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文檔簡介
1、濾器和超濾管,趙慧彬 2015年6月3日,針頭式過濾器采用透明級(jí)高分子材料丙烯腈丁二烯苯乙烯(ABS)或聚丙烯(PP)制成,與一次性注射器配套使用,為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用的快速、方便、可靠的小體積樣品的過濾處理裝置,,主要應(yīng)用: 樣品的預(yù)濾, 實(shí)驗(yàn)室生物流體(血液、尿液等)、培養(yǎng)基和媒介添加劑的除菌過濾,2種直徑規(guī)格可選:13和30cm 5種膜類型:MCE、NYLON、PVDF、PES、PTFE,混纖膜(MCE)由硝酸纖維素和醋酸纖維素混合而成,親水性,化學(xué)兼容性強(qiáng),蛋白吸附量高。用于顆粒分析,顆粒去處,生化分析,HPLC樣品制備和溶劑過濾 尼龍膜(NYLON)化學(xué)相容性好,能在PH值112的條件下
2、使用,適用于生物制品、培養(yǎng)基、溶液的除菌過濾。 聚偏氟乙烯膜(PVDF)親水性PVDF膜結(jié)合的蛋白遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于硝酸纖維素,尼龍和PTFE過濾膜,可與水溶液和多種有機(jī)溶劑兼容,適用性廣泛,耐氧化性和耐熱性好,極適用于HPLC、GC的制備。 聚醚砜膜(PES)低蛋白吸附,高流速,PH值范圍廣,化學(xué)相容性好,適用于樣品的制備、水溶劑過濾、微生物研究、環(huán)境分析、生物分析、HPLC流動(dòng)相過濾等。 聚四氟乙烯(PTFE)化學(xué)穩(wěn)定性和惰性,適用于化學(xué)腐蝕性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑、水溶液和氣體,對(duì)大多的酸性、堿性和溶液都有耐受性,黃色的是PVDFDurapore 膜的,是又一款hero產(chǎn)品,其親水型PVDF膜是所有膜中蛋
3、白吸附最低的,如果是含有蛋白成分的樣品,用黃色的Millex ,樣品活性成分損失最?。?綠色的是PES膜的,MilliporeExpress PLUS商品名代表的是“最快流速”,這個(gè)得益于密理博對(duì)PES膜的特別工藝改造,漏斗形的膜孔結(jié)構(gòu)帶來業(yè)界標(biāo)桿性的使用效果既快又好。200mL的樣品輕松搞定!,藍(lán)色的MCE、紫色的Nylon、白色的PTFE膜等在化學(xué)兼容性方面更為寬泛,適合含有特殊(有機(jī))化學(xué)成分和酸堿性較強(qiáng)的樣品。,白色的有PES膜,也有PTFE膜,具體規(guī)格根據(jù)客戶需要。,處理量分別是15ml 、4ml,、2ml、 0.5ml,再生纖維素膜具有一系列截留分子量,有3KD,10KD,30KD
4、,50KD,100KD。,使用超濾管的優(yōu)勢(shì),高回收率 90% 垂直結(jié)構(gòu)的膜減少了濃差極化,加快離心速度,快達(dá)5分鐘 熱密封膜將下游溶出物污染可能性降到最低 100%完整性檢測確保性能可靠 透明外殼和體積刻度方便樣品察看 直接吸取樣品減少處理步驟 高濃縮倍數(shù):80100倍,應(yīng)用, 生物樣品濃縮:包括抗原、抗體、酶、核酸或微生物 組織培養(yǎng)提取物或細(xì)胞裂解液中大分子組分的純化 對(duì)稀釋或從柱洗脫液預(yù)先純化的蛋白質(zhì)進(jìn)行濃縮 脫鹽和緩沖液更換,換濃縮蛋白時(shí)超濾管的處理,超濾管可以重復(fù)使用,用0.1M的NaOH浸泡12h,用水清洗,再在離心機(jī)上用相關(guān)溶液(滅菌水或PBS)清洗3次,即可用于濃縮新的蛋白;,長
5、時(shí)間放置超濾管的處理,較長時(shí)間不使用的超濾管,在用0.1M的NaOH浸泡12h,用水清洗,用20的乙醇浸泡保存,務(wù)必保持濾膜潤濕,不能長菌;,超濾管使用的離心轉(zhuǎn)速,離心轉(zhuǎn)速一般采用4000rpm(一般建議為3000g,最大不能超過4000g)離心58分鐘,即可將4ml樣品濃縮至1ml以下至幾十微升;速度過高,目的蛋白會(huì)離下,導(dǎo)致目的蛋白丟失;速度過低,耗時(shí),工效低;,槍頭伸入超濾管中時(shí)注意事項(xiàng),加蛋白液或Buffer到超濾管時(shí),可以用藍(lán)槍頭;但從超濾管底吸取濃縮好的目的蛋白時(shí),必須用黃槍頭;用槍頭伸入超濾管中時(shí),必須防止碰到濾膜,以免戳破濾膜;,減少超濾管對(duì)蛋白的吸附損失,超濾管的濾膜能吸附蛋白,會(huì)導(dǎo)致目的蛋白減少可達(dá)30左右;為減少蛋白損失,在吸盡目的蛋白液后,再用蛋白Buffer吹洗超濾管的管底,可以將濾膜吸附的蛋白洗下大部分而減少目的蛋白的損失;如純化的蛋白較濃時(shí),注意濃縮的體積不可過小;一般無論如何離心,底部會(huì)保留有200 l左右的蛋白液;,如何界定
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