1、名詞解釋(在“分子生物學(xué)試題及答案”中找答案)1cDNA與cccDNA：cDNA是由mRNA通過(guò)反轉(zhuǎn)錄酶合成的雙鏈DNA；cccDNA是游離于染色體之外的質(zhì)粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。2標(biāo)準(zhǔn)折疊單位：蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)單元螺旋與折疊通過(guò)各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的結(jié)構(gòu)塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級(jí)結(jié)構(gòu)。幾乎所有的三級(jí)結(jié)構(gòu)都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來(lái)予以描述，因此又將其稱為標(biāo)準(zhǔn)折疊單位。3CAP：環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMP activated protein ）4

2、回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互補(bǔ)序列，常是限制性酶切位點(diǎn)。5micRNA：互補(bǔ)干擾RNA或稱反義RNA，與mRNA序列互補(bǔ)，可抑制mRNA的翻譯。6核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工過(guò)程中起到自我催化的作用。7模體：蛋白質(zhì)分子空間結(jié)構(gòu)中存在著某些立體形狀和拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)頗為類似的局部區(qū)域8信號(hào)肽：在蛋白質(zhì)合成過(guò)程中N端有1536個(gè)氨基酸殘基的肽段，引導(dǎo)蛋白質(zhì)的跨膜。9弱化子：在操縱區(qū)與結(jié)構(gòu)基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核苷酸序列。10魔斑：當(dāng)細(xì)菌生長(zhǎng)過(guò)程中，遇到氨基酸全面缺乏時(shí)，細(xì)菌將會(huì)產(chǎn)生一個(gè)應(yīng)急反應(yīng)，停止全部基因的表達(dá)。產(chǎn)生這一應(yīng)急反應(yīng)的信號(hào)是鳥(niǎo)苷四磷酸(ppGpp)和

3、鳥(niǎo)苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp與pppGpp的作用不只是一個(gè)或幾個(gè)操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級(jí)調(diào)控子或稱為魔斑。11上游啟動(dòng)子元件：是指對(duì)啟動(dòng)子的活性起到一種調(diào)節(jié)作用的DNA序列，-10區(qū)的TATA、-35區(qū)的TGACA及增強(qiáng)子，弱化子等。12DNA探針：是帶有標(biāo)記的一段已知序列DNA，用以檢測(cè)未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應(yīng)用。13SD序列：是核糖體與mRNA結(jié)合序列，對(duì)翻譯起到調(diào)控作用。14單克隆抗體：只針對(duì)單一抗原決定簇起作用的抗體。15考斯質(zhì)粒：是經(jīng)過(guò)人工構(gòu)建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COS區(qū)，與質(zhì)粒連接構(gòu)成。16藍(lán)-白斑篩選：含LacZ基因（編碼半乳

4、糖苷酶）該酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DNA插入后，LacZ基因不能表達(dá)，菌株呈白色，以此來(lái)篩選重組細(xì)菌。稱之為藍(lán)-白斑篩選。17順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對(duì)基因的表達(dá)起到調(diào)控作用的基因元件。18Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5 3外切酶活性19錨定PCR：用于擴(kuò)增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分別用多聚dC和已知的序列作為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。20融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時(shí)表達(dá)翻譯出的原基因蛋白與外源蛋白結(jié)合在

5、一起所組成的蛋白質(zhì)。二、填 空1 DNA的物理圖譜是DNA分子的（ ）片段的排列順序。2 RNA酶的剪切分為（ ）、（ ）兩種類型。3原核生物中有三種起始因子分別是（ ）、（ ）和（ ）。4蛋白質(zhì)的跨膜需要（ ）的引導(dǎo)，蛋白伴侶的作用是（ ）。5啟動(dòng)子中的元件通?？梢苑譃閮煞N：（ ）和（ ）。6分子生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容主要包含（ ）、（ ）、（ ）三部分。7證明DNA是遺傳物質(zhì)的兩個(gè)關(guān)鍵性實(shí)驗(yàn)是（ ）、（ ）這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中主要的論點(diǎn)證據(jù)是：（ ）。8hnRNA與mRNA之間的差別主要有兩點(diǎn)：（ ）、（ ）。9蛋白質(zhì)多亞基形式的優(yōu)點(diǎn)是（ ）、（ ）、（ ）。10蛋白質(zhì)折疊機(jī)制首先成核理論的主要內(nèi)容包括

6、（ ）、（ ）、（ ）。 11半乳糖對(duì)細(xì)菌有雙重作用；一方面（ ）；另一方面（ ）。所以需要一個(gè)不依賴于cAMPCRP的啟動(dòng)子S2進(jìn)行本底水平的永久型合成；同時(shí)需要一個(gè)依賴于cAMPCRP的啟動(dòng)子S1對(duì)高水平合成進(jìn)行調(diào)節(jié)。有G時(shí)轉(zhuǎn)錄從（ ）開(kāi)始，無(wú)G時(shí)轉(zhuǎn)錄從（ ）開(kāi)始。12 DNA重組技術(shù)也稱為（ ）或（ ）。最終目的是（ ）。典型的DNA重組實(shí)驗(yàn)通常包含以下幾個(gè)步驟：提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個(gè)新的重組DNA分子。將這個(gè)重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞中復(fù)制保存，這個(gè)過(guò)程稱為轉(zhuǎn)化。對(duì)那些吸收了重組DNA的受體細(xì)胞進(jìn)行篩選和鑒定

7、。對(duì)含有重組DNA的細(xì)胞進(jìn)行大量培養(yǎng)，檢測(cè)外援基因是否表達(dá)。13、質(zhì)粒的復(fù)制類型有兩種：受到宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的嚴(yán)格控制的稱為（ ），不受宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的嚴(yán)格控制稱為（ ）。14PCR的反應(yīng)體系要具有以下條件：a、 b、 c、 d、 15PCR的基本反應(yīng)過(guò)程包括：（ ）、（ ）、（ ）三個(gè)階段。16、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的基本過(guò)程通常包括：將克隆的外源基因?qū)氲揭粋€(gè)受精卵或胚胎干細(xì)胞的細(xì)胞核中；接種后的受精卵或胚胎干細(xì)胞移植到雌性的子宮；完成胚胎發(fā)育，生長(zhǎng)為后代并帶有外源基因；利用這些能產(chǎn)生外源蛋白的動(dòng)物作為種畜，培育新的純合系。17雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生是由（ ）細(xì)胞與（ ）細(xì)胞雜交產(chǎn)生的，由于（ ）

8、可以利用次黃嘌呤，（ ）提供細(xì)胞分裂功能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。18隨著研究的深入第一代抗體稱為（ ）、第二代（ ）、第三代（ ）。19目前對(duì)昆蟲(chóng)病毒的基因工程改造主要集中于桿狀病毒，表現(xiàn)在引入（ ）；（ ）；（ ）。20哺乳類RNA聚合酶啟動(dòng)子中常見(jiàn)的元件TATA、GC、CAAT所對(duì)應(yīng)的反式作用蛋白因子分別是（ ）、（ ）和（ ）。21RNA聚合酶的基本轉(zhuǎn)錄因子有、TF-A、TF-B、TFII-D、TF-E他們的結(jié)合順序是： （ ）。其中TFII-D的功能是（ ）。22與DNA結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子大多以二聚體形式起作用，轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合的功能域常見(jiàn)有以下幾種（ ）、（ ）、（ ）。23限

9、制性內(nèi)切酶的切割方式有三種類型分別是（ ）、（在對(duì)稱軸3 側(cè)切割產(chǎn)生3 粘端（在對(duì)稱軸處切割產(chǎn)生平段）。24質(zhì)粒DNA具有三種不同的構(gòu)型分別是：（ ）、（ ）、（ ）。在電泳中最前面的是（ ）。25外源基因表達(dá)系統(tǒng)，主要有（ ）、（ ）、（ ）和（ ）。26轉(zhuǎn)基因動(dòng)物常用的方法有：（ ）、（ ）、（ ）。三、簡(jiǎn) 答1 分別說(shuō)出5種以上RNA的功能？轉(zhuǎn)運(yùn)RNA tRNA 轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸 核蛋白體RNA rRNA 核蛋白體組成成 信使RNA mRNA 蛋白質(zhì)合成模板 不均一核RNA hnRNA 成熟mRNA的前體 小核RNA snRNA 參與hnRNA的剪接小胞漿RNA scRNA/7SL-RNA 蛋

10、白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號(hào)識(shí)別體的組成成分反義RNA anRNA/micRNA 對(duì)基因的表達(dá)起調(diào)節(jié)作用核 酶 Ribozyme RNA 有酶活性的RNA2原核生物與真核生物啟動(dòng)子的主要差別？原核生物TTGACA - TATAAT-起始位點(diǎn) -35 -10真核生物增強(qiáng)子-GC -CAAT-TATAA5mGpp起始位點(diǎn) -110 -70 -253對(duì)天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對(duì)之進(jìn)行改造構(gòu)建：a、加入合適的選擇標(biāo)記基因，如兩個(gè)以上，易于用作選擇,通常是抗生素基因。b、增加或減少合適的酶切位點(diǎn)，便于重組。 c、縮短長(zhǎng)度，切去不必要的片

11、段，提高導(dǎo)入效率，增加裝載量。d、改變復(fù)制子，變嚴(yán)緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件 4舉例說(shuō)明差示篩選組織特異cDNA的方法？制備兩種細(xì)胞群體，目的基因在其中一種細(xì)胞中表達(dá)或高表達(dá)，在另一種細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)，然后通過(guò)雜交對(duì)比找到目的基因。 例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)與正常細(xì)胞表達(dá)水平不同的mRNA，因此，可以通過(guò)差示雜交篩選出與腫瘤相關(guān)的基因。也可利用誘導(dǎo)的方法，篩選出誘導(dǎo)表達(dá)的基因。 5雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生與篩選？脾B細(xì)胞+骨髓瘤細(xì)胞，加聚乙二醇（PEG）促進(jìn)細(xì)胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)（內(nèi)含次黃嘌呤、氨基蝶呤、T）生長(zhǎng)出來(lái)的脾B-

12、骨髓瘤融合細(xì)胞繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)。 細(xì)胞融合物中包含：脾-脾融合細(xì)胞：不能生長(zhǎng)，脾細(xì)胞不能體外培養(yǎng)。骨-骨融合細(xì)胞：不能利用次黃嘌呤，但可通過(guò)第二途 徑利用葉酸還原酶合成嘌呤。氨基蝶呤對(duì)葉酸還原酶有抑制作用，因此不能生長(zhǎng)。骨-脾融合細(xì)胞：在HAT中能生長(zhǎng)，脾細(xì)胞可以利用次黃嘌呤，骨細(xì)胞提供細(xì)胞分裂功能。 6、利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測(cè)定DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的原理與方法？原理是采用核苷酸鏈終止劑2，3，-雙脫氧核苷酸終止DNA的延長(zhǎng)。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3-OH，一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進(jìn)一步延長(zhǎng)。根據(jù)堿基配對(duì)原則，每當(dāng)DNA聚合酶需要dNMP參入到正常延長(zhǎng)的

13、DNA鏈中時(shí)，就有兩種可能性，一是參入ddNTP,結(jié)果導(dǎo)致脫氧核苷酸鏈延長(zhǎng)的終止；二是參入dNTP,使DNA鏈仍可繼續(xù)延長(zhǎng)，直至參入下一個(gè)ddNTP。根據(jù)這一方法，就可得到一組以ddNTP結(jié)尾的長(zhǎng)短不一的DNA片段。 方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應(yīng)后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。 7、激活蛋白（CAP）對(duì)轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用？環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMP receptor protein），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivated protein ）。當(dāng)大腸桿菌生長(zhǎng)在缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基中時(shí)

14、，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（Lac）等啟動(dòng)子的功能。一些依賴于CRP的啟動(dòng)子缺乏一般啟動(dòng)子所具有的典型的-35區(qū)序列特征（TTGACA）。因此RNA聚合酶難以與其結(jié)合。 CAP的存在（功能）：能顯著提高酶與啟動(dòng)子結(jié)合常數(shù)。主要表現(xiàn)以下二方面：CAP通過(guò)改變啟動(dòng)子的構(gòu)象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向,以便與-10區(qū)結(jié)合，起到取代-35區(qū)功能的作用。CAP還能抑制RNA聚合酶與DNA中其它位點(diǎn)的結(jié)合，從而提高與其特定啟動(dòng)子結(jié)合的概率。8、典型的DNA重組實(shí)驗(yàn)通常包括哪些步驟？a、提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個(gè)新的重組DNA

15、分子。 b、將這個(gè)重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞中復(fù)制保存，這個(gè)過(guò)程稱為轉(zhuǎn)化。 c、對(duì)那些吸收了重組DNA的受體細(xì)胞進(jìn)行篩選和鑒定。 d、對(duì)含有重組DNA的細(xì)胞進(jìn)行大量培養(yǎng)，檢測(cè)外援基因是否表達(dá)。 9、基因文庫(kù)的構(gòu)建對(duì)重組子的篩選舉出3種方法并簡(jiǎn)述過(guò)程?？股乜剐院Y選、抗性的插入失活、蘭-白斑篩選 或PCR篩選、差式篩選、DNA探針 多數(shù)克隆載體均帶有抗生素抗性基因（抗氨芐青霉素、四環(huán)素）。當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中后，該菌便獲得抗性，沒(méi)有轉(zhuǎn)入的不具有抗性。但不能區(qū)分是否已重組。 在含有兩個(gè)抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個(gè)基因并導(dǎo)致該基因失活，就可用兩個(gè)分別含不同藥物的平板對(duì)

16、照篩選陽(yáng)性重組子。 如pUC質(zhì)粒含LacZ基因（編碼半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DNA插入后，LacZ基因不能表達(dá)，菌株呈白色，以此來(lái)篩選重組細(xì)菌。 10、說(shuō)明通過(guò)胚胎干細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的基本過(guò)程？胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cell,ES）：是胚胎發(fā)育期的胚細(xì)胞，可以人工培養(yǎng)增殖并具有分化成其它類型細(xì)胞的功能。ES細(xì)胞的培養(yǎng)：分離胚泡的內(nèi)層細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)。ES在無(wú)飼養(yǎng)層中培養(yǎng)時(shí)會(huì)分化為肌細(xì)胞、N細(xì)胞等多種功能細(xì)胞，在含有成纖維細(xì)胞中培養(yǎng)時(shí)ES將保持分化功能。 可以對(duì)ES進(jìn)行基因操作，不影響它

17、的分化功能可以定點(diǎn)整合，解決了隨機(jī)整合的問(wèn)題。向胚胎干細(xì)胞導(dǎo)入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宮，發(fā)育成幼鼠，雜交獲得純合鼠。一)名詞解釋 1翻譯 2密碼子 3密碼的簡(jiǎn)并性 4同義密碼子 5變偶假說(shuō) 6移碼突變 7同功受體 8多核糖體 二)問(wèn)答題 1參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些?它們具有什么功能? 2遺傳密碼是如何破譯的? 3遺傳密碼有什么特點(diǎn)? 4簡(jiǎn)述三種RNA在蛋白質(zhì)生物合成中的作用。 5簡(jiǎn)述核糖體的活性中心的二位點(diǎn)模型及三位點(diǎn)模型的內(nèi)容。 6氨基酸在蛋白質(zhì)合成過(guò)程中是怎樣被活化的? 7簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)生物合成過(guò)程。 8蛋白質(zhì)合成中如何保證其翻譯的正確性? 9原核細(xì)胞和真核細(xì)胞在合成蛋白質(zhì)的

18、起始過(guò)程有什么區(qū)別。 10蛋白質(zhì)合成后的加工修飾有哪些內(nèi)容? 11蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)是怎樣形成的? 12真核細(xì)胞與原核細(xì)胞核糖體組成有什么不同?如何證明核糖體是蛋白質(zhì)的合成場(chǎng)所? 13. 已知一種突變的噬菌體蛋白是由于單個(gè)核苷酸插入引起的移碼突變的，將正常的蛋白質(zhì)和突變體蛋白質(zhì)用胰蛋白酶消化后，進(jìn)行指紋圖分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有一個(gè)肽段的差異，測(cè)得其基酸順序如下： 正常肽段 Met-Val-Cys-Val-Arg 突變體肽段 Met-Ala-Met-Arg （1）什么核苷酸插入到什么地方導(dǎo)致了氨基酸順序的改變？ （2）推導(dǎo)出編碼正常肽段和突變體肽段的核苷酸序列. 提示：有關(guān)氨基酸的簡(jiǎn)并密碼分別為 Va

19、l: GUU GUC GUA GUG Arg: CGU CGC CGA CG AGA AGG Cys: UGU UGC Ala : GCU GCC GCA CGC 14. 試列表比較核酸與蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。 15. 試比較原核生物與真核生物的翻譯。 (三)填空題 1蛋白質(zhì)的生物合成是以_為模板，以_為原料直接供體，以_為合成楊所。 2生物界共有_個(gè)密碼子，其中_個(gè)為氨基酸編碼，起始密碼子為_(kāi)；終止密碼子為_(kāi)、_、_。 3原核生物的起始tRNA以_表示，真核生物的起始tRNA以_表示，延伸中的甲硫氨酰tRNA以_表示。 4植物細(xì)胞中蛋白質(zhì)生物合成可在_、_和_三種細(xì)胞器內(nèi)進(jìn)行。 5延長(zhǎng)因子T由Tu和

20、Ts兩個(gè)亞基組成，Tu為對(duì)熱_蛋白質(zhì)，Ts為對(duì)熱_蛋白質(zhì)。 6原核生物中的釋放因子有三種，其中RF-1識(shí)別終止密碼子_、_；RF-2識(shí)別_、_；真核中的釋放因子只有_一種。 7氨酰-tRNA合成酶對(duì)_和相應(yīng)的_有高度的選擇性。 8原核細(xì)胞的起始氨基酸是_，起始氨酰-tRNA是_。 9原核細(xì)胞核糖體的_亞基上的 _協(xié)助辨認(rèn)起始密碼子。 l0每形成一個(gè)肽鍵要消耗_個(gè)高能磷酸鍵，但在合成起始時(shí)還需多消耗_個(gè)高能磷酸鍵。 11肽基轉(zhuǎn)移酶在蛋白質(zhì)生物合成中的作用是催化_形成和_的水解。 12肽鏈合成終止時(shí)，_進(jìn)人“A”位，識(shí)別出_，同時(shí)終止因子使_的催化作用轉(zhuǎn)變?yōu)開(kāi)。 13原核生物的核糖體由_小亞基和_

21、大亞基組成，真核生物核糖體由_小亞基和_大亞基組成。 14. 蛋白質(zhì)中可進(jìn)行磷酸化修飾的氨基酸殘基主要為_(kāi)、_、_。 (四)選擇題 1蛋白質(zhì)生物合成的方向是( )。 從CN端 定點(diǎn)雙向進(jìn)行 從N端、C端同時(shí)進(jìn)行 從NC端 2不能合成蛋白質(zhì)的細(xì)胞器是( )。 線粒體 葉綠體 高爾基體 核糖體 3真核生物的延伸因子是( )。 EFTu EF一2 EF-G EF一1 4真核生物的釋放因子是( )。 RFRF一1 RF一2 RF一3 5能與tRNA反密碼子中的I堿基配對(duì)的是( )。 A、G C、U U U、C、A 6蛋白質(zhì)合成所需能量來(lái)自( )。 ATP GTP ATP、GTP GTP 7tRNA的作

22、用是( )。 將一個(gè)氨基酸連接到另一個(gè)氨基酸上 把氨基酸帶到mRNA位置上 將mRNA接到核糖體上 增加氨基酸的有效濃度 8關(guān)于核糖體的移位，敘述正確的是( )。 空載tRNA的脫落發(fā)生在“A”位上 核糖體沿mRNA的35方向相對(duì)移動(dòng) 核糖體沿mRNA的53方向相對(duì)移動(dòng) 核糖體在mRNA上一次移動(dòng)的距離相當(dāng)于二個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度 9在蛋白質(zhì)合成中，下列哪一步不需要消耗高能磷酸鍵( )。 肽基轉(zhuǎn)移酶形成肽鍵 氨酰一tRNA與核糖體的“A，位點(diǎn)結(jié)合 核糖體沿mRNA移動(dòng) fMettRNAf與mRNA的起始密碼子結(jié)合以及與大、小亞基的結(jié)合 10在真核細(xì)胞中肽鏈合成的終止原因是( )。 已達(dá)到mRNA分子

23、的盡頭 具有特異的tRNA識(shí)別終止密碼子 終止密碼子本身具有酯酶作用，可水解肽酰與tRNA之是的酯鍵 終止密碼子被終止因子(RF)所識(shí)別 11蛋白質(zhì)生物合成中的終止密碼是( )。 UAA UAU UAC UAGUGA 12根據(jù)擺動(dòng)假說(shuō)，當(dāng)tRNA反密碼子第1位堿基是I時(shí)，能夠識(shí)別哪幾種密碼子( ) A C G T U 13下列哪些因子是真核生物蛋白質(zhì)合成的起始因子( )。 IF1 IF2 eIF2 eIF4 elF4A 14蛋白質(zhì)生物合成具有下列哪些特征( )。 氨基酸必須活化 需要消耗能量 每延長(zhǎng)一個(gè)氨基酸必須經(jīng)過(guò)進(jìn)位、轉(zhuǎn)肽、移位、稅落四個(gè)步驟 合成肽鏈由C端向N端不斷延長(zhǎng) 新生肽鏈需加工才

24、能成為活性蛋白質(zhì) 15下列哪些內(nèi)容屬于蛋白質(zhì)合成后的加工、修飾( )。 切除內(nèi)含子，連接外顯子 切除信號(hào)肽 切除N-端Met 形成二硫鍵 氨的側(cè)鏈修飾 16蛋白質(zhì)生物合成過(guò)程中，下列哪些步驟需要消耗能量( )。 氨基酸分子的活化 70S起始復(fù)合物的形成 氨酰tRNA進(jìn)入核糖體A位 肽鍵形成 核糖體移位 17原核生物的肽鏈延伸過(guò)程有下列哪些物質(zhì)參與( )。 肽基轉(zhuǎn)移酶 鳥(niǎo)苷三磷酸 mRNA 甲酰甲硫氨酰-tRNA EF-Tu、EF-Ts、 EF-G 18.Shine-Dalgarno順序(SD-順序)是指: ( ) 在mRNA分子的起始碼上游8-13個(gè)核苷酸處的順序在DNA分子上轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)前8-

25、13個(gè)核苷酸處的順序16srRNA3端富含嘧啶的互補(bǔ)順序 啟動(dòng)基因的順序特征 以上都正確 19. 在研究蛋白合成中,可利用嘌呤霉素,這是因?yàn)樗? ( ) 使大小亞基解聚 使肽鏈提前釋放 抑制氨基酰-tRNA合成酶活性 防止多核糖體形成 以上都正確 20. 氨基酸活化酶：( ) 活化氨基酸的氨基 利用GTP作為活化氨基酸的能量來(lái)源催化在tRNA的5磷酸與相應(yīng)氨基酸間形成酯鍵每一種酶特異地作用于一種氨基酸及相應(yīng)的tRNA 以上都不正確 (五)是非題 1DNA不僅決定遺傳性狀，而且還直接表現(xiàn)遺傳性狀。( ) 2密碼子在mRNA上的閱讀方向?yàn)? 3。( ) 3每種氨基酸都有兩種以上密碼子。( ) 4一

26、種tRNA只能識(shí)別一種密碼子。( ) 5線粒體和葉綠體的核糖體的亞基組成與原核生物類似。( ) 6大腸桿菌的核糖體的小亞基必須在大亞基存在時(shí)，才能與mRNA結(jié)合。( ) 7大腸桿菌的核糖體的大亞基必須在小亞存在時(shí)，才能與mRNA結(jié)合。( ) 8在大腸桿菌中，一種氨基酸只對(duì)應(yīng)于一種氨酰-tRNA合成酶。( ) 9氨基酸活化時(shí)，在氨酰-tRNA合成酶的催化下，由ATP供能，消耗個(gè)高能磷酸鍵。( ) 10線粒體和葉綠體內(nèi)的蛋白質(zhì)生物合成起始與原核生物相同。( ) 11每種氨基酸只能有一種特定的tRNA與之對(duì)應(yīng)。( ) 12AUG既可作為fMet-tRNAf和Met-tRNAi的密碼子，又可作為肽鏈內(nèi)

27、部Met的密碼子。( ) 13構(gòu)成密碼子和反密碼子的堿基都只是A、U、C、G。( ) 14核糖體大小亞基的結(jié)合和分離與Mg2+，的濃度有關(guān)。( ) 15核糖體的活性中心“A”位和“P”位都主要在大亞基上。( ) 16. E.coli中，DnaA與復(fù)制起始區(qū)DNA結(jié)合，決定復(fù)制的起始。( ) 二、參考答案 (一)名詞解釋 1翻譯(translation)：以mRNA為模板，氨酰-tRNA為原料直接供體，在多種蛋白質(zhì)因子和酶的參與下，在核糖體上將mRNA分子上的核苷酸順序表達(dá)為有特定氨基酸順序的蛋白質(zhì)的過(guò)程。 2密碼子(codon)：mRNA中堿基順序與蛋白質(zhì)中氨基酸順序的對(duì)應(yīng)關(guān)系是通過(guò)密碼實(shí)現(xiàn)的

28、， mRNA中每三個(gè)相鄰的堿基決定一個(gè)氨基酸，這三個(gè)相鄰的堿基稱為一個(gè)密碼子。 3密碼的簡(jiǎn)并性(degeneracy)：個(gè)氨基酸具有兩個(gè)以上密碼子的現(xiàn)象。 4同義密碼子(synonym codon)：為同種氨基酸編碼的各個(gè)密碼子，稱為同義密碼了。 5變偶假說(shuō)(wobble hypothesis)：指反密碼子的前兩個(gè)堿基(3-端)按照標(biāo)準(zhǔn)與密碼子的前兩個(gè)堿基(5-端)配對(duì)，而反密碼子中的第三個(gè)堿墓則有某種程度的變動(dòng)，使其有可能與幾種不同的堿基配對(duì)。 6移碼突變(frame-shift mutation)：在mRNA中，若插入或刪去一個(gè)核苷酸，就會(huì)使讀碼發(fā)錯(cuò)誤，稱為移碼，由于移碼而造成的突變、稱移

29、碼突變。 7，同功受體(isoacceptor)：轉(zhuǎn)運(yùn)同一種氨基酸的幾種tRNA稱為同功受體。 8反密碼子(anticodon)：指tRNA反密碼子環(huán)中的三個(gè)核苷酸的序列，在蛋白質(zhì)合成過(guò)程中通過(guò)堿基配對(duì)，識(shí)別并結(jié)合到mRNA的特殊密碼上。 9多核糖體(polysome)：mRNA同時(shí)與若干個(gè)核糖體結(jié)合形成的念珠狀結(jié)構(gòu)，稱為多核糖體。 (二)問(wèn)答題 1mRNA：蛋白質(zhì)合成的模板；tRNA：蛋白質(zhì)合成的氨基酸運(yùn)載工具；核糖體：蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所；輔助因子：(a)起始因子-參與蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物形成；(b)延長(zhǎng)因子-肽鏈的延伸作用；(c)釋放因子一-終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來(lái)。 2提示：三個(gè)突

30、破性工作 (1)體外翻譯系統(tǒng)的建立；(2)核糖體結(jié)合技術(shù)；(3)核酸的人工合成。 3(1)密碼無(wú)標(biāo)點(diǎn)：從起始密碼始到終止密碼止，需連續(xù)閱讀，不可中斷。增加或刪除某個(gè)核苷酸會(huì)發(fā)生移碼突變。 (2)密碼不重疊：組成一個(gè)密碼的三個(gè)核苷酸只代表一個(gè)氨基酸，只使用一次，不重疊使用。 (3)密碼的簡(jiǎn)并性：在密碼子表中，除Met、Trp各對(duì)應(yīng)一個(gè)密碼外，其余氨基酸均有兩個(gè)以上的密碼，對(duì)保持生物遺傳的穩(wěn)定性具有重要意義。 (4)變偶假說(shuō)：密碼的專一性主要由頭兩位堿基決定，第三位堿基重要性不大，因此在與反密碼子的相互作用中具有一定的靈活性。 (5)通用性及例外：地球上的一切生物都使用同一套遺傳密碼，但近年來(lái)已發(fā)

31、現(xiàn)某些個(gè)別例外現(xiàn)象，如某些哺乳動(dòng)物線粒體中的UGA不是終止密碼而是色氨酸密碼子。 (6)起始密碼子AUG，同時(shí)也代表Met，終止密碼子UAA、UAG、UGA使用頻率不同。 4(1)mRNA：DNA的遺傳信息通過(guò)轉(zhuǎn)錄作用傳遞給mRNA，mRNA作為蛋白質(zhì)合成模板，傳遞遺傳信息，指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成。 (2)tRNA：蛋白質(zhì)合成中氨基酸運(yùn)載工具，tRNA的反密碼子與mRNA上的密碼子相互作用，使分子中的遺傳信息轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)的氨基酸順序是遺傳信息的轉(zhuǎn)換器。 (3)rRNA 核糖體的組分，在形成核糖體的結(jié)構(gòu)和功能上起重要作用，它與核糖體中蛋白質(zhì)以及其它輔助因子一起提供了翻譯過(guò)程所需的全部酶活性。 5(1)二

32、位點(diǎn)模型 A位：氨酰-tRNA進(jìn)入并結(jié)合的部位；P位：起始氨酰-tRNA或正在延伸的肽基-tRNA結(jié)合部位，也是無(wú)載的tRNA從核糖體上離開(kāi)的部位。(2)三位點(diǎn)模型 大腸桿菌上的70S核糖體上除A位和P位外，還存在第三個(gè)結(jié)合tRNA的位點(diǎn)，稱為E位，它特異地結(jié)合無(wú)負(fù)載的tRNA及無(wú)負(fù)載的tRNA最后從核糖體上離開(kāi)的位點(diǎn)。 6催化氨基酸活化的酶稱氨酰-tRNA合成酶，形成氨酰-tRNA，反應(yīng)分兩步進(jìn)行： (1)活化 需Mg2+和Mn2+，由ATP供能，由合成酶催化，生成氨基酸-AMP-酶復(fù)合物。 ， (2)轉(zhuǎn)移 在合成酶催化下將氨基酸從氨基酸AMP酶復(fù)合物上轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的tRNA上，形成氨酰-tR

33、NA。 7蛋白質(zhì)合成可分四個(gè)步驟，以大腸桿菌為例： (1)氨基酸的活化：游離的氨基酸必須經(jīng)過(guò)活化以獲得能量才能參與蛋白質(zhì)合成，由氨酰-tRNA合成酶催化，消耗1分子ATP，形成氨酰-tRNA。 (2)肽鏈合成的起始：由起始因子參與，mRNA與30S小亞基、50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAt)形成70S起始復(fù)合物，整個(gè)過(guò)程需GTP水解提供能量。 (3)肽鏈的延長(zhǎng)：起始復(fù)合物形成后肽鏈即開(kāi)始延長(zhǎng)。首先氨酰-tRNA結(jié)合到核糖體的A位，然后，由肽酰轉(zhuǎn)移酶催化與P位的起始氨基酸或肽?；纬呻逆I，tRNAf或空載tRNA仍留在P位最后核糖體沿mRNA53方向移動(dòng)一個(gè)密碼子距離

34、，A位上的延長(zhǎng)一個(gè)氨基酸單位的肽酰-tRNA轉(zhuǎn)移到P位，全部過(guò)程需延伸因子EF-Tu、EF-Ts，能量由GTP提供。 (4)肽鏈合成終止，當(dāng)核糖體移至終止密碼UAA、UAG或UGA時(shí)，終止因子RF-1、RF-2識(shí)別終止密碼，并使肽酰轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)為水解作用，將P位肽酰-tRNA水解，釋放肽鏈，合成終止。 8提示：(1)氨基酸與tRNA的專一結(jié)合，保證了tRNA攜帶正確的氨基酸；(2)攜帶氨基酸的tRNA對(duì)mRNA的識(shí)別，mRNA上的密碼子與tRNA上的反密碼子的相互識(shí)別，保證了遺傳信息準(zhǔn)確無(wú)誤地轉(zhuǎn)譯；(3)起始因子及延長(zhǎng)因子的作用，起始因子保證了只有起始氨酰-tRNA能進(jìn)入核糖體P位與起始密碼子

35、結(jié)合，延伸因子的高度專一性，保證了起始tRNA攜帶的fMet不進(jìn)入肽鏈內(nèi)部；(4)核糖體三位點(diǎn)模型的E位與A位的相互影響，可以防止不正確的氨酰-tRNA進(jìn)入A位，從而提高翻譯的正確性；(5)校正作用：氨酰-tRNA合成酶和tRNA的校正作用；對(duì)占據(jù)核糖體A位的氨酰-tRNA的校對(duì)；變異校對(duì)即基因內(nèi)校對(duì)與基因間校對(duì)等多種校正作用可以保證翻譯的正確。 9(1)起始因子不同：原核為IF-1，IF-2，IF-2，真核起始因子達(dá)十幾種。 (2)起始氨酰-tRNA不同：原核為fMet-tRNAf，真核Met-tRNAi (3)核糖體不同：原核為70S核粒體，可分為30S和50S兩種亞基，真核為80S核糖體

36、，分40S和60S兩種亞基 10提示：(1)水解修飾；(2)肽鍵中氨基酸殘基側(cè)鏈的修飾；(3)二硫鍵的形成；(4)輔基的連接及亞基的聚合。 11提示：蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)是由氨基酸的順序決定的，不同的蛋白質(zhì)有不同的氨基酸順序，各自按一定的方式折疊而成該蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)。折疊是在自然條件下自發(fā)進(jìn)行的，在生理?xiàng)l件下，它是熱力學(xué)上最穩(wěn)定的形式，同時(shí)離不開(kāi)環(huán)境因素對(duì)它的影響。對(duì)于具有四級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，其亞基可以由一個(gè)基因編碼的相同肽鏈組成，也可以由不同肽鏈組成，不同肽鏈可以通過(guò)一條肽鏈加工剪切形成，或由幾個(gè)不同單順?lè)醋觤RNA翻譯，或由多順?lè)醋觤RNA翻譯合成。 12原核細(xì)胞：70S核糖體由30S和50S

37、兩個(gè)亞基組成；真核細(xì)胞：80S核糖體由40S和60S兩個(gè)亞基組成。利用放射性同位素標(biāo)記法，通過(guò)核糖體的分離證明之。 13. 提示：(1)在正常肽段的第一個(gè)Val的密碼GUA的G后插入了一個(gè)C ；(2) 正常肽段的核苷酸序列為：AUG GUA UGC GU CG；突變體肽段的核苷酸序列為：AUG GCU AUG CGU 。 14.核酸與蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)比較表如下： 核酸（Nucleic acids） 蛋白質(zhì)（Proteins） DNA RNA 一級(jí)結(jié)構(gòu) Primary structure 核苷酸序列 AGTTCT 或AGUUCU 的排列順序 3，5，- 磷酸二酯鍵 氨基酸排列順序 肽鍵 二級(jí)結(jié)構(gòu) S

38、econdarystructure 雙螺旋 主要是氫鍵，堿基堆積力 配對(duì)（莖-環(huán)結(jié)構(gòu)） （同左） 有規(guī)則重復(fù)的構(gòu)象 （-helix ，sheet，-turn） 氫鍵 三級(jí)結(jié)構(gòu) Tertiary structure 超螺旋 RNA空間構(gòu)象 一條肽鏈的空間構(gòu)象 范德華力 氫鍵 疏水作用 鹽橋 二硫鍵等 四級(jí)結(jié)構(gòu)Quaternarystructure 多條肽鏈 （或不同蛋白） 15.原核生物與真核生物的翻譯比較如下：僅述真核生物的，原核生物與此相反。 （1）.起始Met不需甲?；唬?）.無(wú)SD序列，但需要一個(gè)掃描過(guò)程；（3）.tRNA先于mRNA與核糖體小亞基結(jié)合；（4）.起始因子比較多；（5）.

39、只一個(gè)終止釋放因子。 (三)填空題 1mRNA 氨酰-tRNA 核糖體 264 61 UAA UAG UGA 3tRNAf tRNAi tRNAm 4核糖體 線粒體 葉綠體 5不穩(wěn)定 穩(wěn)定 6UAA UAG UAA UGA RF 7氨基酸 tRNA 8甲酰甲硫氨酸 甲酰甲硫氨酰-tRNA 9小 16SrRNA 104 1 11肽鍵 肽酰-tRNA 12終止因子 終止密碼子 肽基轉(zhuǎn)移酶 水解作用 1330S 50S 40S 60S 14. Ser Thr Tyr (四)選擇題 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18. 19. 20. (五)是非題

40、 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16. 核酸的生物合成 一、試題題目 (一)名詞解釋 1中心法則 2半保留復(fù)制 3DNA聚合酶 4解旋酶 5拓?fù)洚悩?gòu)酶 6單鏈DNA結(jié)合蛋白 7DNA連接酶 8引物酶及引物體 9復(fù)制叉 10復(fù)制眼、結(jié)構(gòu) 11.前導(dǎo)鏈 12岡崎片段、后隨鏈 13半不連續(xù)復(fù)制 14逆轉(zhuǎn)錄 15逆轉(zhuǎn)錄酶 16突變 17，點(diǎn)突變 18結(jié)構(gòu)畸變 19誘變劑 20修復(fù) 21光裂合酶修復(fù) 22切除修復(fù) 23重組修復(fù) 24誘導(dǎo)修復(fù)和應(yīng)急反應(yīng) 25DNA重組 26基因工程 27轉(zhuǎn)錄 28模板鏈(反意義鏈) 29非模板鏈(編碼鏈) 30不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄 31啟動(dòng)

41、子 32轉(zhuǎn)錄單位 33內(nèi)含子 34外顯子 35轉(zhuǎn)錄后加工 36核內(nèi)不均一RNA 37RNA復(fù)制 (二)問(wèn)答題 1試述Meselson和Stahl關(guān)于DNA半保留復(fù)制的證明實(shí)驗(yàn)。 2描述大腸桿菌DNA聚合酶I在DNA生物合成過(guò)程中的作用。 3試述DNA復(fù)制過(guò)程，總結(jié)DNA復(fù)制的基本規(guī)律。 4什么是逆轉(zhuǎn)錄?病毒中的單鏈RNA如何利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成雙鏈DNA，并整合到寄主細(xì)胞的基因組中? 5DNA的損傷原因是什么? 6簡(jiǎn)述基因工程的基本操作步驟及其應(yīng)用意義。 7試比較轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的區(qū)別。 8. 試列表比較常染色質(zhì)DNA與端粒DNA的復(fù)制。 9. 將大腸桿菌從37度轉(zhuǎn)移到42度時(shí)，其基因表達(dá)如何變化？ 1

42、0.簡(jiǎn)述原核生物轉(zhuǎn)錄作用的過(guò)程。 11.試比較真核生物與原核生物mRNA轉(zhuǎn)錄的主要區(qū)別。 (三)填空題 1Meselson-Stahl的DNA半保留復(fù)制證實(shí)試驗(yàn)中，區(qū)別不同DNA用_方法。分離不同DNA用_方法，測(cè)定DNA含量用_方法， 2DNA聚合酶I(Ecoli)的生物功能有_、_和_作用。用蛋白水解酶作用DNA聚合酶I，可將其分為大、小兩個(gè)片段，其中_片段叫Klenow片段，具有_和_作用，另外一個(gè)片段具有_活性。 3在Ecoli中，使DNA鏈延長(zhǎng)的主要聚合酶是_，它由_亞基組成。DNA聚合酶主要負(fù)責(zé)DNA的_作用。 4真核生物DNA聚合酶有_，_，_，_。其中在DNA復(fù)制中起主要作用的

43、是_和_。 5解旋酶的作用是_，反應(yīng)需要提供能量，結(jié)合在后隨鏈模板上的解旋酶，移動(dòng)方向_，結(jié)合在前導(dǎo)鏈的rep蛋白，移動(dòng)方向_。 6在DNA復(fù)制過(guò)程中，改變DNA螺旋程度的酶叫_。 7SSB的中文名稱_，功能特點(diǎn)是_。 8DNA連接酶只能催化_鏈DNA中的缺口形成3,5- 磷酸二酯鍵，不能催化兩條鏈間形成3,5- 磷酸二酯鍵，真核生物DNA連接酶以_作為能源，大腸桿菌則以作為能源，DNA連接酶在DNA_、_、_中起作用。 9DNA生物合成的起始，需要一段_為引物，引物由_酶催化完成，該酶需與些特殊_結(jié)合形成_復(fù)合物才有活性。 10DNA生物合成的方向是_，岡奇片段合成方向是_。 11由逆轉(zhuǎn)錄酶

44、所催化的核酸合成是以_為模板，以_為底物，產(chǎn)物是_。 12DNA突變主要分為_(kāi)和_兩大類。 13誘變劑大致分為_(kāi)、_、_三種類型。 14RNA生物合成中，RNA聚合酶的活性需要_模板，原料是_、_、_、_。 15大腸桿菌RNA聚合酶為多亞基酶，亞基組成_，稱為_(kāi)酶，其中_亞基組成稱為核心酶，功能_；亞基的功能_。 16用于RNA生物合成的DNA模板鏈稱為_(kāi)或_。 17RNA聚合酶沿DNA模板_方向移動(dòng)，RNA合成方向_。 18真核生物RNA聚合酶共三種_、_、_，它們分別催化_、_和 _的生物合成。 19某DNA雙螺旋中，單鏈5 ATCGCTCGA 3為有意義鏈，若轉(zhuǎn)錄mRNA，其中堿其排列順序?yàn)? _ 3。 20；能形成DNA-RNA雜交分子的生物合成過(guò)程有_、_。形成的分子基礎(chǔ)是_。 21DNA復(fù)制中，_鏈的合成是_的，合成的方向和復(fù)制叉移動(dòng)方向相同；_鏈的合成是_的，合成的方向與復(fù)制叉方向相反。 22一條單鏈DNA(+)的堿基組