1、臨床微生物標(biāo)本規(guī)范化采集和送檢 中國專家共識,中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會醫(yī)院感染控制分會 2017年1月,01,微生物標(biāo)本采集的基本原則,02,03,04,目錄,微生物標(biāo)本運(yùn)送的基本原則,微生物實驗室對標(biāo)本的拒收標(biāo)準(zhǔn),微生物標(biāo)本采集及注意事項,一、微生物標(biāo)本采集的基本原則,在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本。 2. 無菌部位的標(biāo)本更具有臨床價值，有菌部位采集的標(biāo)本需要清除正常菌群和定植細(xì)菌才有意義。尤其是血培養(yǎng)。有菌部位標(biāo)本應(yīng)避免“正常菌群導(dǎo)致標(biāo)本的污染”。 3. 標(biāo)本的標(biāo)簽和申請單信息要完整。對于每一份標(biāo)本，實驗室都需要了解該患者和標(biāo)本的詳細(xì)信息以及醫(yī)生的送檢目的。 4. 嚴(yán)格無菌操作。應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，避免標(biāo)

2、本被污染。盛放標(biāo)本的容器須經(jīng)滅菌處理。采集無菌標(biāo)本時應(yīng)注意對局部及周圍皮膚的消毒。如使用消毒液消毒皮膚，須作用一定時間，待其干燥后采樣。,二、生物標(biāo)本運(yùn)送的基本原則,1. 所有標(biāo)本采集后都應(yīng)盡快送往實驗室，多數(shù)標(biāo)本應(yīng)在2小時內(nèi)送達(dá)。有些樣本量小的標(biāo)本應(yīng)在采樣后15-30分鐘內(nèi)送達(dá)。 2. 保證必要的運(yùn)送條件：不同種類的標(biāo)本因檢測的目標(biāo)致病微生物不同，對標(biāo)本保存和運(yùn)送的環(huán)境條件有不同的要求（詳見附表）。對溫度敏感的細(xì)菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血桿菌等應(yīng)保溫并立即送檢。,二、生物標(biāo)本運(yùn)送的基本原則,三、微生物實驗室對標(biāo)本的拒收標(biāo)準(zhǔn),標(biāo)本采集至實驗室接收過程間隔過長，或無標(biāo)本采集時間，或保

3、存的溫度不當(dāng)。 標(biāo)本運(yùn)送條件不正確：如厭氧培養(yǎng)標(biāo)本卻在有氧條件下送檢。 容器不規(guī)范：如容器有裂縫或被打破導(dǎo)致標(biāo)本泄露、容器非無菌等。 未貼標(biāo)簽或貼錯標(biāo)簽：標(biāo)本與檢驗?zāi)康牟环?，如痰培養(yǎng)送檢尿標(biāo)本；患者信息與標(biāo)本不符，如女性患者送檢前列腺標(biāo)本。 標(biāo)本明顯被污染，如痰標(biāo)本中混有食物殘渣等。,三、微生物實驗室對標(biāo)本的拒收標(biāo)準(zhǔn),拭子上的標(biāo)本已經(jīng)干涸。 標(biāo)本不符合檢驗要求，如痰標(biāo)本以唾液為主。 標(biāo)本使用了固定劑或防腐劑。 標(biāo)本量太少。 一支拭子要求檢驗項目太多。 24小時內(nèi)重復(fù)送檢的標(biāo)本（血培養(yǎng)除外）。,四、標(biāo)本采集血培養(yǎng),一、臨床采樣指征： 菌血癥：T:38或36，或寒戰(zhàn)；WBC計數(shù)10.0109/L

4、，中性粒增多，或者1天或者拔除導(dǎo)管38、寒顫或低血壓等全身感染表現(xiàn)，不能除外由血管內(nèi)導(dǎo)管引起感染可能的，應(yīng)多次進(jìn)行血培養(yǎng)檢測。,四、標(biāo)本采集血培養(yǎng),二、標(biāo)本采集： 1.菌血癥： 采血時機(jī)：寒戰(zhàn)開始時，發(fā)熱高峰前30-60min內(nèi)；使用抗菌藥物治療前采集，如已用藥，則在下一次用藥之前采集最佳。 采血部位：通常為肘靜脈，切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采血。除非懷疑有導(dǎo)管相關(guān)的血流感染，應(yīng)避免從留置靜脈或動脈導(dǎo)管取血，因為導(dǎo)管常伴有定植菌存在。 采血工具：真空血培養(yǎng)瓶，如培養(yǎng)瓶的儲存溫度為2-8，應(yīng)先復(fù)溫30min左右，平衡至室溫再采血。同一部位雙瓶采集時不建議更換針頭。 采血次數(shù)、血培養(yǎng)瓶選擇：對于成

5、人患者，應(yīng)同時分別在兩個部位采集血標(biāo)本；每個部位應(yīng)需氧和厭氧培養(yǎng)各一瓶。 采血量：影響陽性率的重要因素，過少明顯降低陽性率，5-10ml/瓶。 皮膚、血培養(yǎng)瓶消毒：穿刺前皮膚和培養(yǎng)瓶口進(jìn)行消毒并充分干燥。 避免采血管內(nèi)空氣注入?yún)捬跹囵B(yǎng)瓶。,四、標(biāo)本采集血培養(yǎng),二、標(biāo)本采集： 2.感染性心內(nèi)膜炎 建議在經(jīng)驗用藥前30分鐘內(nèi)在不同部位采集2-3套外周靜脈血培養(yǎng)標(biāo)本。如果24小時內(nèi)3套血培養(yǎng)標(biāo)本均為陰性，建議再采集3套血培養(yǎng)標(biāo)本送檢。 懷疑左心心內(nèi)膜炎時，采集動脈血提高血培養(yǎng)陽性率。 3.導(dǎo)管相關(guān)血流感染：分為保留導(dǎo)管和不保留導(dǎo)管兩種情況。 保留導(dǎo)管：分別從外周靜脈和導(dǎo)管內(nèi)各采取1套血培養(yǎng)標(biāo)本，在

6、培養(yǎng)瓶上標(biāo)注采集部位，送往微生物實驗室，同時進(jìn)行上機(jī)培養(yǎng)。2套血培養(yǎng)檢出同種細(xì)菌，且來自導(dǎo)管的血培養(yǎng)標(biāo)本報陽時間比來自外周的血培養(yǎng)標(biāo)本報陽時間早2小時以上，可診斷導(dǎo)管相關(guān)血流感染。 不保留導(dǎo)管：在外周靜脈采集2套血培養(yǎng)標(biāo)本。同時，通過無菌操作剪取已拔出的導(dǎo)管尖端5cm，在血平板上交叉滾動4次進(jìn)行送檢。或采用超聲震蕩法留取菌液接種。從導(dǎo)管尖端和外周血培養(yǎng)培養(yǎng)出同種同源細(xì)菌，且導(dǎo)管尖端血平皿的菌落計數(shù)超過15CFU有意義。,四、標(biāo)本采集血培養(yǎng),三、標(biāo)簽和申請單： 每套血培養(yǎng)瓶上標(biāo)簽應(yīng)有唯一標(biāo)識號或條碼，并注明標(biāo)本采集時間和部位。 如疑似感染性心內(nèi)膜炎或疑似導(dǎo)管相關(guān)血流感染患者的標(biāo)本，申請單除應(yīng)包括

7、患者基本信息外，一定要注明疑似診斷。 四、標(biāo)本運(yùn)輸： 采集后立即送檢，2h內(nèi)送達(dá)實驗室。不能及時送檢應(yīng)置室溫暫存。禁止冰箱存放。 運(yùn)送的裝置要足夠安全，避免血培養(yǎng)瓶的運(yùn)送過程中因碰撞發(fā)和破裂。,四、標(biāo)本采集咽拭子(上呼吸道感染),一、臨床采樣指征： 突發(fā)的咽痛、扁桃體腫大、頸部或頜下淋巴結(jié)腫痛，常伴有發(fā)熱，通常沒有咳嗽和明顯的鼻溢。 二、標(biāo)本采集 囑病人張口發(fā)“啊”音，以暴露咽喉部，必要時用壓舌板； 取出咽拭子中的無菌長棉簽，快速擦拭兩側(cè)腭弓和咽、扁桃體的分泌物，扁桃體有膿點時最好擠破膿點并采集膿性物； 將棉簽插入運(yùn)送管，蓋緊送檢。,四、標(biāo)本采集咽拭子(上呼吸道感染),三、標(biāo)簽和申請單 申請單

8、除應(yīng)包括患者基本信息外，注明患者的臨床診斷、癥狀、是否使用了抗菌藥物、檢測目的，一定要注明標(biāo)本采集時間。標(biāo)本盒上的標(biāo)簽要求有唯一標(biāo)識號或條碼，注明標(biāo)本采集時間、檢測目的。 四、標(biāo)本運(yùn)送 咽拭子標(biāo)本的運(yùn)送宜采用帶保濕功能的運(yùn)送培養(yǎng)基，避免由于送檢時間過長而干燥。 如未采用運(yùn)送培養(yǎng)基，應(yīng)于半小時內(nèi)送檢。 即使采用運(yùn)送培養(yǎng)基，室溫保存也不應(yīng)超過24小時。,四、標(biāo)本采集痰標(biāo)本(下呼吸道感染),一、臨床采樣指征 咳嗽、膿性痰，伴有發(fā)熱，影像學(xué)檢查出現(xiàn)新的或擴(kuò)大的浸潤影；氣道開放患者，出現(xiàn)膿痰或血性痰；考慮下呼吸道感染患者采集痰液標(biāo)本，同時送血培養(yǎng)標(biāo)本。 二、采集要求 細(xì)菌（肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、卡他

9、莫拉菌等）在室溫環(huán)境下很容易自溶死亡，如不能在采集標(biāo)本后2小時內(nèi)接種將明顯影響檢出率。因此痰標(biāo)本的采集時機(jī)十分關(guān)鍵，應(yīng)嚴(yán)格遵循以下原則采集標(biāo)本： 爭取首劑抗菌藥物治療使用前及更換抗菌藥物前采集； 標(biāo)本采集后保證2小時內(nèi)送達(dá)實驗室并得到接種； 只要有可能得到合格的痰標(biāo)本，應(yīng)馬上采集、送檢； 宜在醫(yī)護(hù)人員直視下留取合格痰標(biāo)本； 送檢痰標(biāo)本后三天內(nèi)不主張再次送檢，同一項目同一天不重復(fù)送檢。,四、標(biāo)本采集痰標(biāo)本(下呼吸道感染),三、標(biāo)本采集 采集前準(zhǔn)備無菌杯（螺口、有蓋、密封）、清水。并向患者提供口頭及書面采樣指導(dǎo)，以保證患者充分理解口腔清潔、深咳、避免口咽部菌群污染的意義和方法。 用清水漱口2-3次

10、，有假牙者應(yīng)先取下假牙；再用力咳嗽咳出深部痰液； 將痰液咳入無菌杯內(nèi)； 蓋好并擰緊杯蓋，盡快送達(dá)實驗室。,四、標(biāo)本采集痰標(biāo)本(下呼吸道感染),四、標(biāo)簽及申請單 申請單除應(yīng)包括患者基本信息外，注明患者的臨床診斷、癥狀、是否使用了抗菌藥物、檢測目的，標(biāo)識是普通培養(yǎng)、抗酸桿菌還是真菌培養(yǎng)。一定要注明標(biāo)本采集時間。標(biāo)本盒上的標(biāo)簽要求有唯一標(biāo)識號或條碼，注明痰標(biāo)本采集時間和檢測目的。 五、標(biāo)本運(yùn)輸 標(biāo)本采集后需盡快送到實驗室，不能超過2小時。不及時運(yùn)送可導(dǎo)致肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌由于不適應(yīng)外界環(huán)境和自溶現(xiàn)象而死亡； 不能及時送達(dá)或待處理標(biāo)本應(yīng)置于4冰箱保存（疑為肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌

11、不在此列），以免雜菌生長。但不能超過24小時；,四、標(biāo)本采集支氣管鏡-肺泡灌洗液（BAL）,采集肺泡灌洗液進(jìn)行檢測，可減少口咽部菌群的污染，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。須做定量或半定量接種培養(yǎng)。 一、臨床采樣指征 對于疑似肺炎患者，如有機(jī)會進(jìn)行氣管鏡檢查，則可同時采集肺泡灌洗液進(jìn)行培養(yǎng)。不能進(jìn)行深部咳痰的患者，也可考慮通過氣管鏡獲取標(biāo)本。 二、標(biāo)本采集 患者咽喉局部麻醉后，導(dǎo)入纖維支氣管鏡； 通過纖維支氣管鏡對病灶所在支氣管以下肺段或亞肺段水平，用37或室溫?zé)o菌生理鹽水多次灌洗，每次注入2060ml（常規(guī)進(jìn)行45次），直到總共灌洗100300ml，并充分吸引回收，從回收液中取出10ml標(biāo)本； 放入無

12、菌管中，旋緊蓋子，即刻送達(dá)實驗室。,四、標(biāo)本采集支氣管鏡-肺泡灌洗液（BAL）,三、標(biāo)簽及申請單 申請單除應(yīng)包括患者基本信息外，注明患者的臨床診斷、癥狀、是否使用了抗菌藥物、檢測目的，標(biāo)識是普通培養(yǎng)、抗酸桿菌還是真菌培養(yǎng)。一定要注明標(biāo)本種類為肺泡灌洗液，以及采集時間。無菌管上的標(biāo)簽要求有唯一標(biāo)識號或條碼，注明標(biāo)本采集時間、檢測目的。 四、標(biāo)本運(yùn)輸 標(biāo)本采集后需盡快送到實驗室； 不要冷藏標(biāo)本。,四、標(biāo)本采集氣道吸取標(biāo)本,一、臨床采樣指征 有氣管插管或氣管切開等人工氣道患者，無法自行咳痰，可通過吸痰管從氣道吸取標(biāo)本。 二、標(biāo)本采集 通過氣管內(nèi)插管將一次性無菌吸痰管推進(jìn)呼吸道直至遇到阻力后開始抽吸，

13、留取標(biāo)本在吸痰杯內(nèi)。,四、標(biāo)本采集氣道吸取標(biāo)本,三、標(biāo)簽及申請單 每個標(biāo)本都應(yīng)在申請單上詳細(xì)填寫患者姓名、病歷號、采集日期時間、診斷、檢驗項目等。在標(biāo)本上粘貼條碼，條碼中應(yīng)包括患者姓名、病歷號、采集時間等。標(biāo)本標(biāo)識要求有唯一標(biāo)識號或條碼。 四、標(biāo)本運(yùn)輸 標(biāo)本采集后需盡快送到實驗室，不能超過2小時。不及時運(yùn)送可導(dǎo)致肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌由于不適應(yīng)外界環(huán)境和自溶現(xiàn)象而死亡； 不能及時送達(dá)或待處理標(biāo)本應(yīng)置于4冰箱保存（疑為肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌不在此列），以免雜菌生長。但不能超過24小時； 對可疑烈性呼吸道傳染?。⊿ARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者標(biāo)本，在采集、運(yùn)送或保存過程中必

14、須注意生物安全保護(hù)。,四、標(biāo)本采集胸水,一、臨床采樣指征： 患者聽診、影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)胸腔積液，胸腔穿刺后發(fā)現(xiàn)胸腔積液渾濁、乳糜性、血性或膿性，考慮感染性胸腔積液(肺結(jié)核、肺炎、胸膜炎)患者應(yīng)送檢，進(jìn)行涂片染色、細(xì)菌培養(yǎng)等細(xì)菌學(xué)檢測。 二、標(biāo)本采集： 盡可能在抗菌藥物使用前采集。 由臨床醫(yī)師經(jīng)皮穿刺或外科方式獲得； 標(biāo)本采集后可注入可直接注入血培養(yǎng)瓶送檢，或?qū)?biāo)本收集到帶螺旋帽內(nèi)無菌管送檢，以便微生物室進(jìn)行涂片檢查。 標(biāo)本量分別為細(xì)菌培養(yǎng)1ml，真菌培養(yǎng)10ml，分枝桿菌培養(yǎng)10ml。 不要拭子蘸取標(biāo)本。 如送檢T-SPOT.TB，還需注意添加肝素抗凝。,四、標(biāo)本采集胸水,三、標(biāo)簽及申請單： 申

15、請單除應(yīng)包括患者基本信息外，注明患者的臨床診斷、癥狀、是否使用了抗菌藥物、標(biāo)本來源、檢測目的，注明胸水的類型、性狀，以及特殊檢驗需求。血培養(yǎng)瓶及無菌管要求有唯一標(biāo)識號或條碼。需標(biāo)注患者基本信息、標(biāo)本來源、標(biāo)本采集時間、送檢目的等。 四、標(biāo)本運(yùn)輸： 標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，通常室溫15分鐘內(nèi)應(yīng)送至實驗室，若不能及時送檢，不可冷藏。室溫保存不得超過24小時。,四、標(biāo)本采集尿標(biāo)本,一、臨床采樣指征： 當(dāng)患者出現(xiàn)尿頻、尿急、尿痛、血尿、腎區(qū)疼痛等癥狀，同時可能伴有寒戰(zhàn)、高熱、白細(xì)胞計數(shù)升高，懷疑存在泌尿系感染時； 尿常規(guī)結(jié)果提示泌尿系感染時； 無癥狀的患者不建議常規(guī)進(jìn)行尿培養(yǎng)檢測； 留置導(dǎo)尿管患者出現(xiàn)發(fā)

16、熱時。,四、標(biāo)本采集尿標(biāo)本,二、標(biāo)本采集： 1. 清潔中段尿：盡可能在未使用抗菌藥物前送檢，晨尿最佳。采集方法如下：,A.女性： 分開兩腿； 用肥皂水清洗尿道口部位，或用碘酒、碘伏消毒尿道口； 手持采樣杯外側(cè)，避免接觸杯口邊緣。先將少量尿液排入廁所，然后用采樣杯采集半杯尿液；將蓋子蓋好、旋緊； 檢查杯蓋是否密封，避免溢灑。 B. 男性： 縮回包皮充分暴露龜頭； 用肥皂清洗尿道口； 手持采樣杯外側(cè)，避免接觸杯口邊緣。先將少量尿液排入廁所，然后用采樣杯采集半杯尿液；將蓋子蓋好、旋緊； 檢查杯蓋是否密封，避免溢灑。,四、標(biāo)本采集尿標(biāo)本,2. 導(dǎo)尿管采集尿液：從導(dǎo)尿管近端側(cè)壁采集標(biāo)本，禁止從集尿袋中采

17、集 夾閉導(dǎo)尿管不超過30分鐘； 用酒精棉球消毒清潔導(dǎo)管近端采樣部位周圍外壁； 將注射器針頭穿刺進(jìn)入導(dǎo)管腔，抽吸出尿液； 收集的尿液置于無菌尿杯或試管中； 檢查杯蓋是否密封，避免灑溢。 3. 恥骨上膀胱穿刺：進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)或兒童及其他無法配合獲得清潔標(biāo)本時 消毒臍部至尿道之間區(qū)域的皮膚； 對穿刺部位進(jìn)行局麻； 在恥骨聯(lián)合和臍部中線部位將針頭插入充盈的膀胱； 用無菌注射器從膀胱吸取尿液； 無菌操作將尿液轉(zhuǎn)入無菌螺口杯，盡快送至實驗室培養(yǎng)。,四、標(biāo)本采集尿標(biāo)本,三、標(biāo)簽及申請單 申請單除應(yīng)包括患者基本信息外，一定注明患者的臨床診斷、癥狀、是否使用了抗菌藥物、標(biāo)本留取方式和采集時間。尿杯上的標(biāo)簽要求有

18、唯一標(biāo)識號或條碼，注明標(biāo)本種類和采集時間，此信息尤其重要。 四、標(biāo)本運(yùn)輸 尿標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢。 如不能在采集30分鐘內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，應(yīng)放入4冰箱保存，但也不能超過24小時。,四、標(biāo)本采集糞便標(biāo)本,一、臨床采樣指征： 當(dāng)患者出現(xiàn)腹痛、腹瀉（水樣便、膿血便），或伴有發(fā)熱；糞便常規(guī)鏡檢異常，建議采集糞便標(biāo)本，進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。 二、標(biāo)本采集與要求 標(biāo)本的采集盡可能在應(yīng)用抗菌藥物治療前，標(biāo)本應(yīng)收集在寬口便盒內(nèi)，并加蓋密封。如考慮空腸彎曲菌需要無血彎曲菌瓊脂培養(yǎng)基。艱難梭狀桿菌需在厭氧環(huán)境中生存，建議在床旁進(jìn)行標(biāo)本的采集及接種。接種后的標(biāo)本立即放入?yún)捬醮鼉?nèi)，送至實驗室。重復(fù)采集標(biāo)本，可提高陽性檢出率。,四、標(biāo)本采集糞便標(biāo)本,二、標(biāo)本采集與要求 自然排便法 患者在干燥清潔便盆（避免使用坐式或蹲式馬桶）內(nèi)自然排便后， 挑取有膿血、黏液部分的糞便2-3g（液體糞便則取絮狀物1-3ml）放入無菌便盒內(nèi)送檢。 若無黏液、膿血，則在糞便上多點采集送檢。 直腸拭子法（排便困難的患者或嬰幼兒） 用肥皂水將肛門周圍洗凈，將占有無菌生理鹽水的棉拭子插入肛門4-5cm（兒童為2-3cm）。 棉拭子與直腸粘膜表面接觸，輕輕旋轉(zhuǎn)拭子，可明顯在拭子上見到糞便。將帶有糞便標(biāo)本的棉拭子插入運(yùn)送培養(yǎng)基，立即送檢。,四、標(biāo)本采集糞便標(biāo)本,三、標(biāo)簽及申請單 申請單上應(yīng)包括患者姓名、病歷