1、環(huán)境毒理學(xué)基礎(chǔ)研究方法，毒理學(xué)實驗調(diào)查研究，1。PPT研究與交流，毒理學(xué)實驗基礎(chǔ)，2。PPT研究與交流、研究方法、流行病學(xué)研究、對照臨床研究、毒理學(xué)體內(nèi)試驗、毒理學(xué)體外試驗、優(yōu)勢、真實暴露條件、有限暴露條帶、易于控制、影響因素少、易于控制化學(xué)品之間發(fā)生的階段。測量人群中的反應(yīng)可以測量多種效應(yīng)相互作用對某一人群的影響(如哮喘)，以評估宿主特征。可以進(jìn)行一些深入的研究來確定對人群的影響。研究是強(qiáng)有力的(如性別、年齡)，而研究(如機(jī)制、新陳代謝)表明了所有人類的敏感性，可以測量影響和其他調(diào)節(jié)的強(qiáng)度傳遞特征，并且它花費(fèi)較少的人力和物力，并且可以評估機(jī)制的缺點(diǎn)，如成本、耗時和耗費(fèi)成本，并且動物接觸和人類

2、接觸之間的相關(guān)性不能完全反映毒性作用，這大多是追溯性的。不健康的低濃度和短期不確定性不能作為防護(hù)室毒性評價和接觸控制的最終依據(jù)，也難以確定人體風(fēng)險評價的接觸量。根據(jù)暴露問題(一般為50)，很難觀察到濃度和暴露時間的模型。慢性毒性的可檢測風(fēng)險增加必須限于需要達(dá)到2倍以上可逆效應(yīng)的人群，且其暴露測量指數(shù)較粗(發(fā)生率，一般不適合研究最大死亡率)。毒理學(xué)研究方法的優(yōu)缺點(diǎn)，3。PPT學(xué)習(xí)與交流，1。實驗動物和人類對外來化學(xué)物質(zhì)有不同的敏感性，有時甚至存在質(zhì)的差異。2.從高劑量到低劑量外推的不確定性。3.從少量實驗動物到大量人群推斷的不確定性。4.從成年健康動物推斷年老、虛弱和患病個體的不確定性。實驗動物

3、毒理學(xué)實驗數(shù)據(jù)推斷與人接觸的安全性的不確定性。4.PPT學(xué)習(xí)與交流，1?；瘜W(xué)物質(zhì)在實驗動物中的作用?；炯僭O(shè)是，人類是最敏感的動物物種；人類和實驗動物的生物過程與體重(或體表面積)有關(guān)。實驗動物必須暴露于高劑量，這是發(fā)現(xiàn)對人類潛在危害的必要和可靠的方法。3.成年健康(男性和女性未懷孕)實驗動物和人類可能的接觸途徑是基本選擇。描述毒理學(xué)試驗的基本原理。PPT學(xué)習(xí)與交流，1。受試物質(zhì)毒性的表現(xiàn)和性質(zhì)。劑量反應(yīng)(效果)研究，3。確定目標(biāo)器官的毒性，4。確定損害的可逆性，以及毒理學(xué)毒性評價試驗的基本目的，6。PPT研究與交流：實驗動物是指經(jīng)過人工培養(yǎng)和控制，攜帶微生物，具有明確的遺傳背景和來源，可用于

4、科學(xué)研究的動物。實驗動物的選擇。PPT研究和交流、實驗動物選擇、物種選擇、對外源化學(xué)物質(zhì)有毒性反應(yīng)的物種選擇以及與人類代謝特征相近的物種選擇；選擇自然壽命不長的物種；選擇易于飼養(yǎng)和實驗的物種；選擇經(jīng)濟(jì)且容易獲得的物種。8、PPT研究與交流，近親繁殖的動物有20多代同胞交配或親子交配。突變動物的突變基因可以代代相傳，并保持遺傳特征。通過兩個不同近親繁殖的雜交動物之間有目的的交配產(chǎn)生的第一代動物也被稱為第一代雜交動物。封閉的動物在超過5年的時間里不會從外部引入新的血緣關(guān)系，只有同種動物在固定的地方飼養(yǎng)和繁殖。實驗動物選擇，品系選擇，9。PPT研究和交換，無菌動物體內(nèi)外都沒有微生物和寄生蟲。沒有特定

5、病原體的動物體內(nèi)沒有特定的微生物和寄生蟲(沒有傳染性疾病)。在封閉系統(tǒng)中長大。清潔動物和SPF之間的區(qū)別在于抗體滴度如腦脊髓炎病毒和小鼠肝炎病毒在抗體中是常見的微生物控制的選擇、實驗動物的選擇、10、PPT研究和交流、個體選擇1年齡2性別3生理狀態(tài)4健康狀態(tài)、實驗動物的選擇、11、PPT研究和交流、354565052 4919786101 5134130150 616618717206 720923210262 8214297240318 9218 小鼠體重與年齡的關(guān)系BALB/C57BL/6 615雌性雄性雌性雄性雌性雄性雌性雄性01.95 2.10 1.40 1.46 1.40 1.44

6、1.58 1.58 15.54 5.82 3.35 3.50 3.42 3.50 4.64 27.90 8.35 5.50 5.60 5.55.60 7.96.9 6 313 我們的結(jié)果如下：4018 . 4020 . 5021 . 8825 . 96 734 . 70 39 . 9016 . 1018 . 6519 . 0021 . 6023 . 1227 . 96 834 . 80 40.05139999895質(zhì)量控制2陰性(溶劑賦形劑)控制：與暴露組比較的基礎(chǔ)3陽性控制：測試測試系統(tǒng)的有效性4歷史控制：檢查的穩(wěn)定性活性成分的百分比含量和可檢測雜質(zhì)的濃度也應(yīng)固定。必須研究和報告受試物質(zhì)在儲

7、存期間的穩(wěn)定性和在飼料中的穩(wěn)定性。被測物質(zhì)應(yīng)一次性準(zhǔn)備好所有實驗劑量。試驗樣本，15，PPT研究與交流，毒理學(xué)試驗設(shè)計的統(tǒng)計要求，常規(guī)毒理學(xué)試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計方法，基于隨機(jī)性、重復(fù)性和控制性原則的測量數(shù)據(jù)：一般情況下，采用T檢驗或方差分析對數(shù)據(jù)進(jìn)行計數(shù)：卡方檢驗，毒理學(xué)試驗統(tǒng)計，16，PPT學(xué)習(xí)與交流，1治療組與對照組之間有無顯著差異？2是否存在劑量-反應(yīng)關(guān)系？3其他相關(guān)參數(shù)是否有變化？4它是否在“正?！敝捣秶鷥?nèi)？17.PPT學(xué)習(xí)和交流？第一節(jié)急性毒性試驗？1.急性毒性試驗的目的：1 .確定受試化學(xué)品急性毒性的劑量-反應(yīng)關(guān)系和中毒特征；2.找出LD50或LC50，為急性毒性評價提供依據(jù)。3.研究毒

8、物的毒代動力學(xué)和毒理過程。表示急性毒性：LD50(對受試物質(zhì)的個體敏感性影響較小，重現(xiàn)性較高)，18，PPT研究和交流，2。試驗程序和評價1動物選擇：優(yōu)選體內(nèi)代謝相似或?qū)υ囼炍镔|(zhì)最敏感的菌株。一般來說：哺乳動物是主要的，老鼠和老鼠是常用的；經(jīng)皮測試：兔子，豚鼠和豬應(yīng)該測試兩種性別的動物，成年人和青少年。選擇兩種以上的實驗動物，最好的一種是嚙齒動物，另一種是非嚙齒動物。(目的：檢查物種間的差異)。PPT學(xué)習(xí)與交流，2 .接觸的方式和方法：一般來說，這和人類接觸是一樣的。(1)口服暴露：通常采用胃內(nèi)給藥的方法，或者被測物質(zhì)可被飲用水中的動物自由攝入。(2)呼吸道中毒：將實驗動物放入有毒氣體或粉塵的

9、中毒柜中進(jìn)行中毒。急性吸入中毒在靜態(tài)中毒瓶(柜)中進(jìn)行24小時。(3)皮膚接觸：主要用于皮膚(或粘膜)化學(xué)吸收引起的急性毒性。正式給藥前24小時，在不傷害皮膚的情況下脫毛。將測試物質(zhì)均勻涂抹在皮膚表面，并用紗布覆蓋24小時。20，PPT學(xué)習(xí)與交流，3個試驗程序：(1)劑量和分組預(yù)試驗：找出受試者的近似致死劑量范圍(死亡率為10%)；例：對化合物a進(jìn)行口服預(yù)試驗.化合物b的化學(xué)結(jié)構(gòu)與化合物a相似，已知=LD50=40(預(yù)期毒性中位數(shù))。然后是2.5，10，40，160，640 (12組分別上下推，組距要大一些，初始差要4倍)，21，PPT學(xué)習(xí)與交流，LD50。正式測試：在LD100和LD0之間設(shè)

10、置57個劑量組。組距(對數(shù))或公式：n-設(shè)計劑量組數(shù)(2)癥狀觀察時間：24h或兩周內(nèi)反應(yīng)，22，PPT研究與交流，23，PPT研究與交流，3，LD50計算方法的計算與結(jié)果評估：概率單位法和科里奧利法。LD50值越低，毒性越大。24，PPT學(xué)習(xí)與交流，25，PPT學(xué)習(xí)與交流，26，PPT學(xué)習(xí)與交流，概率單位法，27，PPT學(xué)習(xí)與交流，28，PPT學(xué)習(xí)與交流，存在正態(tài)曲線關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)差d=(x-)/其中：x劑量對數(shù)。劑量對數(shù)平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，29，PPT學(xué)習(xí)和交流，d=0，左側(cè)區(qū)域(死亡率)50，右側(cè)區(qū)域(存活率)50 d=1，死亡率84.13，d=2，死亡率97.73，d2，死亡率接近100

11、。D=1，死亡率為15.87。D=1 2，死亡率為2.27。D-3，死亡率接近于零。30，PPT研究與交流，31，PPT研究與交流，從上表中，任何死亡率都可以轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的概率單位。32，PPT研究與交流，A:劑量對數(shù)死亡率百分比，B:劑量對數(shù)概率單位，33，PPT研究與交流，34，PPT研究與交流，LC50計算步驟如下：A .根據(jù)死亡率檢查概率單位(死亡率為100或0不計算在內(nèi))B .繪制回歸方程。求濃度(m)的對數(shù)，y=5，它的倒數(shù)是LC50、y=2.78x-2.76。類似地，可以獲得lc5、LC10和35，PPT可以學(xué)習(xí)和交流。找出LC50的置信限，首先找出LC50的標(biāo)準(zhǔn)誤差(sm):s(

12、校準(zhǔn)差)。最大劑量的死亡率優(yōu)選為100或接近100，最小劑量的死亡率優(yōu)選為0或接近100。38，PPT學(xué)習(xí)與交流，其中：Xm最大劑量的對數(shù)值；I相鄰劑量比的對數(shù)；各組死亡率之和(以十進(jìn)制表示)。39，PPT研究和通訊，100只小鼠腹腔注射引起的昆蟲急性毒性試驗結(jié)果如下表所示，以及LD50，40，PPT研究和通訊，其中：p一組死亡率；一個群體的存活率；I相鄰劑量比的對數(shù)；每組動物的數(shù)量。41，PPT研究與交流，42，PPT研究與交流，第2節(jié)亞慢性和慢性毒性試驗一.蓄積試驗及其方法：(1)蓄積效應(yīng)：某些物質(zhì)在小劑量下對身體的重復(fù)作用可增強(qiáng)身體對該物質(zhì)的反應(yīng)性，即在重復(fù)暴露后不會引起明顯中毒反應(yīng)或死

13、亡的劑量。它可分為兩種類型：物質(zhì)積累：從體內(nèi)排出的毒物量小于進(jìn)入體內(nèi)的毒物量，使體內(nèi)儲存的毒物量增加為物質(zhì)積累；功能積累：毒物進(jìn)入體內(nèi)后，并未發(fā)現(xiàn)其明顯儲存在體內(nèi)，但會導(dǎo)致機(jī)體功能變化的逐漸積累，導(dǎo)致對毒物的反應(yīng)性增加。43，PPT學(xué)習(xí)與交流，耐受性：多次暴露后身體對化學(xué)物質(zhì)的反應(yīng)性減弱的現(xiàn)象表明慢性中毒不容易發(fā)生。(2)確定累積效應(yīng)的方法很多，常用的是累積系數(shù)法。累積系數(shù)k: ed50 (n)，即半數(shù)動物多次暴露后有一定影響的總劑量；ED50(1)在同一時間產(chǎn)生了相同的效果。44，PPT學(xué)習(xí)與交流，如果以死亡作為毒性作用的指標(biāo)，k越小，被測化合物的累積毒性越大。45，PPT研究和交流，1固定

14、劑量方法：每日暴露劑量為1/201/5 LD50，并且持續(xù)暴露直到一半的實驗動物死亡。如果累積暴露劑量已經(jīng)達(dá)到5只LD50動物，并且其中一半仍然死亡，則實驗可以結(jié)束。計算累積系數(shù)并進(jìn)行評估。2.遞增劑量法：首先測量LD50(1)，然后每天將另一組動物暴露于毒物中，為期4天，并給予0.1LD50。在每個周期后，劑量將增加1.5倍，直到一半的動物死亡，或者實驗已經(jīng)達(dá)到28天，并且實驗可以結(jié)束并且可以計算系數(shù)。3.20天試驗方法：每個劑量組10只雄性和10只雌性大鼠或小鼠每天暴露于1/2、1/5、1/10和1/20 LD50，持續(xù)20天。如果l/20LD50組的動物死亡并具有劑量-反應(yīng)關(guān)系，則它們具

15、有很強(qiáng)的累積效應(yīng)；如果1/20 LD50組沒有死亡，那就是弱積累。累積系數(shù)的確定，46，PPT學(xué)習(xí)與交流，2。亞慢性毒性及其測試方法：1。目的：確定化學(xué)品亞慢性毒性的閾值劑量和無可見效應(yīng)水平。2.測試期：3月至6月；呼吸吸收：30-90天；皮膚毒性：30天。3.實驗動物的選擇、飼養(yǎng)環(huán)境和中毒方式：實驗動物的選擇：對試驗化學(xué)品敏感的物種或品系；環(huán)境：營養(yǎng)合理，飲用水干凈、充足、溫暖、清淡、濕潤；接觸途徑：嘗試模擬人類在環(huán)境中接觸受試化學(xué)品的情況，這類似于急性毒性試驗。47，PPT研究和交流，4，劑量選擇和分組劑量：180I50LD50。對于不在體內(nèi)積累并迅速排泄的物質(zhì)，可以適當(dāng)增加劑量，反之，可以減少劑量。共有34個實驗組和1個對照組。實驗組要求：在實驗結(jié)束時，最低劑量組不產(chǎn)生可觀察到的毒性反應(yīng)；最高劑量組可引起明顯的毒性反應(yīng)，但不引起死亡；中等劑量組產(chǎn)生輕微毒性反應(yīng)。48，PPT學(xué)習(xí)與交流，5，癥狀觀察的一般指標(biāo)(非特異性)一般綜合指標(biāo)：動物體重增長率，食物消耗率，活動能力等。一般實驗室指標(biāo)：主要指血液、肝腎功能的檢測。(2)特異性指標(biāo)：測量特異性反應(yīng)。更準(zhǔn)確地闡明物質(zhì)的閾值劑量(濃度)和無效劑量(濃度)。(3)病理檢查：實驗中對死亡動物進(jìn)行病理檢查，實驗