1、生物化學實驗習題及解答一、名詞解釋1、pI；2、層析；3、透析；4、SDS-聚丙烯酰氨凝膠電泳；5、蛋白質變性；6、復性；7、Tm 值；8、同工酶；9、Km值； 10、DNA變性；11、退火；12、增色效應1、A；2、C；3、B；4、A；5、A；6、B；7、B；8、C；9、D；10、A；11、A；12、D；13、A；二、基礎理論單項選擇題1、用下列方法測定蛋白質含量，哪一種方法需要完整的肽鍵？（A ）A、雙縮脲反應 B、凱氏定氮 C、紫外吸收 D、羧肽酶法2、下列哪組反應是錯誤的？ （C ） A、葡萄糖Molish反應 B、膽固醇Libermann-Burchard反應 C、色氨酸坂口（Sak

2、aguchi）反應 D、氨基酸茚三酮反應3、Sanger試劑是（ B ） A、苯異硫氰酸 B、2，4-二硝基氟苯 C、丹磺酰氯 D、b-巰基乙醇4、肽鍵在下列哪個波長具有最大光吸收？（ A ） A、215nm B、260nm C、280nm D、340nm5、下列蛋白質組分中，哪一種在280nm具有最大的光吸收？（ A ） A、色氨酸的吲哚基 B、酪氨酸的酚環(huán) C、苯丙氨酸的苯環(huán) D、半胱氨酸的硫原子6、SDS凝膠電泳測定蛋白質的相對分子量是根據(jù)各種蛋白質（B ） A、在一定pH值條件下所帶的凈電荷的不同 B、分子大小不同 C、分子極性不同 D、溶解度不同7、蛋白質用硫酸銨沉淀后，可選用透析法

3、除去硫酸銨。硫酸銨是否從透析袋中除凈，你選用下列哪一種試劑檢查？ （B ） A、茚三酮試劑 B、奈氏試劑 C、雙縮脲試劑 D、Folin-酚試劑8、蛋白質變性是由于（ C ） A、一級結構改變 B、亞基解聚 C、空間構象破壞 D、輔基脫落9、用生牛奶或生蛋清解救重金屬鹽中毒是依據(jù)蛋白質具有（D ） A、膠體性 B、粘性 C、變性作用 D、沉淀作用10、有關變性的錯誤描述為（ A ） A、蛋白質變性后，其一級結構和空間結構改變 B、蛋白質變性后，其理化性質和生物學活性改變C、加熱、紫外線照射、超聲波等可以引起蛋白質變性D、變性蛋白質粘度增加，易被酶水解，易沉淀11、雙鏈DNA熱變性后（ A ）

4、A、黏度下降 B、沉降系數(shù)下降 C、浮力密度下降 D、紫外吸收下降12、酶的活化和去活化循環(huán)中，酶的磷酸化和去磷酸化位點通常在酶的哪一種氨基酸殘基上？（D ） A、天冬氨酸 B、脯氨酸 C、賴氨酸 D、絲氨酸13、在生理條件下，下列哪種基團既可以作為H+的受體，也可以作為H+的供體？（A ） A、His的咪唑基 B、Arg的胍基 C、Cys的巰基 D、Trp的吲哚基三、填空1、脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應產(chǎn)生（ ）色物質，而其他氨基酸與茚三酮產(chǎn)生（ ）色的物質。2、通?？捎米贤夥止夤舛确y定蛋白質的含量，這是因為蛋白質分子中的（ ）、（ ）、（ ）三種氨基酸的共軛雙鍵有紫外吸收能力。3、移液槍

5、在每次實驗后應將刻度調(diào)至（ ），讓彈簧回復原型以延長移液槍的使用壽命，并嚴禁吸取（ ）。4、使用離心機時，如有噪音或機身振動時，應立即（ ），并且離心管須對稱放入套管中，防止機身振動，若只有一支樣品管，則另外一支要用（ ）代替。5、測定蛋白質濃度的方法主要有（ ）、（ ）、（ ）。6、利用蛋白質不能通過半透膜的特性，使它和其他小分子物質分開的方法有（ ）和（ ）等。7、核酸在260nm附近有強吸收，這是由于（ ）。8、雙鍵DNA熱變性后，或在pH2以下，或在pH12以上時，其OD260（ ），同樣條件下，單鍵DNA的OD260（ ）。9、硝酸纖維素膜可結合（ ）鏈核酸。將RNA變性后轉移到硝酸

6、纖維素膜上再進行雜交，稱（ ）印跡法。10、常用二苯胺法測定（ ）含量，用苔黑酚法測定（ ）含量。11、變性DNA的復性與許多因素有關，包括（ ）、（ ）、（ ）、（ ）、（ ）。12、溫度對酶活力影響有以下兩方面：一方面（ ），另一方面（ ）。13、維生素C是（ ）酶的輔酶，另外還具有（ ）作用。14、在分光光度計的使用或檢定中，（ ）的準確度是衡量儀器工作性能的一項重要指標，它的準確程度直接關系到所測數(shù)據(jù)的可信性及科學性。（ ）的誤差越大，測試結果的可信性越差,從而影響到測試數(shù)據(jù)的準確性。四、問答1、紫外分光光度法測定核酸含量的原理。2、蛋白質變性與沉淀的關系。3、牛乳中制備酪蛋白的原理和

7、方法。4、試述凝膠成像系統(tǒng)操作時應注意的事項。5、若樣品中含有蛋白質和核苷酸等雜質，如何排除干擾？6、體液血糖測定有哪些方法？7、DNA在電場中的遷移率取決于哪些因素？8、瓊脂糖凝膠有哪些注意事項？9、考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質含量的原理是什么？10、何謂Rf值？影響Rf值的主要因素是什么？11、蛋白質分離和純化的一般方法？ 12、如何正確選擇核酸電泳指示劑？參考答案一、名詞解釋1、指氨基酸的正離子濃度和負離子濃度相等時的pH值，用符號pI表示。2、按照在移動相和固定相（可以是氣體或液體）之間的分配比例將混合成分分開的技術。3、通過小分子經(jīng)過半透膜擴散到水（或緩沖液）的原理，將小分子與生

8、物大分子分開的一種分離純化技術。4、在去污劑十二烷基硫酸鈉存在下的聚丙烯酰氨凝膠電泳。SDS-PAGE只是按照分子的大小，而不是根據(jù)分子所帶的電荷大小分離的。5、生物大分子的天然構象遭到破壞導致其生物活性喪失的現(xiàn)象。蛋白質在受到光照，熱，有機溶濟以及一些變性濟的作用時，次級鍵受到破壞，導致天然構象的破壞，使蛋白質的生物活性喪失。6、在一定的條件下，變性的生物大分子恢復成具有生物活性的天然構象的現(xiàn)象。7、核酸分子變性過程中，紫外吸收達到最大增量一半時的溶解溫度。8、能催發(fā)相同的反應類型但其理化性質及免疫學性質不同的酶。9、反應速度為最大反應速度一半時的底物濃度。是酶的特征物理學常數(shù)之一。近似表示

9、酶與底物的親和力。10、DNA雙鏈解鏈，分離成兩條單鏈的現(xiàn)象。11、既DNA由單鏈復性、變成雙鏈結構的過程。來源相同的DNA單鏈經(jīng)退火后完全恢復雙鏈結構的過程，同源DNA之間DNA和RNA之間，退火后形成雜交分子。12、當雙螺旋DNA熔解（解鏈）時，260nm處紫外吸收增加的現(xiàn)象。二、基礎理論單項選擇題1、A；2、C；3、B；4、A；5、A；6、B；7、B；8、C；9、D；10、A；11、A；12、D；13、A；三、填空1、黃、紫2、Trp、Tyr、phe3、最大、強揮發(fā)性、強腐蝕性的液體。4、切斷電源，即時排除故障；等質量的水5、雙縮脲法、Folin-酚試劑法、凱氏定氮法6、透析、超濾7、在

10、嘌呤堿基和嘧啶堿基中存在共軛雙鍵8、增加、不變9、單、Northern10、DNA、RNA11、樣品的均一度、DNA的濃度、DNA片段的大小、溫度的影響、溶液的離子強度12、溫度升高，可使反應速度加快；溫度太高，會使酶蛋白變性而失活13、羥化、解毒14、透射比或吸光度、透射比或吸光度四、問答1、答 ：核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵系統(tǒng)，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波長處。一般在260nm波長下，每1ml含1g RNA溶液的光吸收值為0.0220.024，每1m1含1g DNA溶液的光吸收值約為0.020，故測定未知濃度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可計

11、算出其中核酸的含量。此法操作簡便，迅速。若樣品內(nèi)混雜有大量的核苷酸或蛋白質等能吸收紫外光的物質，則測光誤差較大，故應設法事先除去。2、答 ： 沉淀可以是由蛋白質變性從而產(chǎn)生沉淀，也可以是由于鹽析。 蛋白質變性是指光照，熱，有機溶濟以及一些變性劑（如重金屬鹽）的作用時蛋白質的空間結構被破壞，使得蛋白質喪失活性，該過程不可逆。 鹽析是指向蛋白質的溶液中加入輕金屬鹽，使得蛋白質沉淀析出，這是由于加入鹽降低了蛋白質得溶解度而析出，該過程可逆，加水蛋白質又會溶解。 二者本質上是不同的。3、答 ：牛奶含有半乳糖、蛋白質、脂肪成分。蛋白質中的酪蛋白通過等電點沉淀，再通過離心而獲得，糖類小分子由于處于清夜中而

12、分離，沉淀物中所含有的脂肪通過有機溶劑抽提而去除，最終得到純白色、晶狀酪蛋白。方法：取新鮮牛乳，用酸堿調(diào)PH到酪蛋白的等電點沉淀析出酪蛋白，然后洗滌，醇醚吸水至干燥得粉末稱重，計算提取率。步驟：保溫調(diào)PH沉淀離心洗滌干燥稱量4、答：1）紫外凝膠照相時要防止EB污染儀器，在紫外透射燈樣品臺上墊上藍色和白色膠片，開關凝膠成像系統(tǒng)前面板那、操作GeneSnap軟件之時都不可以戴手套。白光透射光源放置在紫外透射光源上面時要把藍色和白色膠片取出。2）注意開機順序，先開凝膠成像系統(tǒng)，再打開電腦進入GeneSnap軟件。3）在使用紫外光源照相的過程中，不可以打開凝膠成像系統(tǒng)前面板。5、答： 用去垢劑（如SD

13、S，十二烷基磺酸鈉）使蛋白質變性，RNA通過RNase消化清除。6、答：測定血糖的方法常用的有三種：靜脈血漿葡萄糖（VPG），毛細血管全血葡萄糖（CBG）和靜脈全血葡萄糖（VBG）。7、答： 1） DNA的分子大小及構型： ?8 不同構型DNA的移動速度次序為：供價閉環(huán)DNA（covalently closed circular，cccDNA）直線DNA開環(huán)的雙鏈環(huán)狀DNA。2）瓊脂糖濃度：一個給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。DNA電泳遷移率的對數(shù)與凝膠濃度成線性關系。凝膠濃度的選擇取決于DNA分子的大小。& t, j6 Gh/ 4 G9 N& Y3）DN

14、A分子的構象 ：當DNA分子處于不同構象時,它在電場中移動距離不僅和分子量有關,還和它本身構象有關。相同分子量的線狀、開環(huán)和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動速度是不一樣的,超螺旋DNA移動最快,而線狀雙鏈DNA移動最慢。 + * V$ u! W9 a2 z; z4）電源電壓 ：瓊脂糖凝膠分離大分子DNA實驗條件的研究結果表明，在低濃度、低電壓下，分離效果較好。: T9 D3 Y$ o) A! w: & D0 ?4 ( R5) 嵌入染料的存在 ：熒光染料溴化乙啶用于檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的堿基對之間并拉長線狀和帶缺口的環(huán)狀DNA，使其剛性更強,還會使線狀DNA遷移率降低15。/

15、 6 N7 L5 m# B6）離子強度影響 ：電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。8、答： 1）緩沖液的使用要正確，長時間高壓電泳時，常更新緩沖液或在兩槽間進行緩沖液的循環(huán)是可取的。2）瓊脂糖的影響。3）凝膠中所加緩沖液應與電泳槽中的相一致。4）樣品加入量的多少。5）電泳系統(tǒng)的變化會影響DNA的遷移，加入DNA標準參照物進行判定是必要的。6）DNA樣品中的鹽濃度也影響DNA的遷移率。7）DNA遷移率取決于瓊脂糖凝膠的濃度、遷移分子的形狀及大小。9、答： 考馬斯亮藍G-250（Coomassie brilliant blue G-250）染料，在游離狀態(tài)下溶液呈棕紅色，當它與蛋白質結合后變?yōu)樗{色。蛋白質含量在01000g范圍內(nèi)，蛋白質-色素結合物在595nm下的吸光度與蛋白質含量成正比，故可用比色法進行定量分析?？捡R斯亮藍G-250法（Bradford法）是比色法與色素法相結合的復合方法，簡便快捷，靈敏度高，穩(wěn)定性好，是一種較好的蛋白質常用分析方法。10、答： Rf為氨基酸的比移值。影響紙層析遷移率Rf值的主要因素：1、樣品本身的性質和結構；2、溶劑的性質；3、PH值；4、溫度；5、濾紙性質。11、答：主要有以下一些方法：透析及超濾法；丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀；電泳；層析；超速離心。12、答： 核酸電泳常