1、免疫球蛋白的檢測與臨床應(yīng)用,檢驗(yàn)科 王濤,1,免疫球蛋白（Ig）是由漿細(xì)胞合成和分泌的一組具有抗體活性的蛋白質(zhì)。由兩條重鏈和兩條輕鏈通過二硫鍵連接而構(gòu)成。 重鏈分為IgG,IgA,IgM,IgD,IgE. 輕鏈分為(kappa),(Lambda)兩個類別,什么是免疫球蛋白？,2,免疫球蛋白的結(jié)構(gòu),3,血清免疫球蛋白IgG,IgA,IgM,定量測定方法一般有單向環(huán)狀免疫擴(kuò)散法，火箭免疫電泳法，ELISA,免疫比濁法，放射免疫分析法等，但臨床常用單向環(huán)狀免疫擴(kuò)散法和免疫比濁法來測定血清免疫球蛋白含量。,檢測方法,4,作為血清中最主要的抗體成分，約占人體血清中總免疫球蛋白含量的75%。是唯一能通過胎

2、盤的Ig，IgG是血液和細(xì)胞外液中的主要抗體，也是機(jī)體再次免疫應(yīng)答的主要抗體，大多數(shù)抗感染抗體與自身抗體都為IgG 類。 16歲以上成年人IgG臨床參考范圍為：6.016.0g/L,IgG,5,6,在正常人血清中的含量僅次于IgG，占血清免疫球蛋白含量的1020%。新生兒血清中無IgA抗體，但可從母乳中獲得分泌型IgA。分為血清型IgA和分泌型IgA： 其中血清型IgA含量占總IgA的85%左右，雖然血清型IgA雖有IgG和IgM的某些功能，但在血清中并不顯示重要的免疫功能。 分泌型IgA存在于分泌液中，如唾液、淚液、初乳、鼻和支氣管分泌液、胃腸液、尿液、汗液等。機(jī)體粘膜局部抗感染免疫的主要抗

3、體。故又稱粘膜局部抗體。 16歲以上成年人IgA臨床參考范圍為：0.763.9g/L,IgA,7,8,IgM是初次體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體，是機(jī)體抗感染的先頭部隊(duì)，血清中檢出IgM，提示新近發(fā)生感染，可用于感染的早期診斷。 分泌型IgM為五聚體，是分子量最大的Ig，沉降系數(shù)為19S，稱為巨球蛋白，一般不能通過血管壁，主要存在于血液中。 16歲以上成年人IgG臨床參考范圍為：0.43.45g/L,IgM,9,10,。,11,慢性肝臟疾病如慢性活動性肝炎，原發(fā)性膽汁性肝硬化，隱匿性肝硬化患者血清中可見三種免疫球蛋白均升高。慢性細(xì)菌感染如慢性支氣管炎，肺結(jié)核，血IgG可升高，宮內(nèi)感染時臍血或出生

4、的新生兒血清中IgM含量可增高。,IgG 、IgA、IgM均升高,12,有先天性和獲得性兩類，先天性低免疫球蛋白血癥，主要見于體液免疫缺陷病和聯(lián)合免疫缺陷病。另一種情況是3種Ig中缺1種或2種，如IgA缺乏患者，易發(fā)生反復(fù)呼吸道感染；IgG缺乏患者，易發(fā)生化膿性感染；IgM缺乏患者，易發(fā)生革蘭陰性菌敗血癥。獲得性低Ig血癥，血清中IgG常小于5 g/ L，引起原因較多，如大量蛋白流失的疾?。▌兠撔云ぱ?、腸淋巴管擴(kuò)張癥和腎病綜合征）、淋巴系統(tǒng)腫瘤（淋巴肉瘤、霍奇金淋巴瘤）、中毒性骨髓疾病、長期使用免疫抑制劑等。,IgG、IgA、IgM降低,13,正常人血清中IgD含量很低，僅占血清免疫球蛋白總量

5、的0.2%。IgD可在個體發(fā)育的任何時間產(chǎn)生，半衰期2.8天。血清IgD的生物學(xué)功能尚不清楚，膜結(jié)合型IgD（mIgD）構(gòu)成BCR，是B細(xì)胞分化發(fā)育成熟的標(biāo)志，未成熟的B細(xì)胞僅表達(dá)mIgM，成熟B細(xì)胞可同時表達(dá)mIgM和mIgD，稱為初始B細(xì)胞（native B cell）；活化的B細(xì)胞或記憶B細(xì)胞其表面的mIgD逐漸消失。IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴組織中的漿細(xì)胞分泌。其重要特征為糖含量高達(dá)12%。IgE為親細(xì)胞抗體，可引起I型超敏反應(yīng)。此外，IgE可能與機(jī)體抗寄生蟲免疫有關(guān)。,血清IgD和IgE,14,（一）測定方法 IgD的測定方法有放射免疫分析法，乳膠顆粒

6、免疫比濁分析法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。在臨床用得最多的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定IgD。 （二）臨床意義 目前IgD的生物功能尚未完全闡明，血清中IgD升高主要見于妊娠末期，IgD型骨髓瘤，甲狀腺炎和大量吸煙。IgD降低見于原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、肺硅沉著病（矽肺）、細(xì)胞毒藥物治療后。,IgD測定及臨床意義,15,（一）測定方法 1.總IgE的測定方法 有化學(xué)發(fā)光免疫分析法、放射免疫分析法、乳膠顆粒免疫比濁法及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。在臨床上用化學(xué)發(fā)光免疫分析法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定總IgE較為常見。 2.特異性IgE的檢測方法 主要有免疫斑點(diǎn)法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。商品化的試劑盒提供了多種特異性的變應(yīng)原，

7、包括食物、吸入物以及藥物過敏原，利用這些特異性變應(yīng)原就可以檢測血清中特異性IgE。,IgE測定及臨床意義,16,（二）臨床意義 1.I型變態(tài)反應(yīng)性疾病，如特發(fā)性哮喘、特發(fā)性皮炎、過敏性鼻炎等IgE常升高。 2.非變態(tài)反應(yīng)性疾病，如IgE骨髓瘤、寄生蟲感染等IgE升高。 3.急性或慢性肝炎、SLE、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病IgE可升高。 4. IgE降低見于原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、腫瘤及化療藥物應(yīng)用后。,IgE測定及臨床意義,17,與重鏈結(jié)合成免疫球蛋白的輕鏈稱為結(jié)合輕鏈，未與重鏈結(jié)合的輕鏈稱為游離輕鏈。 游離輕鏈的量最終取決于B細(xì)胞的合成分泌與腎臟清除的動態(tài)平衡結(jié)果，臨床上多種疾病都可導(dǎo)致血清中游離

8、輕鏈濃度異常，例如：免疫抑制，自身免疫，腎臟清除率降低及漿細(xì)胞病等。,什么是游離輕鏈?,18,游離輕鏈通過腎小球?yàn)V過而從血液中快速清除，然后被近端腎小管重吸收和分解，因此游離輕鏈的檢測可以實(shí)時評估病情進(jìn)展，研究表明大量的游離輕鏈可以被腎臟吸收，所以只有非常少的游離輕鏈逃過近端腎小管的重吸收，在正常的尿中含有極少量的游離輕鏈。,19,本周氏蛋白 血清蛋白電泳 免疫固定電泳 免疫比濁法檢測游離輕鏈,游離輕鏈的檢測,20,高敏感性：可達(dá)到5-10mg/L 高特于性 高檢測速率 定量檢測：可同時檢測型和型輕鏈的水平以及兩者的比值，有利于鑒別診斷和監(jiān)測病情的變化,免疫比濁法檢測,21,型游離輕鏈或型游離

9、輕鏈中某一個指標(biāo)濃度異常增高和比值異常，常提示有單克隆類疾病，如多發(fā)性骨髓瘤，巨球蛋白血癥，原發(fā)性淀粉樣變性，輕鏈沉積病等。 型或型游離輕鏈同時增高，可能原因有感染，腎功能受損或結(jié)締組織類疾病。,22,多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)是一種漿細(xì)胞單克隆惡性增生性疾病, 其特征為由晚期B細(xì)胞分化的腫瘤性漿細(xì)胞分泌單克隆免疫球蛋白或重鏈, 并伴有溶骨性病變和/或骨質(zhì)疏松。,多發(fā)性骨髓瘤,23,血常規(guī) 大多數(shù)MM患者血紅蛋白(hemoglobin, Hb)含量和紅細(xì)胞(red blood cell, RBC)計(jì)數(shù)會有一定范圍的降低, 大多數(shù)患者表現(xiàn)為正細(xì)胞正色素性貧血, 也有

10、小部分出現(xiàn)小細(xì)胞低色素性貧血癥狀, 貧血程度會隨著病情的進(jìn)展逐漸加重。白細(xì)胞計(jì)數(shù)多正常, 但也可增高或降低。血小板計(jì)數(shù)早期正?；蛟龈? 病情進(jìn)展時可減少。 外周血涂片成熟RBC的形態(tài)大致正常, 常見RBC重疊排列呈緡線狀。,多發(fā)性骨髓瘤實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查項(xiàng)目,24,白蛋白/球蛋白比值(A/G) 在疾病初期, 大部分MM患者的球蛋白增高, 直接導(dǎo)致總蛋白明顯增加, 白蛋白水平正?；蚪档汀ｋS著病情的進(jìn)展, 肝細(xì)胞合成功能降低導(dǎo)致白蛋白生成降低, 且MM患者蛋白丟失增加, 攝入減少, 也會使白蛋白降低, 導(dǎo)致A/G倒置。,多發(fā)性骨髓瘤實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查項(xiàng)目,25,腎功能檢測 MM患者腎臟損害的發(fā)生由多種因素

11、導(dǎo)致, 其中骨髓瘤細(xì)胞所分泌的單克隆免疫球蛋白輕鏈在腎臟的沉積是導(dǎo)致MM腎病的主要原因。實(shí)驗(yàn)室檢查特征表現(xiàn)為血尿素氮及肌酐水平增高、肌酐清除率降低等, 晚期甚至可出現(xiàn)尿毒癥。,多發(fā)性骨髓瘤實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查項(xiàng)目,26,免疫球蛋白檢測 IgG型MM患者64%80%出現(xiàn)IgG含量增高而IgA和IgM 含量降低, IgA型MM患者只有58%出現(xiàn)IgA含量增高, IgG和IgM 含量減低的占75%100%; 100%IgM型MM患者的IgM 含量都增高, 其它2種免疫球蛋白降低的占61%75%; 71%100%的輕鏈型MM患者IgA、IgG、IgM含量都部分降低。在對MM的免疫球蛋白含量的檢測中, IgG型和IgM型陽性率最高, IgA型次之, 而輕鏈型由于其免疫球蛋白含量增高不明顯, 導(dǎo)致陽性率不高。免疫球蛋白定量檢測不能提示單克隆免疫球蛋白的存在, 但當(dāng)某種類型免疫球