1、中藥的檢驗,化 驗 室,2018年6月,1,中藥材及其炮制品的常用檢查,一般檢查 限量檢查,雜質(zhì) 水分 總灰分 酸不溶灰分,浸出物 二氧化硫 含量測定 黃曲霉素,2,雜質(zhì)的來源,一是由中藥材原料中帶入； 二是在生產(chǎn)制備過程中引入； 三是貯存過程中受外界條件的影響，制劑的理化性質(zhì)改變而產(chǎn)生。,3,雜質(zhì),藥材中混存的雜質(zhì)系指下列各類物質(zhì)： 一、來源與規(guī)定相同，但其性狀或部位與規(guī)定不符； 二、來源與規(guī)定不同的物質(zhì)； 三、無機雜質(zhì)，如砂石、泥塊、塵土等。,4,雜質(zhì)檢查法(通則2301),檢查方法 1. 取規(guī)定量的供試品，攤開，用肉眼或放大鏡（510倍）觀察，將雜質(zhì)揀出；如其中有可以篩分的雜質(zhì)，則通過適

2、當?shù)暮Y，將雜質(zhì)分出。 2. 將各類雜質(zhì)分別稱重，計算其在供試品中的含量（%）。,5,【注意】 1.藥材中混存的雜質(zhì)如與正品相似，難以從外觀鑒別時，可稱取適量，進行顯微、化學(xué)或物理鑒別試驗，證明其為雜質(zhì)后，計入雜質(zhì)重量中。 2.個體大的藥材，必要時可破開，檢查有無蟲蛀、霉爛或變質(zhì)情況。 3.雜質(zhì)檢查所用的供試品量，除另有規(guī)定外，按藥材取樣法稱取。,雜質(zhì)檢查法(通則2301),6,水分測定法（通則0832）,第一法（費休氏法）適用于多種有機和無機物中含水的測定。 第二法(烘干法) 適用于不含或少含揮發(fā)性成分的藥品。 第三法(減壓干燥法) 適用于含有揮發(fā)性成分的貴重藥品。 第四法(甲苯法) 適用于含

3、揮發(fā)性成分的藥品。 第五法（氣相色譜法） 適用于中藥制劑中微量水分的測定。,7,甲苯法測定水分,A 為500mL的短頸圓底燒瓶， B 為水分測定管； C 為直形冷凝管，外管長40cm。 使用前，全部儀器應(yīng)清潔，并置烘箱中烘干。,8,甲苯法測定水分,取供試品適量（約相當于含水量14ml），精密稱定，置A瓶中,加甲苯約200ml，必要時加入干燥、潔凈的沸石或玻璃珠數(shù)粒，將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿B管的狹細部分。將A瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱,待甲苯開始沸騰時，調(diào)節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，即測定管刻度部分的水量不再增加時,將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗, 再用

4、飽蘸甲苯的長刷或其他適宜的方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離（可加亞甲藍粉末少量，使水染成藍色，以便分離觀察）。檢讀水量，并計算供試品中的含水量（%）。,9,灰分測定法（通則02302）,總灰分：中藥經(jīng)粉碎后加熱，高溫?zé)胱浦粱一?，稱定重量計算結(jié)果。 酸不溶性灰分：中藥經(jīng)高溫?zé)胱频玫降目偦曳旨酉←}酸處理，得到不溶于稀鹽酸的灰分，稱為酸不溶性灰分。,10,總灰分測定法,稱取供試品23g（如需測定酸不溶性灰分，可取供試品35g），置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量（準確至0.01 g），緩緩熾熱，

5、注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500600，使完全炭化并至恒重，根據(jù)殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量（%）。,11,酸不溶性灰分測定法,供試品先按總灰分測定的方法測定其總灰分，然后取所得的灰分，在坩堝中注意加入稀鹽酸約10ml，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10分鐘，表面皿用熱水5ml沖洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘渣用水洗于濾紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移至同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中含酸不溶性灰分的含量（%）。,12,灰分測定的注意事項,1. 測定前先將供試品稱取適量粉碎，使其能通過2號篩，將粉末混合均勻后再取

6、樣。 2. 如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10%硝酸銨溶液2ml；使殘渣濕潤，然后置水浴上蒸干，得到的殘渣再按上面所說的方法熾灼至坩堝內(nèi)容物完全灰化。,13,浸出物測定法（通則2201）,浸出物分為水溶性、醇溶性、揮發(fā)性醚三種方法；同時水溶性和醇溶性又分為冷浸法和熱浸法兩種。其方法相同，不同的是使用的溶劑；水溶性使用的是水；醇溶性除另有規(guī)定外，以各品種項下規(guī)定濃度的乙醇代替水溶劑。 1. 冷浸法 樣品加水100ml，靜置24小時后，取續(xù)濾液20ml，水浴蒸干，干燥3小時，放冷，稱定重量。 2. 熱浸法 樣品加溶劑50ml，稱定重量，靜置1小時后，連接冷凝管，加熱回流1小時。放冷，補足

7、重量，取續(xù)濾液25ml，水浴蒸干，干燥3小時，放冷，稱定重量。,14,二氧化硫殘留量測定法（通則2331）,為什么要測定？ 方法 硫磺具有漂白、增艷、防蟲等作用，某些中藥材在加工過程中有用硫磺熏蒸的習(xí)慣，殘留的S02可能影響人體健康。 從2005版藥典開始規(guī)定，中藥材不再允許使用硫磺熏蒸，并要求對其進行檢測。,15,二氧化硫殘留量測定法（2015）,A 為1000ml兩頸圓底燒瓶； B 為豎式回流冷凝管； C 為（帶刻度）分液漏斗； D 為連接氮氣流入口； E 為二氧化硫氣體導(dǎo)出口。 另準備電熱套及高濃度氮。,16,取藥材或飲片細粉約10g，精密稱定，置兩頸圓底燒瓶中，加水300-400ml，

8、連接回流冷凝管以及刻度分液漏斗，并給水。在冷凝管的上端E口處連接導(dǎo)氣管，將導(dǎo)氣管插入100ml錐形瓶底部。錐形瓶內(nèi)加3%過氧化氫溶液50ml作為吸收液，使用前，加3滴甲基紅乙醇溶液指示劑，并用0.01mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色 。開通氮氣，打開分液漏斗活塞，加入6mol/L鹽酸溶液10ml，立即加熱兩頸圓底燒瓶內(nèi)的溶液至沸，并保持微沸；1.5小時后，停止加熱。放冷后，用氫氧化鈉滴定液滴定，至黃色持續(xù)20秒鐘不褪，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。,17,A為供試品消耗氫氧化鈉滴定液的體積，ml； B為空白消耗氫氧化鈉滴定液的體積，ml； C為氫氧化鈉滴定液濃度，mol/L； 0.032為每

9、1ml氫氧化鈉滴定液（1mol/L）相當?shù)亩趸虻馁|(zhì)量，g。 W為供試品的重量，g；,供試品中二氧化硫殘留量（mg/g）=,6,18,含量（高效液相）測定法（通則0512）,為什么要測定？ 方法簡述 注意事項,19,中藥組成復(fù)雜，產(chǎn)生療效的不是某單一成分，檢測任何一種活性成分均不能反映中藥的整體療效。 但是借鑒化藥質(zhì)量控制模式，測定某一味藥味的有效成分、活性成分、指標性成分的含量的方法，對于控制中藥質(zhì)量起著不可替代的重要作用。 通過測定中藥中有效成分、毒性成分或某些指標性成分的含量來衡量其生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性和中藥材的質(zhì)量優(yōu)劣，以保證中藥的質(zhì)量，達到臨床用藥安全、有效的目的。,檢查含量的必要性,

10、20,本法是將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、 緩沖劑等作為流動相, 用泵將流動相壓入裝有填充劑的色譜柱, 注入供試品, 經(jīng)流動相帶入柱內(nèi), 用記錄儀記錄色譜圖, 從而達到定性及定量的目的。本法應(yīng)用范圍比氣相色譜廣, 只要樣品能制成溶液, 就可進行分析, 尤其是中藥的含量測定, 更為適用。,高效液相測定法的原理,21,1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 根據(jù)中國藥典項下對各品種的規(guī)定，選擇色譜柱、流動相、檢測波長；并核對檢測后的理論板數(shù)。 2、對照品溶液的制備 根據(jù)中國藥典項下對各品種的規(guī)定，按其要求完成對照品的稱重、配制。 3、供試品溶液的制備 根據(jù)中國藥典項下對各品種的規(guī)定， 按其要

11、求完成樣品的粉碎、稱重、提取、制備。 4 測定法 分別將對照品與供試品溶液按中國藥典要求注入色譜儀，通過所得數(shù)據(jù)用外標法進行計算，得出結(jié)果并打印保存圖譜。,高效液相測定法方法簡介,22,高效液相測定法注意事項,1、貯液器：盡可能使用HPLC的溶劑和試劑。含有緩沖鹽和非HPLC的流動相一定要通過0.5um的過濾器。改變流動相時應(yīng)防止交叉污染，陳舊的流動相和用久了的試劑瓶應(yīng)定期廢棄，防止生長微生物和組分改變。貯器內(nèi)壁定期清洗，里面的附件要經(jīng)常更換。 2、泵： 密封墊圈是最易磨損的部件。密封墊圈的損壞可引起系統(tǒng)的許多故障。最好3個月?lián)Q一次墊圈。要注意防止因泵堵塞造成的壓力過高而損壞柱塞桿或燒壞電機。

12、延長墊圈壽命的措施（1）每次把泵的緩沖液洗干凈，防止鹽沉積，泵要浸在無緩沖液的溶液或有機溶劑中（2）用HPLC級試劑,23,3、進樣器：停機后要用溶劑沖洗干凈進樣器內(nèi)的殘留的樣品和緩沖鹽，防止無機鹽沉積和樣品微粒造成閥轉(zhuǎn)子面磨損或阻塞。嚴禁用尖針頭進樣。 4、柱：防止柱性能下降的措施：（1）溶劑的化學(xué)腐蝕性不能太強；（2）避免微粒在柱頭沉降；（3）泵上要裝壓力限制器，防止壓力過高沖擊過大；（4）流動相ph7時用大粒度同種填料作預(yù)柱（5）柱頭加燒結(jié)不銹鋼濾片，需要時加保護柱。采用正確的制備樣品方法和經(jīng)常清洗柱也能延長壽命。 柱在不用時要保存好，要洗去緩沖液防止生長微生物。應(yīng)加入大于10的有機溶劑

13、，將柱兩端用蓋擰緊，保持柱填料濕潤不造成裂縫。 5、檢測器：保持清潔，用后連同柱一起沖洗。提倡不定期用強溶劑反向沖洗檢測池（拆開柱）用脫氣流動相，以防空氣泡卡在池內(nèi)。不用時不開燈。,高效液相注意事項,24,由色譜柱引起的故障及解決辦法,25,黃曲霉毒素測定法（通則2351）,為什么要測定？ 方法 注意事項,26,檢查黃曲霉素的必要性,中藥材采集后干燥或貯存不當，或在制備和加工過程中處理不善，可能污染在自然界普遍存在的黃曲霉而產(chǎn)生黃曲霉毒素，黃曲霉毒素具有極強的毒性和致癌性，故需對中藥材及中藥制劑中黃曲霉毒素含量進行控制。,27,黃曲霉的基本結(jié)構(gòu),黃曲霉毒素是一類結(jié)構(gòu)相似的化合物，其基本結(jié)構(gòu)都有

14、二呋喃和香豆素。黃曲霉毒素在紫外線照射下，都能了出熒光，根據(jù)熒光顏色、Rf值及結(jié)構(gòu)等不同，分別命名為B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q等。,B1,B2,G1,28,黃曲霉毒素測定法（2015）,本法系用高效液相色譜法（通則0512）測定藥材、飲片及制劑中的黃曲霉毒素（以黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2總量計），除另有規(guī)定外，按下列方法測定。 規(guī)定：B15g/kg，G2+G1+B2+B1的總量 10g/kg。,29,黃曲霉毒素測定法（2015）,色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水（40：18：42）為流動相，流速每分鐘0.8ml；采用柱后衍生法檢

15、測，衍生溶液為0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀釋至1000ml制成），衍生化泵流速每分鐘0.3ml，衍生化溫度70；以熒光檢測器檢測，激發(fā)波長ex=360nm（或365nm），發(fā)射波長em=450nm。兩個相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。,30,黃曲霉毒素測定法（2015）,混合對照品溶液的制備 精密量取黃曲霉毒素混合標準品（黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標示濃度分別為1.0g/ml、0.3g/ml、1.0g/ml、0.3g/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為儲備液。精密量取儲備液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。,3

16、1,黃曲霉毒素測定法（2015）,供試品溶液的制備 取供試品粉末約15g（過二號篩），精密稱定，加入氯化鈉3g，置于均質(zhì)瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速攪拌2分鐘（攪拌速度大于11000轉(zhuǎn)/分鐘），離心5分鐘（離心速度2500轉(zhuǎn)/分鐘），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45m）濾過，量取續(xù)濾液20.0ml，通過免疫親合柱（AflaT-estP）,流速每分鐘3ml，用水20ml洗脫，洗脫液棄去，使空氣進入柱子，將水擠出柱子，再用適量甲醇洗脫，收集洗脫液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。,32,黃曲霉毒素測定法（2015）,測定法 分別精密吸取上述混合對照品溶液5l、10l、15l、20l、25l，注入液相色