1、血清堿性磷酸酶活性測定、磷酸本二鈉法、酶活性測定和酶法分析、酶活性測定酶活性：即酶活性，表現(xiàn)出催化某些反應(yīng)的能力。 可以在某種條件下被催化的某種特定的化學(xué)速度來表示。 酶催化反應(yīng)速度越快酶活性越低，相反越低酶活性越低。 基質(zhì)減少量或生成物增加量酶反應(yīng)促進速度=單位時間，影響酶反應(yīng)促進速度的因素有基質(zhì)濃度、酶濃度、ph值、溫度、活化劑、抑制劑等。 所謂酶活性單元，是指在特定條件下1分鐘能夠?qū)?微摩爾的基質(zhì)轉(zhuǎn)換為基質(zhì)所需要的酶量，或者是能夠轉(zhuǎn)換基質(zhì)中1微摩爾的相關(guān)基團的酶數(shù)。 酶的比活性：每單位質(zhì)量的酶蛋白或每單位體積的酶制劑中含有的酶活性單位數(shù)。 方法：1.測定法(定時法或終點法)2.動力學(xué)分析

2、法(連續(xù)監(jiān)測法或速度法)3.物質(zhì)含量測定方法；指以停止酶法分析的酶為工具定量測定某物質(zhì)含量的分析方法。 (1)單酶反應(yīng)定量法1、直接測定基質(zhì)含量2、由輔酶變化量測定基質(zhì)量(2)偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法E1 E2 A B C、酶活性測定和酶法分析的醫(yī)學(xué)應(yīng)用、實驗?zāi)康摹?1 .熟悉酶活性測定方法的一般原理2 .掌握血清ALP測定原理和臨床意義3在實驗原理PH10環(huán)境下，ALP催化磷酸苯二鈉的水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，苯酚與4氨基安替比林反應(yīng)生成色素原，該色素原是鐵氧體測量紅色物質(zhì)的吸光度可以修正酶活性的大小。 反應(yīng)式為磷酸苯二鈉H2O酚磷酸氫二鈉酚4-氨基銻吡啶紅色醌衍生物、實驗器材和試劑： (1)器材：

3、 5ml移液管、1ml移液管、100或200ul微量可變式移液管、721E分光光度校正、1 37恒溫水浴(二)試劑： 10.1mol/L碳酸鹽緩沖液(pH10.0 )取無水碳酸鈉6.36g、碳酸氫鈉3.36g、4氨基銻吡啶1.5g，溶解于800ml蒸餾水，定容為1L。 放入茶色的瓶子里保存。 220mmol/L的磷酸苯二鈉溶液將蒸餾水500ml煮沸，將磷酸苯二鈉2.18g (含有磷酸苯二鈉2分子結(jié)晶水時為2.54g )加入到煮沸的蒸餾水中使其溶解，冷卻后，用煮沸的冷蒸餾水加入500ml， 加入氯仿2ml保存在冰箱中的三鐵氰化鉀硼酸溶液，取鐵氰化鉀2.5g、硼酸17g，分別溶解于400ml蒸餾水

4、，混合兩種溶液后，向1400 ml蒸餾水加入，裝入茶色的瓶子中，避開光進行保存(圖3 ) 。 4酚標(biāo)準(zhǔn)工作液(0. 05mg/ml ) :購買合格的二級標(biāo)準(zhǔn)品。 取4根試驗操作、試管，立即攪拌下表操作：、 以波長比510nm用蒸餾水調(diào)整零點，讀取各管的吸光度。 ALP活性=(A測定a對照)/(A標(biāo)準(zhǔn)a空白) *0.05*100 (金氏單位)，臨床意義臨床上血清ALP測定常作為肝膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標(biāo)。 1血清ALP活性升高肝膽疾?。汗Ｗ栊渣S疸、急性或慢性黃疸性肝炎、肝癌等骨骼疾病：骨損傷或疾病導(dǎo)致成骨細胞內(nèi)含有的高濃度ALP釋放到血液中，血清ALP活性提高，如引起纖維性骨炎、成骨不全、佝僂病、骨軟化癥、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修復(fù)愈合期等2血清ALP活性下降：較少見，主要見于逗留小病、ALP過少癥、維生素c缺乏癥。 注意事項1基質(zhì)溶液中不得含有游離苯酚。 如果有苯酚，空管變成紅色，表示磷酸苯二鈉開始分解，請不要廢棄。 2在鐵氰化鉀溶液中加入硼酸有穩(wěn)定的顯色作用。 此液請避光保存，出現(xiàn)青綠色后廢棄。 3加入鐵氰化鉀溶液后，必須馬上攪拌。 不那樣的話，顯色不完全。4黃疸血清及溶血血清可分別共用對照管，標(biāo)準(zhǔn)曲線法取6根試管，分別加入酚標(biāo)準(zhǔn)液(1ml=01mg )、0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4ml，各攪拌后37水浴保溫5分鐘，各管加入堿溶液1.0ml 靜置10分鐘