1、專題2 微生物的培養(yǎng)與應用,課題2:土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù),【課題目標】,研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用，進行微生物數(shù)量的測定。,【研究對象】,土壤中能分解尿素的細菌,【達到目的】,（1）從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌 （2）統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這 樣的細菌,【研究思路】,（一）篩選菌株,原理：,人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、PH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。,回答： 1、在該配方中，為微生物生長提供碳源和氮源的是什么物質？ 2、絕大多數(shù)的微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，請分析該培養(yǎng)基是否對微生物有選擇作用？如果有，

2、是如何進行選擇的？,葡萄糖、尿素,有選擇作用，,選擇培養(yǎng)基：在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。,【統(tǒng)計菌落數(shù)目】,常用方法：稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計數(shù)法， 還可以用過濾膜法,1、稀釋涂布平板法（也叫活菌計數(shù)法）,原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表 面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋 液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的 菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有 多少活菌。,為了保證結果的準確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進行計數(shù)，若設置的重復組中結果相差太遠，意味著操作有誤，需重新實驗。,計算公式： 每克樣品中的菌落數(shù)=（某一稀釋度下平板上生長的

3、平均菌落數(shù)涂布平板所用稀釋液體積）稀釋倍數(shù),設置重復組，目的是增強實驗的說服力與準確性。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.1ml接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。為是結果接近真實值，可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的平板上，經(jīng)涂布培養(yǎng)，計算出菌落平均數(shù),操作,2、顯微鏡直接計數(shù)法,（1）原理：此法利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。 （2）方法：用計數(shù)板計數(shù)。計數(shù)板是特制的載玻片，其上有特定的面積為1mm2，高為0.1mm的計數(shù)室，一個計數(shù)室又被分成25個

4、（或16個）中格，每個中格再被分成16個（或25個）小格，每個計數(shù)室都由400個小格組成。 （3）操作：將稀釋的樣品滴在計數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計數(shù)45個中格中的細菌數(shù)，并求出每個小格所含的細菌數(shù)，再按計數(shù)公式求出每毫升樣品中所含的細菌數(shù)。 （4）計算公式 每毫升原液所含細菌數(shù)=每小格平均細菌數(shù)X400X10000X稀釋倍數(shù) （5）缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。,3過濾膜法,以測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例。將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍培養(yǎng)液基上培養(yǎng)。在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色?？梢愿鶕?jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。,思考題,1.想一想，如何

5、從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？,答：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進行計算。,A同學的結果與其他同學不同，可能的解釋有兩種。 一是由于土樣不同； 二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。,（三）設置對照,究竟是哪個原因，可以通過實驗來證明。,另一種方案： 將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過這個事例可以看出，實驗結果要有說服力，對照的設置是必不可少的。,實驗方案有兩種,一種方案： 可以由其他同學用與A同學一樣的土樣進行實驗，如果結果與A同學一致，則證明A無誤；如果結果不同，則證明A同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。,四、實驗案例,實