1、 第40講 細胞工程考點一植物細胞工程1植物細胞工程的基本技術(shù)(1)植物組織培養(yǎng)技術(shù)理論基礎(chǔ)：細胞都具有全能性。培養(yǎng)技術(shù)種類a植物細胞培養(yǎng)技術(shù)：采用的方法主要是細胞懸浮培養(yǎng)。b原生質(zhì)體的培養(yǎng)技術(shù)：利用纖維素酶和果膠酶去除植物細胞的細胞壁，就可以獲得具有活力的原生質(zhì)體。對這些原生質(zhì)體的培養(yǎng)是植物體細胞雜交和顯微注射技術(shù)的基礎(chǔ)。c花粉和花藥培養(yǎng)技術(shù)：在一年時間里就可以選育出穩(wěn)定遺傳的植株。d離體胚培養(yǎng)技術(shù)：可以分為幼胚培養(yǎng)與成熟胚培養(yǎng)兩類。這種技術(shù)通過使用相應(yīng)的培養(yǎng)基使離體胚正常地萌發(fā)生長，或誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織，再分化形成完整植株。植物組織培養(yǎng)的含義：指在無菌和人工控制的條件下，將離體的植物器官、

2、組織、細胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，最終誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織、叢芽或完整的植株。(2)植物體細胞雜交技術(shù)含義：是將不同種的植物體細胞原生質(zhì)體在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成完整植物體的技術(shù)。原生質(zhì)體間的融合一般要利用人工誘導(dǎo)的方法，可以分為物理法和化學(xué)法兩大類。(3)植物細胞工程含義：是利用細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法，以植物細胞為基本單位進行培養(yǎng)增殖或按照人們的意愿來改造細胞的某些生物學(xué)特性，從而獲得細胞產(chǎn)品的一門綜合技術(shù)。2植物細胞工程的應(yīng)用(1)植物的微型快速繁殖含義：利用植物的組織或器官，經(jīng)過組織培養(yǎng)過程，可以在短時間內(nèi)獲得大量的植物幼苗。應(yīng)用：現(xiàn)

3、在一些優(yōu)良的觀賞植物、經(jīng)濟林木等都已經(jīng)實現(xiàn)利用工廠化微型繁殖來進行大規(guī)模的無性繁殖。(2)人工種子含義：是一種以植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體為主要材料，再在其外面包裹一層有機薄膜制作而成的顆粒體。成分：人工種子的薄膜包含胚狀體萌發(fā)和發(fā)育成幼苗所需的各種養(yǎng)分，還可以緩沖生產(chǎn)、貯存、運輸和種植過程中的碰撞。另外在包裹劑中一般要附加大量的植物生長調(diào)節(jié)劑、農(nóng)藥、抗生素和一些有益的菌種等。(3)作物脫毒依據(jù)：病毒在植株中的分布是不均一的，成熟的組織和器官中病毒含量高，幼嫩的組織和器官中病毒含量較低，生長點幾乎不含病毒或病毒很少。應(yīng)用：目前已經(jīng)有多種作物成功利用莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)進行脫毒處理，使植物在產(chǎn)量和品質(zhì)

4、上都有了顯著的提高。(4)愈傷組織的誘變育種依據(jù)：植物的愈傷組織在培養(yǎng)過程中一直處于分裂增生的狀態(tài)，其遺傳物質(zhì)極易受到外界因素的影響而發(fā)生變異。過程：育種學(xué)家利用植物組織先誘導(dǎo)出愈傷組織，然后對愈傷組織進行誘變處理，從再分化得到的植株中篩選、培育出新的品系或品種。(5)細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)依據(jù)：植物細胞培養(yǎng)技術(shù)可以快速、高效地得到大量的細胞或細胞產(chǎn)物。過程：利用組織培養(yǎng)方法，培養(yǎng)植物的某些器官或愈傷組織，篩選出高產(chǎn)、高合成能力和生長較快的細胞株系，繼而進行大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。(6)拯救瀕危植物現(xiàn)在科學(xué)家正在研究利用植物細胞培養(yǎng)技術(shù)來大量培育紅豆杉細胞，希望利用這種方法來大量生產(chǎn)紫杉醇，從而拯救紅

5、豆杉，拯救我們的自然資源。診斷與思考1判斷下列說法的正誤(1)棉花根尖細胞經(jīng)誘導(dǎo)形成幼苗能體現(xiàn)細胞全能性()(2)植物的每個細胞在植物體內(nèi)和體外都能表現(xiàn)出細胞的全能性()(3)在誘導(dǎo)離體菊花莖段形成幼苗的過程中，不會發(fā)生細胞的增殖和分化()(4)愈傷組織是外植體通過脫分化和再分化后形成的()(5)利用物理法或化學(xué)法，可以直接將兩個植物細胞進行誘導(dǎo)融合()(6)用纖維素酶和果膠酶水解法獲得的植物原生質(zhì)體失去了全能性()(7)再生出細胞壁是原生質(zhì)體融合成功的標志()2如圖表示的是植物體細胞雜交流程示意圖。請據(jù)圖回答下列問題：(1)a表示什么過程？該過程為什么使用纖維素酶和果膠酶？提示a表示去除細胞

6、壁獲得具有活力的原生質(zhì)體，由于細胞壁的主要成分是纖維素和果膠，所以使用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁。(2)b表示什么過程？該過程的原理是什么？提示b表示原生質(zhì)體的融合，其原理是細胞膜具有一定的流動性。(3)誘導(dǎo)b融合的方法有哪些？提示物理法和化學(xué)法。物理法包括離心、振動、電激等；化學(xué)法一般用聚乙二醇(PEG)作為誘導(dǎo)劑。(4)植物體細胞雜交技術(shù)用于作物育種有何優(yōu)點？提示可以克服遠緣雜交不親和的障礙。題組一植物組織培養(yǎng)過程分析1下圖是通過植物細胞工程技術(shù)獲得紫杉醇的途徑，下列敘述不正確的是()A該途徑依據(jù)的原理是植物細胞具有全能性B過程需控制好培養(yǎng)基中植物激素的比例C經(jīng)過程細胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)發(fā)生了變

7、化D過程需使用液體培養(yǎng)基，有利于細胞增殖答案A解析該過程是為了得到細胞群及細胞產(chǎn)物，依據(jù)的原理是植物組織培養(yǎng)，沒有體現(xiàn)細胞的全能性，A錯誤；過程為脫分化，在培養(yǎng)基中應(yīng)加入適量的生長素和細胞分裂素，B正確；愈傷組織是無定形狀態(tài)的薄壁細胞，所以經(jīng)過程細胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯變化，C正確；過程是細胞大量增殖的過程，需要使用液體培養(yǎng)基，D正確。2人工種子是人們模仿天然種子的結(jié)構(gòu)制造出來的生命有機體，它能像種子一樣萌發(fā)生長，長成植物。人工種子的核心部件是一個被外層物包埋的具有類似于胚功能的胚狀體。將胚狀體包埋在一個能提供營養(yǎng)的膠質(zhì)中，便成了所謂的“人工種子”。(1)人工種子依據(jù)的原理是_，培育胚狀體利

8、用了_技術(shù)。(2)包埋胚狀體的膠質(zhì)可看作自然種子的哪部分結(jié)構(gòu)？_。(3)如果外植體是植物的莖尖，通過的處理可使細胞彼此分離，過程中可加入()A蛋白酶B淀粉酶C纖維素酶和果膠酶D胰蛋白酶(4)過程表示脫分化過程，其實質(zhì)是_；表示再分化過程，其實質(zhì)是_。(5)由人工種子萌發(fā)成的植株是否可育？_。答案(1)植物細胞的全能性植物組織培養(yǎng)(2)種皮及提供營養(yǎng)的胚乳或子葉(3)C(4)使細胞恢復(fù)分裂能力基因的選擇性表達(5)不一定解析(1)人工種子能發(fā)育成完整植株，說明其細胞內(nèi)含有個體發(fā)育所需要的全部遺傳物質(zhì)，因此依據(jù)的原理是細胞的全能性，人工種子是經(jīng)過植物組織培養(yǎng)技術(shù)得到的。(2)包裹胚狀體的膠質(zhì)有保護

9、胚狀體的作用，同時又可以為胚狀體提供營養(yǎng)物質(zhì)，所以可看成種皮及胚乳或子葉。(3)使植物細胞彼此分離可以使用纖維素酶和果膠酶，因為植物細胞壁的主要成分是纖維素和果膠。(4)脫分化的實質(zhì)是使細胞恢復(fù)分裂能力，而再分化的實質(zhì)是基因的選擇性表達。(5)人工種子是否可育取決于培育胚狀體所選用的材料。題組二植物體細胞雜交過程分析3 “白菜甘藍”是用細胞工程的方法培育出來的蔬菜新品種，它具有生長期短、耐熱性強和易于儲藏等優(yōu)點。下圖是“白菜甘藍”的雜交過程示意圖。以下說法正確的是()A除去細胞壁形成原生質(zhì)體，可運用的酶是纖維素酶、淀粉酶和果膠酶B通?？烧T導(dǎo)上述原生質(zhì)體相互融合的方法是PEG和滅活的病毒誘導(dǎo)C雜

10、種細胞形成的標志是誘導(dǎo)產(chǎn)生了新的細胞壁D愈傷組織形成“白菜甘藍”植物體必須經(jīng)過脫分化和再分化兩個過程答案C解析除去細胞壁的酶有纖維素酶和果膠酶；誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合不能用滅活的病毒；雜種細胞形成的標志是誘導(dǎo)產(chǎn)生了新的細胞壁；愈傷組織形成“白菜甘藍”植物體屬于再分化過程。4科學(xué)家利用植物體細胞雜交技術(shù)成功獲得了番茄馬鈴薯雜種植株，為了便于雜種細胞的篩選和鑒定，科學(xué)家利用紅色熒光和綠色熒光分別標記番茄和馬鈴薯的原生質(zhì)體膜上的蛋白質(zhì)，其培育過程如圖所示，請據(jù)圖回答下列問題：(1)植物體細胞雜交依據(jù)的生物學(xué)原理有_。(2)過程常用的酶是_，細胞融合完成的標志是_。(3)植物原生質(zhì)體融合過程常利用化學(xué)試

11、劑_誘導(dǎo)融合，在鑒定雜種原生質(zhì)體時可用顯微鏡觀察，根據(jù)細胞膜表面熒光的不同可觀察到_種不同的原生質(zhì)體(只考慮細胞兩兩融合的情況)，當觀察到_時可判斷該原生質(zhì)體是由番茄和馬鈴薯融合而成的。(4)過程和過程依次為_，過程中的培養(yǎng)基常添加的植物激素是_。(5)若番茄細胞內(nèi)有m條染色體，馬鈴薯細胞內(nèi)有n條染色體，則“番茄馬鈴薯”細胞在有絲分裂后期含_條染色體。若雜種細胞培育成的“番茄馬鈴薯”植株為四倍體，則此雜種植株的花粉經(jīng)離體培養(yǎng)得到的植株屬于_植株。答案(1)細胞膜的流動性、植物細胞的全能性(2)纖維素酶和果膠酶再生出新的細胞壁(3)聚乙二醇(或PEG)3融合的細胞表面既有紅色熒光又有綠色熒光(4

12、)脫分化和再分化生長素和細胞分裂素(5)2(mn)單倍體解析(1)植物體細胞雜交包括原生質(zhì)體融合和培育雜種植株兩大步驟，兩者的原理分別是細胞膜的流動性和植物細胞的全能性。(2)去除細胞壁常用的酶是纖維素酶和果膠酶，細胞融合完成的標志是再生出新的細胞壁。(3)化學(xué)促融劑是聚乙二醇，兩兩融合的原生質(zhì)體有三種：番茄番茄、馬鈴薯番茄、馬鈴薯馬鈴薯，其中雜種細胞的細胞表面有兩種顏色的熒光。(4)過程和過程分別表示脫分化和再分化，誘導(dǎo)細胞分化所用的植物激素主要是生長素和細胞分裂素。(5)“番茄馬鈴薯”體細胞有mn條染色體，有絲分裂后期染色體數(shù)目加倍；由配子發(fā)育成的個體均為單倍體。1植物組織培養(yǎng)和植物體細胞

13、雜交的比較名稱植物組織培養(yǎng)植物體細胞雜交原理細胞的全能性細胞膜具有一定的流動性和細胞的全能性過程選材選取根尖、莖尖、形成層部位最容易誘導(dǎo)脫分化不同的植物細胞技術(shù)操作脫分化、再分化等除脫分化、再分化外，還要用酶解法去除細胞壁，用一定的方法誘導(dǎo)細胞融合關(guān)系植物組織培養(yǎng)是植物體細胞雜交的基礎(chǔ)，植物體細胞雜交所用的技術(shù)更復(fù)雜2.植物體細胞雜交過程中雜種細胞類型及檢測方法(1)誘導(dǎo)產(chǎn)物(假設(shè)用于雜交的兩種植物細胞分別為A、B)未融合的細胞：A和B。兩兩融合的細胞：AA、BB和AB。多細胞融合體。(2)檢測方法：對誘導(dǎo)產(chǎn)物中的細胞進行植物組織培養(yǎng)，然后根據(jù)得到的植物性狀進行判斷。若只表現(xiàn)出一種植物的性狀，

14、說明是未融合細胞。若得到的是具有兩種親本性狀的植物，說明是雜種植株。若得到的是兩種親本性狀的植物，且一種植物的性狀得到加強，則是多細胞融合體。若得到的是一種植物的性狀，但是效果得到加強，則是同種細胞融合的結(jié)果?？键c二動物細胞工程1動物細胞工程的主要技術(shù)動物細胞工程就是應(yīng)用細胞學(xué)的方法，按照我們?nèi)祟惖男枰皖A(yù)定的設(shè)計，有目的、有計劃地保存、改變動物細胞和創(chuàng)造新的動物細胞，進而培育成新的物種或者品種的一門科學(xué)技術(shù)。動物細胞工程包括很多種常用的技術(shù)，如動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合、單克隆抗體和動物體細胞克隆等。(1)哺乳動物細胞培養(yǎng)技術(shù)動物細胞培養(yǎng)條件a動物細胞都要在液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。培養(yǎng)液的營養(yǎng)

15、成分主要包括葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。b培養(yǎng)容器中必須有足夠的氧氣和一定的二氧化碳，以保證細胞代謝活動的進行。c動物細胞培養(yǎng)環(huán)境的溫度與動物體內(nèi)的溫度要保持一致。動物細胞培養(yǎng)流程a取材：一般都取自動物的胚胎或幼齡動物的組織或器官。b過程i在無菌條件下，從動物體內(nèi)取出組織塊并剪碎，然后加入適量的胰蛋白酶或膠原纖維酶消化以使細胞分散。ii.經(jīng)過濾、離心后將動物細胞再接種到無菌的培養(yǎng)液中，在適宜的條件下進行靜止或慢速轉(zhuǎn)動培養(yǎng)，這個過程稱為原代培養(yǎng)。iii.出現(xiàn)接觸抑制的細胞按一定的比例分散到另外的培養(yǎng)瓶內(nèi)，并加入新的培養(yǎng)液，細胞就會解除接觸抑制、恢復(fù)生長，這種分瓶培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。

16、細胞生長特點：貼壁生長、接觸抑制。細胞株與細胞系細胞株是指一般可以傳到4050代的細胞。細胞系是指遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，可以無限制地傳代下去，成為“長生不老”的細胞。(2)細胞融合與單克隆抗體技術(shù)細胞融合a含義：是在一些融合因子的作用下，將兩個或兩個以上的細胞合并成為一個細胞的技術(shù)。b誘導(dǎo)因素：如利用聚乙二醇、電流刺激或病毒等。c原理：在誘導(dǎo)因素的作用下，細胞膜會發(fā)生一定程度的損傷，從而細胞就可以實現(xiàn)相互粘連而融合在一起。單克隆抗體a含義：由一個B淋巴細胞增殖形成的細胞群所產(chǎn)生的單一型抗體分子。b應(yīng)用：用單克隆抗體可以快捷、準確地診斷和治療一些疾病。c制備：用小鼠體內(nèi)的B淋巴細胞和一種營養(yǎng)缺陷型

17、的骨髓瘤細胞作為實驗材料，利用聚乙二醇為融合劑，使兩種細胞發(fā)生融合。然后利用只有雜交瘤細胞才能生長的選擇培養(yǎng)液來篩選出雜交瘤細胞使之產(chǎn)生特異性抗體。(3)動物體細胞克隆技術(shù)多莉的培育過程利用細胞核移植技術(shù)，將饑餓處理過的羊乳腺上皮細胞與去核卵細胞電脈沖融合后，實現(xiàn)體細胞的核轉(zhuǎn)移到無核的卵細胞中。然后，融合細胞借助于卵的發(fā)育能力，由體細胞核主導(dǎo)而發(fā)育形成新的個體。存在的問題：克隆羊多莉和其他一些克隆動物在培養(yǎng)和生長歷程中出現(xiàn)的一系列異常表明，動物體細胞克隆技術(shù)仍然存在著一些不足和缺陷，我們對克隆技術(shù)的探索仍然是任重道遠。2動物細胞工程的應(yīng)用(1)快速繁殖優(yōu)良品種。(2)克隆轉(zhuǎn)基因動物。(3)拯救

18、瀕臨滅絕的動物。(4)培育人造器官。診斷與思考1判斷下列說法的正誤(1)制備肝細胞懸液時先用剪刀剪碎肝組織，再用胃蛋白酶處理()(2)肝細胞培養(yǎng)過程中通常在培養(yǎng)液中通入5%的CO2刺激細胞呼吸()(3)與“多莉”羊等克隆哺乳動物相關(guān)的技術(shù)有胚胎移植、細胞培養(yǎng)和核移植()(4)可以用滅活的病毒促進動物細胞融合，而不能促進植物細胞融合()(5)小鼠骨髓瘤細胞染色體數(shù)為40，B淋巴細胞的染色體數(shù)為46，融合后形成的雜交瘤細胞DNA分子數(shù)為86()(6)雜交瘤細胞進行體內(nèi)培養(yǎng)，是為了獲得能產(chǎn)生單克隆抗體的胚胎()2請思考下列與動物細胞培養(yǎng)及體細胞核移植相關(guān)的問題。(1)動物細胞培養(yǎng)過程中，也需要將動物

19、細胞分散開來，這與觀察植物細胞的有絲分裂中的解離作用類似。兩種處理方法的結(jié)果最大的區(qū)別是什么？提示動物細胞培養(yǎng)過程中的處理，動物細胞還保持活性；但在植物細胞的解離過程中，細胞被解離液殺死，已經(jīng)失去活性。(2)通過動物體細胞核移植技術(shù)獲得的克隆動物，其遺傳物質(zhì)是否和供核細胞的遺傳物質(zhì)完全一樣？提示不完全一樣。細胞核遺傳物質(zhì)一樣，但細胞質(zhì)遺傳物質(zhì)和提供去核卵母細胞的個體幾乎完全一樣(分析遺傳物質(zhì)來源時，一定要注意細胞核遺傳物質(zhì)和細胞質(zhì)遺傳物質(zhì)的區(qū)別)。題組一動物細胞培養(yǎng)與細胞核移植的過程分析1某研究小組為測定某種藥物對體外培養(yǎng)細胞的毒性，準備對某種動物的肝腫瘤細胞(甲)和正常肝細胞(乙)進行動物細

20、胞培養(yǎng)。下列敘述正確的是()A制備肝細胞懸液時，可用胃蛋白酶處理肝組織塊B恒溫培養(yǎng)箱中的CO2濃度維持在5%左右，以促進細胞呼吸C為了保證細胞培養(yǎng)所需的無毒環(huán)境，需大量添加各種抗生素D本實驗應(yīng)設(shè)置對照實驗，以檢測藥物對甲、乙細胞的毒性大小答案D解析在利用肝組織塊制備肝細胞懸液時，常用胰蛋白酶，不能使用胃蛋白酶，因為胃蛋白酶需要在強酸環(huán)境下才能起作用，但這樣的環(huán)境不適于細胞生存，A錯誤；細胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進行，CO2的作用是維持培養(yǎng)液的pH，B錯誤；抗生素是用來殺菌的，不是用來殺滅病毒的，C錯誤；本實驗應(yīng)設(shè)置對照實驗，用添加藥物的培養(yǎng)液分別培養(yǎng)甲、乙細胞，根據(jù)變異細胞占培養(yǎng)細

21、胞的比例，以檢測藥物對甲、乙的毒性大小，D正確。2.如圖所示為哺乳動物生殖的過程。其中b為卵細胞，c為體細胞。下列敘述不正確的是()A形成動物的過程分別屬于有性生殖和無性生殖B產(chǎn)生動物的過程中可發(fā)生基因突變、基因重組等C動物的產(chǎn)生表明動物細胞的細胞核具有全能性Da、b、c細胞的形成過程，僅c細胞為有絲分裂答案B解析動物通過受精作用形成，屬于有性生殖，動物通過細胞核移植技術(shù)形成，利用的原理是動物細胞的細胞核具有全能性，形成動物的過程屬于無性生殖，A、C正確。a、b細胞分別由精原細胞和卵原細胞通過減數(shù)分裂形成，c細胞是體細胞，通過有絲分裂形成，D正確。產(chǎn)生動物的過程中并沒有發(fā)生基因重組，故B錯誤。

22、題組二單克隆抗體的制備過程分析3對于下面制備單克隆抗體過程示意圖，不正確的敘述是()A表示已免疫的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞均是從小鼠的脾臟中提取的B促進細胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介導(dǎo)C中的篩選是通過抗原抗體反應(yīng)進行的D可以無限增殖答案A解析已免疫的B淋巴細胞可以從小鼠的脾臟中提取，也可以從血漿中提取，骨髓瘤細胞是從小鼠的骨髓中提取的。單克隆抗體是利用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合形成的雜交瘤細胞得到的，融合方法可以用化學(xué)方法聚乙二醇，生物方法滅活病毒等。如果要篩選能產(chǎn)生特定抗體的細胞群，可以通過檢測抗原抗體反應(yīng)，如果有反應(yīng)說明表達了抗體。融合細胞具有雙親的特點，既能無限增殖又能產(chǎn)生單一抗體。4

23、單克隆抗體的特點是特異性強、靈敏度高、可以大量制備，已被廣泛應(yīng)用于疾病的診斷和治療。用H7N9病毒制備單克隆抗體的流程如下圖所示：(1)過程常用的方法是_。(2)向小鼠體內(nèi)注射抗原蛋白，使小鼠產(chǎn)生_免疫。從小鼠體內(nèi)分離的細胞是_，細胞應(yīng)具有的特點是_。(3)體外培養(yǎng)細胞，首先應(yīng)保證其處于_的環(huán)境中，其次需要提供充足的營養(yǎng)和適宜的溫度。培養(yǎng)箱充入二氧化碳的作用是_。(4)對于轉(zhuǎn)基因成功的細胞還要進行克隆化培養(yǎng)和_檢測。(5)若要預(yù)防H7N9禽流感，可用圖中的_作為疫苗。答案(1)顯微注射技術(shù)(2)體液(只答特異性不可)B淋巴細胞(漿細胞或已免疫的B淋巴細胞)既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體(3)

24、無菌、無毒(缺一不可)維持培養(yǎng)液的pH(4)(專一)抗體(5)抗原蛋白解析(1)將重組DNA導(dǎo)入動物細胞，常用顯微注射技術(shù)。(2)向小鼠體內(nèi)注射抗原蛋白，使小鼠產(chǎn)生相應(yīng)的漿細胞，這是體液免疫，從小鼠體內(nèi)分離的細胞是B淋巴細胞(漿細胞或已免疫的B淋巴細胞)，將無限增殖的基因?qū)霛{細胞，得到的細胞應(yīng)具有的特點是既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體。(3)體外培養(yǎng)細胞，首先應(yīng)保證其處于無菌、無毒的環(huán)境中，其次需要提供充足的營養(yǎng)和適宜的溫度。培養(yǎng)箱充入二氧化碳的作用是維持培養(yǎng)液的pH。(4)對于轉(zhuǎn)基因成功的細胞還要進行克隆化培養(yǎng)和檢測(專一)抗體。(5)疫苗為毒性弱的抗原，因此要預(yù)防H7N9禽流感，可以用

25、圖中的抗原蛋白作為疫苗。1動物細胞培養(yǎng)與動物體細胞核移植的比較動物細胞培養(yǎng)動物體細胞核移植原理細胞增殖動物細胞核的全能性過程結(jié)果獲得細胞群獲得與供體遺傳物質(zhì)基本相同的個體2單克隆抗體制備過程的幾個問題分析(1)對動物免疫的原因：B淋巴細胞要經(jīng)過免疫過程，即接觸抗原，增殖分化為有特異性免疫功能的B淋巴細胞，才能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，所以，與骨髓瘤細胞融合的B淋巴細胞實際上是漿細胞。(2)在單克隆抗體制備過程中，一般認為有兩次篩選過程，第一次是篩選出雜交瘤細胞(用選擇培養(yǎng)基)，第二次是進一步篩選出能產(chǎn)生人們所需要抗體的雜交瘤細胞。(3)雜交瘤細胞具備雙親的遺傳物質(zhì)，不僅具有漿細胞產(chǎn)生特異性抗體的能力，還

26、具有骨髓瘤細胞在體外培養(yǎng)條件下大量增殖的能力，從而可以克服單純B淋巴細胞不能無限增殖的缺點，而大量生產(chǎn)單克隆抗體。知識網(wǎng)絡(luò)答題語句網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建要語強記1植物組織培養(yǎng)的過程主要包括脫分化和再分化兩個階段，脫分化的結(jié)果是形成愈傷組織，再分化的結(jié)果是形成根和芽。2植物體細胞雜交需要用酶解法制備原生質(zhì)體，所用的酶包括纖維素酶和果膠酶。3無論是植物體細胞雜交還是動物細胞融合，都需要誘導(dǎo)。4植物組織培養(yǎng)需要各種營養(yǎng)成分和植物激素，動物細胞培養(yǎng)也需要各種營養(yǎng)成分及血清。5植物體細胞雜交可用于作物育種，動物細胞融合可用于單克隆抗體的制備。6產(chǎn)生單克隆抗體的細胞是雜交瘤細胞，它既能產(chǎn)生單克隆抗體又能無限增殖。探究高

27、考明確考向1(2015江蘇，20)如圖為制備人工種子部分流程示意圖，下列敘述正確的是()A胚狀體是外植體在培養(yǎng)基上脫分化形成的一團愈傷組織B該過程以海藻酸鈉作為營養(yǎng)成分，以CaCl2溶液作為凝固劑C可在海藻酸鈉溶液中添加蔗糖，為胚狀體提供碳源D包埋胚狀體的凝膠珠能夠隔絕空氣，有利于人工種子的儲藏答案C解析A項錯，胚狀體是愈傷組織再分化得到的；B項錯，海藻酸鈉作為包埋的材料，不提供營養(yǎng)成分；C項對，在海藻酸鈉溶液中添加蔗糖，不僅為胚狀體提供能量，而且是培養(yǎng)物滲透壓的主要調(diào)節(jié)物；D項錯，凝膠珠具有空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，不隔絕空氣。2(2014浙江，3)下列關(guān)于動物細胞培養(yǎng)的敘述，正確的是()A連續(xù)細胞系的

28、細胞大多具有二倍體核型B某些癌細胞在合適條件下能逆轉(zhuǎn)為正常細胞C由多個祖細胞培養(yǎng)形成的細胞群為一個克隆D未經(jīng)克隆化培養(yǎng)的細胞系細胞具有相同的性狀答案B解析A項，連續(xù)細胞系的細胞一般都培養(yǎng)了多次，二倍體核型發(fā)生了改變，大多數(shù)細胞具有異倍體核型。B項，細胞癌變是由基因突變引起的，如果癌細胞在一定條件下(如用秋水仙胺等藥物治療)，則有可能恢復(fù)成正常細胞。C項，細胞克隆的最基本的要求是：必須確定所建立的克隆來源于單個細胞。D項，未經(jīng)克隆化培養(yǎng)的細胞系具有異質(zhì)性。3(2014廣東，29)鐵皮石斛是我國名貴中藥，生物堿是其有效成分之一。應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)鐵皮石斛擬原球莖(簡稱PLBs，類似愈傷組織)生產(chǎn)

29、生物堿的實驗流程如下：在固體培養(yǎng)基上，PLBs的重量、生物堿含量隨增殖培養(yǎng)時間的變化如圖所示，請回答下列問題：(1)選用新生營養(yǎng)芽為外植體的原因是_，誘導(dǎo)外植體形成PLBs的過程稱_。(2)與黑暗條件下相比，PLBs在光照條件下生長的優(yōu)勢體現(xiàn)在_，_，_。(3)脫落酸(ABA)能提高生物堿含量，但會抑制PLBs的生長。若采用液體培養(yǎng)，推測添加適量的ABA可提高生物堿產(chǎn)量。同學(xué)們擬開展探究實驗驗證該推測，在設(shè)計實驗方案時探討了以下問題：ABA的濃度梯度設(shè)置和添加方式：設(shè)4個ABA處理組，1個空白對照組，3次重復(fù)。因ABA受熱易分解，故一定濃度的無菌ABA母液應(yīng)在各組液體培養(yǎng)基_后按比例加入。實驗進程和取樣：實驗50天完成，每10天取樣，將樣品(PLBs)稱重(g/瓶)后再測定生物堿含量。如初始(第0天)數(shù)據(jù)已知，實驗過程中還需測定的樣品數(shù)為_。依所測定數(shù)據(jù)確定適宜的ABA濃度和培養(yǎng)時間：當某3個樣品(重復(fù)樣)的_時，其對應(yīng)的ABA濃度為適宜濃度，對應(yīng)的培養(yǎng)時間是適宜培養(yǎng)時間。答案(1)營養(yǎng)芽細胞分裂能力強，幾乎不含病毒脫分化(2)開始增重的時間早增重持續(xù)的時間長PLBs增重的量更多(3)滅菌冷卻75生物堿產(chǎn)量最高解析(1)選用新生營養(yǎng)芽為外植體是因為其分裂能力旺盛且?guī)缀醪粩y帶病毒。誘導(dǎo)外植體形成類似愈傷組織的PLBs的過程稱為脫分化。(2)分析曲線圖可知，在光照條件下PL