柱中連續(xù)添加溶劑，化合物在流動(dòng)相與固定相中不斷分配平衡，發(fā)生的平衡次數(shù)稱為理論板數(shù)。 20、凝膠色譜分析法Gel Chromatography，21，一、定義、凝膠色譜分析法是通過具有一定孔徑的多孔物質(zhì)根據(jù)被分離物質(zhì)的分子尺寸進(jìn)行分離的一種方法。 也稱為凝膠過濾、分子篩過濾或排阻色譜分析法。 22、主要反應(yīng)歷程為

8、分子篩效應(yīng)，分離的物質(zhì)在凝膠柱中流動(dòng)時(shí)，根據(jù)各成分的分子大小，凝膠受到的塊搖滾樂作用不同，各成分在凝膠柱中的移動(dòng)速度不同被分離。 23、2 .基本原理、流動(dòng)相(洗脫液)固定相(凝膠)原理：被分離物質(zhì)中各成分的分子量不同。 24、進(jìn)入具有一定孔徑的凝膠柱后，大分子不能進(jìn)入凝膠的空穴，排出到外面，小分子能進(jìn)入凝膠的空穴，加入洗脫劑后，大分子隨洗脫劑從凝膠的空穴洗脫，其流速快，小分子物質(zhì)從上面凝膠的空穴洗脫26、27、小分子在擴(kuò)散作用下進(jìn)入凝膠粒子內(nèi)部滯留，大分子排出凝膠粒子外，迅速通過粒子間。 28、凝膠色譜分析法過程的數(shù)學(xué)關(guān)系，柱床體積(VT )即凝膠體積及粒子內(nèi)外間隙體積的總和。 VT=1/4

9、 D2h D其內(nèi)壁的直徑h為凝膠色譜分析法柱地板的高度。 溶出體積(Ve )是欲分離的物質(zhì)在層析柱溶出所需的洗脫劑的總體積。 外水體積(VO )是存在于柱床內(nèi)凝膠外面空隙間的水相體積，相當(dāng)于一般的色譜分析法中流相的體積。 30、內(nèi)水體積()即凝膠粒子內(nèi)部所含水相的體積可以由干凝膠粒子重量和吸水重量求出。 凝膠干體積()、31、32、與溶出體積的關(guān)系，()、33是樣品成分的分配系數(shù)，也可以說是分子量不同的溶質(zhì)在凝膠內(nèi)部和外部的分配系數(shù)。 只與分離物質(zhì)分子的大小和凝膠粒子的細(xì)孔的大小分布有關(guān)，與柱的長(zhǎng)度和粗細(xì)無關(guān)，也就是說每種物質(zhì)是一定的，這與柱的物理?xiàng)l件無關(guān)。 可以通過實(shí)驗(yàn)求出。 Ve是實(shí)際測(cè)定的溶出體積。 Vo可以通過用不滯留在凝膠中的大分子物質(zhì)的溶液(優(yōu)選Hb、為了觀察墨水等而有顏色)進(jìn)行實(shí)測(cè)來求出，Vi可以由gWr求出(g為干凝膠重，單位為克，Wr為凝膠的吸水量為ml/g