1、膠體金技術(shù)簡介,周軍 BioDot中國,2,膠體金技術(shù)的起源,1971年,Faulk 和Taytor在做免疫金電鏡實(shí)驗(yàn)時(shí)引入 膠體金：是一種分散相顆粒在1100nm之間的分散體系，外觀透明不渾濁，在普通顯微鏡下看不見；顏色為紅色,指示劑 膠體金復(fù)合物（conjugate）:與抗體連接,3,膠體金技術(shù)的發(fā)展,80年代：第一代產(chǎn)品，免疫滲濾法 (Flow Through) 90年代：第二代產(chǎn)品，免疫層析法（Lateral Flow）,女性妊娠 HCG 21世紀(jì)：快速診斷方法適應(yīng)市場需要，膠體金技術(shù)進(jìn)入快速發(fā)展期，成為IVD的熱點(diǎn)（傳染病、毒品、食品安全、畜牧獸醫(yī)等領(lǐng)域）,4,兩種技術(shù)的比較,5,免

2、疫層析法技術(shù)優(yōu)勢:簡單/現(xiàn)場/快速,1.打開包裝取出試紙條,2.直接插入待測樣品中,3. 目測讀出結(jié)果（3-10分鐘內(nèi)）,6,免疫層析法與常規(guī)診斷方法比較,7,免疫層析法應(yīng)用領(lǐng)域,8,免疫層析法試紙條結(jié)構(gòu),測試線 （T線）,質(zhì)控線（C線）,膠體金墊,吸水濾紙,樣品墊,NC膜（硝酸纖維素膜）,層析方向,PVC底板,9,免疫層析法原理視頻,10,免疫層析法檢測原理分類介紹（雙抗體夾心法）,（以大分子HCG檢測為例）,11,免疫層析法檢測原理分類介紹（競爭法）,（以小分子嗎啡檢測為例）,12,免疫層析法檢測原理分類介紹（間接法，標(biāo)記proteinA）,（以HIV抗體檢測為例）,13,免疫層析法檢測原

3、理分類介紹（雙抗原夾心法，標(biāo)記抗原）,同上，測抗體,14,技術(shù)流程,15,平臺(tái)準(zhǔn)備與技術(shù)分項(xiàng),材料準(zhǔn)備: 樣品墊、膠體金墊、NC膜、吸水紙 試劑準(zhǔn)備:免疫試劑如抗原抗體等生物活性原料；生化試劑如氯金酸、檸檬酸三納、氯化納、Tween20、BSA等 儀器準(zhǔn)備：常規(guī)儀器pH計(jì)、加熱平臺(tái)、冷凍離心機(jī)等；專用儀器噴膜儀、切條機(jī)等 膠體金標(biāo)記技術(shù) NC膜與溶液噴點(diǎn) 膠體金墊與溶液噴點(diǎn) 干燥方法,16,抗體 Antibody,來源差異: 鼠抗,兔抗和羊抗 種類差異: 單抗,多抗 腹水的處理: 飽和硫酸銨沉淀法 特異性:親和層析柱 溶解液:不含鹽,例如PB,抗原抗體生物原料優(yōu)質(zhì)的原料是優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品的保證,抗原

4、Antigen,天然抗原,重組抗原,合成抗原 偶聯(lián)抗原物質(zhì): BSA, OVA等,17,膠體金標(biāo)記技術(shù),容器清潔或硅化處理 膠體金顆粒制備 (負(fù)電) 顏色與顆粒的關(guān)系. 最佳標(biāo)記顆粒大小40nm. 蛋白質(zhì)最適用量測定:鹽析法,18,NC膜與溶液噴點(diǎn)-NC膜,NC膜的性能 NC膜的選擇 爬速對(duì)靈敏度的影響 底襯的作用 不同膜廠家的產(chǎn)品差異(Pall/Whatman/Millipore/Sartorius),19,NC膜與溶液噴點(diǎn)-溶液噴點(diǎn),CT線溶液前處理: 1.過濾,0.2um孔徑濾膜 2.離心1萬轉(zhuǎn)10分鐘 噴點(diǎn)過程 頭尾去除,噴點(diǎn)中的報(bào)廢標(biāo)志 CT線噴點(diǎn)工藝(BJQ3000噴頭)與接觸劃線

5、(FL1000噴頭)工藝比較,20,膠體金墊與溶液噴點(diǎn),膠體金墊 1.材料選擇 2.糖的作用 3.緩沖溶液的作用 噴點(diǎn)法與浸泡法的比較(AJQ3000噴頭) 1.釋放快慢 2.液體量不同，干燥快慢，邊緣效應(yīng) 3.生產(chǎn)方便性,21,樣品墊,材料選擇 各成分的作用 1.緩沖溶液的作用 (PH) 2.鹽的作用 3.大分子蛋白BSAPVP 4.表面活性劑 Tween-20,TritonX-100,22,吸水紙,吸水效率 進(jìn)口與國產(chǎn)紙的差異,23,粘性底板,原理作用 供應(yīng)商的選擇 對(duì)NC膜的影響,24,干燥方法,干燥方法的比較 1.冷凍干燥法 2. 烘箱 3.烘房 溫濕度的控制 1.溫度對(duì)蛋白的影響 2

6、.濕度的控制辦法,25,溶液體系分析,各環(huán)節(jié)緩沖溶液的選擇與統(tǒng)一 鹽的作用 表面活性劑的作用 糖的作用 大分子蛋白的作用 其他作用物質(zhì),26,注意事項(xiàng),試劑原料耗材的批號(hào)控制，確保來源可靠有保障 設(shè)置關(guān)鍵控制點(diǎn)，確保流程無差錯(cuò) 儀器定期維護(hù)校準(zhǔn) 研發(fā)時(shí)即考慮一定生產(chǎn)量的工藝問題，避免上量后不匹配 均一性，穩(wěn)定性,27,膠體金技術(shù)在中國的發(fā)展-回顧,1995年：國內(nèi)基本空白，沒有研發(fā)，1-2家生產(chǎn)單位僅是大包裝分切 1997年：杭州艾康起步，依靠美國技術(shù)轉(zhuǎn)讓快速發(fā)展為國內(nèi)第一品牌，2007年因?qū)＠m紛被Inverness收購 1998年：美國BioDot公司第一臺(tái)RR3000儀器進(jìn)入中國，國內(nèi)單

7、位開始少量研發(fā)與生產(chǎn) 1999年：基因公司代理BioDot，開始大力推廣膠體金技術(shù) 2000年：“第一屆膠體金技術(shù)培訓(xùn)班”在北京生物制品研究所成功舉辦 2008年： BioDot中國辦事處成立，全權(quán)負(fù)責(zé)中國區(qū)市場/銷售/售后 2010年：星星之火已經(jīng)燎原-國內(nèi)已有約150多家單位從事膠體金技術(shù)的研發(fā)與生產(chǎn)，HCG產(chǎn)品全球市場的70-80%在中國生產(chǎn),28,RR3000-中國第一臺(tái)BioDot儀器(1998年),29,膠體金技術(shù)在中國的發(fā)展-機(jī)遇,中國具有行業(yè)優(yōu)勢：前端大量的生物學(xué)人才+科研，后端廉價(jià)的勞動(dòng)力+生產(chǎn) OTC、家庭自檢市場保持穩(wěn)定需求 食品安全、畜牧獸醫(yī)、生物反恐、流行性傳染病等領(lǐng)

8、域需要現(xiàn)場快速檢測，會(huì)有較快增長 臨床醫(yī)療市場將向全自動(dòng)儀器與簡約化快速化檢測這兩級(jí)發(fā)展，基層社區(qū)服務(wù)中心、中西部地區(qū)對(duì)快速檢測產(chǎn)品會(huì)有一定的需求,30,膠體金技術(shù)在中國的發(fā)展-挑戰(zhàn),關(guān)鍵材料NC膜均為進(jìn)口 優(yōu)質(zhì)的上游原料（抗原抗體）依賴進(jìn)口，僅少部分實(shí)現(xiàn)國產(chǎn)化，但質(zhì)量不穩(wěn)定 穩(wěn)定的生產(chǎn)儀器及關(guān)鍵配件，大部分進(jìn)口 專利：基本被國外公司壟斷,31,膠體金技術(shù)發(fā)展展望(一),標(biāo)記物的發(fā)展:乳膠微粒、熒光微粒(Merck) 、順磁微粒、量子點(diǎn),32,膠體金技術(shù)發(fā)展展望(二),檢測儀的發(fā)展：膠體金定量儀（ESE）、熒光定量儀(ESE，Biosite)；磁微粒檢測儀（Magna Biosciences）,33,膠體金技術(shù)發(fā)展展望(三),新材料的使用：Whatman Fusion 5 材料不吸附或極低吸附蛋白 材料“四和一”，節(jié)約了60%的組裝勞動(dòng)力 檢測線和質(zhì)控線上的包被試劑，需先與乳膠微粒共價(jià)，或pH4時(shí)直接包被 Conjugate復(fù)合物