1、第42講 微生物的分離和培養(yǎng),考點(diǎn)一 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),考點(diǎn)二 微生物的分離與計(jì)數(shù),總綱目錄,高考再現(xiàn),考點(diǎn)一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),1.培養(yǎng)基 (1)概念:人們按照微生物對(duì) 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配置出供其 生長(zhǎng)、繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。 (2)成分:一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽,還要滿足不同微生物對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。,(3)分類: a.按物理性質(zhì)分:液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、 固體 培養(yǎng)基。 b.按化學(xué)成分分:天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基。 c.按功能分:選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。,2.無(wú)菌技術(shù) (1)消毒和滅菌的比較,(2)適用對(duì)象,3.大腸桿菌的純化培養(yǎng) (1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)

2、基步驟:計(jì)算稱量溶化滅菌 倒平板。 (2)純化大腸桿菌常用方法: (1)平板劃線法:通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。 (2)稀釋涂布平板法:將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。,4.菌種的保存方法 1.對(duì)于頻繁使用的菌種,可以采用臨時(shí)保藏的方法。 2.對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法。,1.為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落。( ) 2.配制培養(yǎng)基時(shí),除滿足營(yíng)養(yǎng)需求外,還應(yīng)考慮pH、O2 及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求。 ( ) 3.倒平板時(shí),應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊

3、,以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。 ( ) 4.對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō),含C、H、O、N的有機(jī)化合物既是碳源,又是氮源、能源。 ( ),5.消毒的原則是既殺死材料表面的微生物,又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害。 ( ) 6.用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)都需要使用接種針進(jìn)行接種。( ),如圖是采用純化微生物的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖,請(qǐng)分析:,(1)獲得A效果的接種方法是,獲得B效果的接種方法是。 (2)一同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí),發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片,最可能的原因是。 (3)接種操作要在火焰附近進(jìn)行的原因是。,答案(1)稀釋涂布平板法平板劃線法(2)菌液濃度過(guò)高(或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將

4、接種環(huán)灼燒滅菌)(3)火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域,1.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制,注意:(1)熔化后需先調(diào)節(jié)pH,再分裝后滅菌。 (2)檢查培養(yǎng)基制作是否合格:將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1-2天,若無(wú)菌落生長(zhǎng),說(shuō)明配置成功,否則需要重新配置。,2.平板劃線法操作注意事項(xiàng) 第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接種環(huán),劃線操作結(jié)束時(shí),仍需灼燒接種環(huán)。每次灼燒目的如表所示:,接種環(huán)灼燒后,要冷卻后才能接觸菌種,以免溫度太高殺死菌種。 劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。 劃線時(shí)用力要大小適當(dāng),防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。,3.稀釋涂布平板法操作及注意事項(xiàng) 系列稀釋操作(如圖1) 圖1,涂布平板操作(如圖2)

5、 圖2,注意事項(xiàng) a.稀釋操作時(shí),每支試管及其中9 mL水、移液管均需滅菌;操作時(shí),試管口和移液管應(yīng)在離火焰l2 cm處;移液管頭不要接觸任何物體。 b.涂布平板時(shí),涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒,取出時(shí),多余酒精在燒杯中滴盡,后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃。不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中,以免點(diǎn)燃其中的酒精。酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適。移液管頭不要接觸任何物品。,1.(2019江蘇鹽城模擬)某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A,研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素等配制的培養(yǎng)基,成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌),實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所

6、示,下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(),考向一培養(yǎng)基及無(wú)菌技術(shù),A.培養(yǎng)基中加入化合物A作為唯一碳源,目的是篩選目的菌 B.實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過(guò)程中進(jìn)行振蕩培養(yǎng),可使目的菌和培養(yǎng)液充分接觸 C.實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中,獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌污染 D.將從固體培養(yǎng)基上得到的目的菌重復(fù)多次上述實(shí)驗(yàn)的目的是獲得大量菌種,答案 D本實(shí)驗(yàn)的目的是“篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌”,因此培養(yǎng)基中加入化合物A作為唯一碳源,目的是篩選目的菌,A正確;實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過(guò)程中進(jìn)行振蕩培養(yǎng),可使目的菌和培養(yǎng)液充分接觸,B正確;實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中,獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌污染,C正確;將菌種接種到固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的目的是分離菌種

7、,在液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的目的才是獲得大量菌種,D錯(cuò)誤。,2.下列關(guān)于微生物分離與培養(yǎng)的敘述正確的是( D) A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí),打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回到零后,再開(kāi)啟鍋蓋 B.為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落 C.離體培養(yǎng)的植物組織必須進(jìn)行滅菌處理 D.頻繁使用的菌種,可用斜面培養(yǎng)基保藏在4的冰箱中,解析高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí),當(dāng)壓力表的壓力降到零時(shí),再打開(kāi)排氣閥,旋松螺栓打開(kāi)蓋子,如果提前打開(kāi)排氣閥,鍋內(nèi)壓力突然下降,滅菌容器內(nèi)液體會(huì)沖出容器,造成污染,A錯(cuò)誤;接種時(shí),接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌冷卻后挑取菌落,不能趁熱挑取,以免殺死微生物,B錯(cuò)誤;離體培養(yǎng)的植物組織需要消毒,不能滅菌,C

8、錯(cuò)誤;頻繁使用的菌種,可用斜面培養(yǎng)基保藏在4的冰箱中臨時(shí)保藏,D正確。,技能提煉 1.自養(yǎng)型微生物和異養(yǎng)型微生物的營(yíng)養(yǎng)比較,2.選擇培養(yǎng)基的常見(jiàn)制備方法及應(yīng)用,3.高壓蒸汽滅菌鍋及其使用,考向二微生物的分離純化,3.(2018江蘇南通模擬)下列有關(guān)用平板劃線法和稀釋涂布平板法純化培養(yǎng)大腸桿菌的敘述,正確的是 ( B) 都需要用固體培養(yǎng)基 都需要使用接種針進(jìn)行接種 都需要在火焰旁進(jìn)行接種 都可以用菌落數(shù)來(lái)計(jì)數(shù)活菌 A.B. C.D.,解析 平板劃線法和稀釋涂布平板法都需要用固體培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)菌種,正確;平板劃線法需要接種環(huán)或接種針接種,稀釋涂布平板法需要涂布器,錯(cuò)誤;為防止雜菌污染,操作時(shí)都需要在

9、火焰旁進(jìn)行接種,正確;平板劃線法不能用于計(jì)數(shù)活菌,只能用于分離菌種;稀釋涂布平板法可以用來(lái)計(jì)數(shù)活菌,錯(cuò)誤,B正確。,4.(2018江蘇海安高中月考)下圖為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和純化大腸桿菌的部分操作步驟,下列說(shuō)法正確的是(),A.步驟中待培養(yǎng)基冷卻后才能蓋上培養(yǎng)皿蓋 B.步驟中接種環(huán)共需5次灼燒處理 C.步驟操作時(shí)都需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行 D.將接種后的圖平板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時(shí)無(wú)需倒置,答案 C倒完平板后應(yīng)立即蓋上培養(yǎng)皿,待冷卻后將平板倒過(guò)來(lái)放置,A錯(cuò)誤;接種環(huán)在每次接種前和接種結(jié)束后都要通過(guò)灼燒來(lái)滅菌,所以完成步驟中5次劃線操作前都要灼燒滅菌,接種結(jié)束后還需灼燒滅菌1次,防止造成污染,由此可見(jiàn),完成步

10、驟共需灼燒接種環(huán)6次,B錯(cuò)誤;步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行,防止被雜菌污染,C正確;劃線接種結(jié)束后,將平板倒置后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng),有利于表面的水分更好的揮發(fā)和防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染,D錯(cuò)誤。,題后悟道 1.倒平板的注意事項(xiàng) 培養(yǎng)基需冷卻至50 時(shí)才開(kāi)始倒平板,倒平板時(shí)高于50 則會(huì)燙手,低于50 時(shí)若不能及時(shí)操作,培養(yǎng)基會(huì)凝固。 左手拿培養(yǎng)皿,右手拿錐形瓶,左手拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙,不要完全打開(kāi)。 需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。 平板冷凝后,要將平板倒置。平板倒置后,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的冷

11、凝水落入培養(yǎng)基,造成污染。,在倒平板過(guò)程中,如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個(gè)平板應(yīng)丟棄。,2.兩種接種方法比較,考點(diǎn)二微生物的分離與計(jì)數(shù),一、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目,1.常用方法:稀釋涂布平板法。 2.統(tǒng)計(jì)依據(jù):當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品大約含有多少活菌。,3.平板選擇菌落計(jì)數(shù)時(shí)一般選菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)數(shù)公式為每克樣品中的菌株數(shù)=(CV)MC代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù),V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL),M代表稀釋倍數(shù)。,二、分解尿素的細(xì)菌的鑒定 1.分解尿素

12、的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨,使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)。 2.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌,若指示劑變紅,可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。,三、纖維素分解菌的篩選,1.纖維素酶的組成:是一種復(fù)合酶,它至少包括三種組分,即 C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。,2.纖維素酶的作用 纖維素纖維二糖葡萄糖。,3.纖維素分解菌的篩選 (1)篩選方法:剛果紅染色法。 (2)篩選原理:剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物,當(dāng)纖維素被 纖維素酶分解后,剛果紅纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成,培養(yǎng)基 中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,我們可以通過(guò)是否 產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。,1.檢測(cè)酵母菌數(shù)量可采用平板

13、劃線法或稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)。( ) 2.檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)實(shí)驗(yàn)操作中,確定對(duì)照組無(wú)菌后,選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。( ) 3.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。( ) 4.纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基中只含有纖維素一種碳源。( ) 5.篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培養(yǎng)基中,尿素是唯一的氮源。( ) 6.剛果紅可以與纖維素形成透明復(fù)合物,所以可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。( ),研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上,篩選到了幾株有透明降解圈的菌落(如圖)。剛果紅可與形成紅色復(fù)合物,但不與其降解產(chǎn)物發(fā)生這種反應(yīng)。圖中降解圈大小與纖維素酶的有關(guān)。 圖中降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是。

14、,答案纖維素量和活性菌2,1.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) (1)分離的原理:土壤中的細(xì)菌之所以能夠分解尿素,是因?yàn)樗鼈凅w內(nèi)能合成脲酶。這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起催化作用。 (2)分離的方法:使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。,(3)實(shí)驗(yàn)流程: 土壤取樣:富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層土 樣品的稀釋:通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng),以 保證獲得菌落數(shù)在30300、適于計(jì)數(shù)的平板 接種:用稀釋涂布平板法接種 ,培養(yǎng):細(xì)菌3037 培養(yǎng)12天 放線菌2528 培養(yǎng)57天 霉菌2528 培養(yǎng)34天 觀察:根據(jù)菌落的特征區(qū)分微生物 計(jì)數(shù):統(tǒng)計(jì)菌落的數(shù)目 計(jì)算:根據(jù)公式計(jì)算單位體積中

15、的菌體數(shù),(4)分解尿素的細(xì)菌的鑒別 分解尿素的細(xì)菌,CO(NH2)+H2O CO2+2NH3,酚紅指示劑變紅色,2.分解纖維素的微生物的分離 (1)纖維素分解菌的篩選原理 剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物,但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。 纖維素分解菌能產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素,從而使菌落周圍形成透明圈。 (2)分離方法:剛果紅染色法 (3)實(shí)驗(yàn)流程:,土壤取樣:富含纖維素的環(huán)境 選擇培養(yǎng):用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng),以增加纖維素分解菌的濃度 梯度稀釋:制備系列稀釋液,目的是使纖維素分解菌的細(xì)胞分散開(kāi),以獲得單 個(gè)菌落 涂布平板:將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 ,挑選產(chǎn)

16、生透明圈的菌落,(4)涉及的微生物技術(shù)主要有:培養(yǎng)基的制作、無(wú)菌操作技術(shù)、稀釋涂布平板法、土壤取樣等。,3.微生物的兩種計(jì)數(shù)方法的比較,特別提醒 “選擇菌落數(shù)在30300的平板”的兩個(gè)提醒 (1)只得到1個(gè)菌落數(shù)在30300的平板是錯(cuò)誤的,原因是不符合實(shí)驗(yàn)的重復(fù)原則,易受到偶然因素的影響。 (2)得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)在30300的平板也不一定正確,原因是如果不同平板間差異較大,如得到3個(gè)平板,菌落數(shù)分別是230、34、240,雖然菌落數(shù)均在“30300”,但由于34與另外兩個(gè)平板差異較大,應(yīng)找出原因并重新實(shí)驗(yàn)。,1.下圖甲為纖維單胞菌(能產(chǎn)生纖維素酶)的獲取過(guò)程。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是 (

17、),考向微生物的篩選與計(jì)數(shù),A.培養(yǎng)基都應(yīng)以纖維素為唯一碳源 B.圖中所用培養(yǎng)基滅菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌 C.所用的接種方法可對(duì)培養(yǎng)的微生物進(jìn)行計(jì)數(shù) D.可用剛果紅染料鑒定,看菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈,答案 C培養(yǎng)液中以纖維素作為唯一碳源時(shí),只有能利用該物質(zhì)的微生物才能生長(zhǎng)繁殖,A正確;對(duì)培養(yǎng)基的滅菌利用的是高壓蒸汽滅菌法,對(duì)接種環(huán)采用火焰灼燒法進(jìn)行滅菌,B正確;的接種方法是平板劃線法,利用平板劃線法可對(duì)微生物進(jìn)行接種、純化、分離,但是不能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)數(shù)一般采用稀釋涂布平板法,C錯(cuò)誤;當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后,剛果紅纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成,培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈

18、,可通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌,D正確。,2.下圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細(xì)菌的過(guò)程示意圖,有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是 ( ),A.在配制步驟、的培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)先調(diào)pH后高壓蒸汽滅菌 B.步驟純化分解尿素的原理是將聚集的細(xì)菌分散,可以獲得單細(xì)胞菌落 C.步驟采用涂布平板法接種,并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素 D.步驟挑取中不同種的菌落分別接種,比較細(xì)菌分解尿素的能力,答案 C 配制培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)先調(diào)pH后高壓蒸汽滅菌,A正確;步驟純化分解尿素的原理是將聚集的細(xì)菌通過(guò)涂布平板法分散,獲得單細(xì)胞菌落,B正確;步驟篩選分解尿素的細(xì)菌,培養(yǎng)基中應(yīng)以尿素為唯一氮源,C錯(cuò)誤;步驟挑取中不同種的

19、菌落分別接種,比較細(xì)菌分解尿素的能力,D正確。,歸納拓展 1.選擇微生物接種方法的原則 (1)純化微生物:平板劃線法和稀釋涂布平板法均可。 (2)計(jì)數(shù)微生物:只能選擇稀釋涂布平板法。 2.篩選微生物的兩種選擇培養(yǎng)基 (1)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基:選擇培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌。 (2)富含纖維素的培養(yǎng)基:選擇培養(yǎng)纖維素分解菌。,3.篩選微生物的三種方法 (1)單菌落挑取法:利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面,直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物。 (2)選擇培養(yǎng)法:利用選擇培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行選擇培養(yǎng),直接獲得目的微生物。 (3)鑒定培養(yǎng)法:利用鑒別培養(yǎng)基使目

20、的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征,然后篩選目的微生物。,4.鑒別特定微生物的兩種培養(yǎng)基 (1)添加酚紅指示劑的培養(yǎng)基:分解尿素的細(xì)菌可使該培養(yǎng)基變紅。 (2)富含纖維素、剛果紅的培養(yǎng)基:纖維素分解菌的菌落周圍存在不變紅色的透明圈。,1.(2016江蘇單科,25,3分)漆酶屬于木質(zhì)素降解酶類,在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。如圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過(guò)程,相關(guān)敘述正確的是(多選)( ),高考再現(xiàn),A.生活污水中含有大量微生物,是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品 B.篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物,通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落 C.在涂布平板上長(zhǎng)出的菌落,再通過(guò)劃線進(jìn)一步純化 D.斜面培養(yǎng)基中含有

21、大量營(yíng)養(yǎng)物,可在常溫下長(zhǎng)期保存菌株,答案 BC 產(chǎn)漆酶的微生物主要生活在木質(zhì)素含量較高的環(huán)境中,生活污水中含有大量的微生物,不是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品;篩選產(chǎn)漆酶微生物的培養(yǎng)基中應(yīng)加入木質(zhì)素等漆酶降解的底物,因不同菌種的菌落特征不同,故可通過(guò)菌落特征挑選產(chǎn)漆酶的菌落;圖示顯示,通過(guò)涂布平板法進(jìn)行初步篩選,再通過(guò)平板劃線法進(jìn)一步純化;微生物長(zhǎng)期保存應(yīng)用甘油管藏法,保存溫度為-20。,2.(2015江蘇單科,19,2分)做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí),下列敘述正確的是( D ) A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí),打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回到零后,開(kāi)啟鍋蓋 B.倒平板時(shí),應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊,以免培養(yǎng)基濺到

22、皿蓋上 C.為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落 D.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí),應(yīng)標(biāo)記在皿底上,解析本題考查微生物的分離與培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)。高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí),需先切斷電源,讓滅菌鍋內(nèi)溫度降至100以下,壓力表的指針回到零時(shí),再打開(kāi)鍋蓋,A錯(cuò)誤;倒平板時(shí),應(yīng)將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙,而不能將培養(yǎng)皿蓋完全打開(kāi),以防污染,B錯(cuò)誤;接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后需待冷卻后挑取菌落,C錯(cuò)誤。,3.(2018江蘇單科,31,8分)酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半,可作為飼料蛋白的來(lái)源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng),這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類

23、酵母,并進(jìn)行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程,請(qǐng)回答下列問(wèn)題:,(1)配制培養(yǎng)基時(shí),按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分,將其溶解、定容后,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的,及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝,并進(jìn)行 滅菌。 (2)取步驟中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,在步驟中將溫度約(在25 、50 或80 中選擇)的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻,冷凝后倒置培養(yǎng)。 (3)挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落,按步驟所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有。,a.為保證無(wú)菌操作,接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌 b.劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面,以免不能形成正常菌落 c.挑取菌落時(shí),應(yīng)挑取多個(gè)菌落,分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量 d.可以通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲

24、醇的濃度,獲得甲醇高耐受株 (4)步驟中,為使酵母數(shù)量迅速增加,培養(yǎng)過(guò)程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度,將發(fā)酵液稀釋1 000 倍后,經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色,用2516型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5 個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù),理論上色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于,才能達(dá)到每毫升3109個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。,答案 (1)pH高壓蒸汽(濕熱)(2)50 (3)a、b、d(4)氧氣無(wú)30,解析 本題主要考查微生物的培養(yǎng)與計(jì)數(shù)的相關(guān)知識(shí)。(1)培養(yǎng)基在定容后、分裝前需要調(diào)節(jié)pH;分裝后還需要進(jìn)行高壓蒸汽(濕熱)滅菌。(2)倒平板時(shí)溫度不宜過(guò)高,以防燙傷;同時(shí)溫度也不能太低,以防培養(yǎng)基凝固而無(wú)法形成平板,因此倒平

25、板時(shí)溫度應(yīng)選擇50 左右。(3)平板劃線時(shí),需保證無(wú)菌操作,以防混入雜菌而影響分離結(jié)果。,因此操作過(guò)程中所用的接種針、接種環(huán)在使用之前都必須滅菌;劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基表面,以免影響菌落的正常形態(tài)進(jìn)而影響后期觀察;挑取菌落時(shí),應(yīng)挑取單個(gè)菌落;通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度,可獲得利用甲醇能力強(qiáng)的菌株,即甲醇高耐受株。(4)為擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程,欲使酵母數(shù)量迅速增加,應(yīng)為酵母菌提供充足的營(yíng)養(yǎng)和O2。臺(tái)盼藍(lán)染液能將死的酵母菌染成藍(lán)色,而活的酵母菌不能被染色。假設(shè)5個(gè)中方格中有x個(gè)活酵母菌,由題意可知:(x5)10-41 0002=3109,由此解得x=30。,4.(2017江蘇單科,31,7分)苯酚及其衍

26、生物廣泛存在于工業(yè)廢水中,對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)下圖操作步驟,從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:,(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水,其中可作為碳源的有。 (2)將采集到的樣品接種培養(yǎng),苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸,以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過(guò)于密集,應(yīng)進(jìn)一步,以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還必須添加。 (3)如圖為連續(xù)劃線法示意圖,在圖中(填圖中序號(hào))區(qū)域更易獲得單菌落。,(4)采用比色測(cè)定法(使用苯酚顯色劑)檢測(cè)降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色

27、反應(yīng),表中15號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為。,如果廢水為50 mg/L苯酚溶液,降解后約有21%的苯酚殘留,則需將殘留液稀釋(填序號(hào):51020)倍后,再進(jìn)行比色。,答案(1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀釋涂布凝固劑(3)(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8 解析 本題考查微生物分離的相關(guān)知識(shí)。(1)酚降解菌培養(yǎng)基中的蛋白胨和苯酚為酚降解菌生長(zhǎng)提供碳源。(2)轉(zhuǎn)接的目的之一是富集降解苯酚能力強(qiáng)的酚降解菌,隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增多,培養(yǎng)基中的苯酚含量應(yīng)逐漸增加。若平板中菌落過(guò)于密集,則需進(jìn)一步稀釋,降低菌體密度后再涂布培養(yǎng),以便于菌落分離與計(jì)數(shù)。制備平板培養(yǎng)基時(shí),需添加瓊脂等凝固劑。(3)連續(xù)劃線時(shí),在劃線的末端菌體密度最低,即在劃線的末端最易獲得單菌落。,(4)1號(hào)比色管應(yīng)為空白對(duì)照組,由6號(hào)比色管中苯酚濃度知,15號(hào)比色管苯酚