1、第八章 體液蛋白質(zhì)檢驗,人類白蛋白分子,本章內(nèi)容概要：,第二節(jié) 體液蛋白質(zhì)測定,第一節(jié) 概述,第一節(jié) 概 述,機體蛋白質(zhì)：,體液蛋白質(zhì)的檢測：,機體主要的 生物大分子,含量：人體固體成分的45%,種類：10萬，30005000種/單細胞,功能：生長，代謝、血凝、運動、免疫、信息傳遞等,疾病發(fā)生,體液蛋白質(zhì)異常,一、血漿蛋白質(zhì)的功能和分類 蛋白質(zhì)（protein)：是人體內(nèi)含量和種類最多的物質(zhì)。有10萬多種。 血漿蛋白質(zhì)（plasma protein):血漿中含量最多的成分。有1000多種。目前已研究的不下500種，其中已分離出純品的有200多種。,（一）蛋白質(zhì)概述： 研究進展領域： 生物化學家

2、：分離純化各種組分。研究其物理性質(zhì)、氨基酸的組成及其順序，以及某些蛋白質(zhì)中結(jié)合的 糖、脂類、金屬化合物、活性多肽、類固醇激素等，研究其合成、降解、轉(zhuǎn)換更新與代謝調(diào)節(jié)的研究。 生理學家與病理生理學家；注重蛋白質(zhì)的生理功能，研究其膠體性質(zhì)、緩沖性質(zhì)和生理作用，運輸、結(jié)合功能等。,血漿蛋白質(zhì) 具有遺傳的變異：如Hp、TFP等在不同的人群中常見有結(jié)構(gòu)上的差異，以及某些蛋白質(zhì)的缺乏表現(xiàn)出一定的臨床癥狀，具有臨床意義；遺傳學家利用蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上的差異作為研究人群與家族遺傳特征的標志。 臨床生化檢驗中，微量蛋白質(zhì)的檢測及其技術(shù)的進展，用于診斷各種惡性腫瘤或各種病理變化過程等。 在進化與個體發(fā)育的生物化學研究中

3、，已發(fā)現(xiàn)有不少正常胎兒時期的蛋白質(zhì)可以在惡性腫瘤病人中重新出現(xiàn)，如甲胎蛋白。血漿蛋白質(zhì)合成的調(diào)控，如APR的表達與釋放，在臨床醫(yī)學中長期受注意而又未完全解決的課題，它與限制炎癥過程密切相關。,血漿蛋白質(zhì)廣泛應用于組織和細胞的培養(yǎng)，血漿中含有各總細胞刺激因子和抑制因子，它們對稀薄啊的活力、增殖、分化、胞內(nèi)酶的合成及細胞特殊功能起者特殊的作用。 在人類不少疾病，包括兩種常見的疾病動脈粥樣硬化及腫瘤的發(fā)病學研究，以及最常見的糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)病機制中，血漿蛋白質(zhì)均有廣泛涉及。,（二）血漿蛋白質(zhì)的分類 1.電泳分類法 2.功能分類法,1、電泳法：（醋纖膜電泳） 正常人血清的區(qū)帶電泳結(jié)果和掃描圖像 從

4、左至右的5個區(qū)帶依次為白蛋白及1、2、和球蛋白區(qū)。有時在慢電泳時球蛋白可分為1球蛋白和2球蛋白。 白蛋白區(qū)的成分包括白蛋白、前白蛋白和部分1脂蛋白; 1區(qū)包括1抗胰酶蛋白、1脂蛋白、c球蛋白; 2區(qū)包括觸珠蛋白、銅藍蛋白、2巨球蛋白等; 1區(qū)包括轉(zhuǎn)鐵蛋白、補體3、C4等; 2區(qū)包括3、 2微球蛋白、Fb; 區(qū)包括IgA、Ig、Ig、CRP等。,正常血清蛋白電泳（serum protein electrophoresis,SPE) 正常參考值：Alb:57%-68%1:1.0%-5.7%2:4.9%-11.2%:7%-13%:9.8%-18.2%,2.功能分類法 運輸載體類 補體蛋白類 血清酶類

5、 血漿蛋白質(zhì) 蛋白酶抑制物 免疫球蛋白 凝血蛋白類 蛋白類激素,運輸載體類: 血漿脂蛋白 前清蛋白和清蛋白 甲狀腺素結(jié)合球蛋白 皮質(zhì)素結(jié)合球蛋白 視黃醇結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白 結(jié)合珠蛋白 血色素結(jié)合蛋白 銅藍蛋白,補體蛋白類 補體蛋白C B因子 D因子 備解素,P因子又稱備解素（properdin），是替代途徑中除C3以外最先發(fā)現(xiàn)的一種血漿蛋白。現(xiàn)已探明，P因子以聚合體形式而存在：即三聚體（54%）、二聚體（26%）和四聚體（20%）都有，但特異活性的順序依次為：四聚體三聚體二聚體。P因子為由4條相同的肽鏈（分子量各55kDa）組成的四聚體分子，鏈間以非共價鍵相連接，分子量為220kDa。P因子的生

6、物學活性是以高親和力與c 3bBb和C 3bnBb相結(jié)合，結(jié)合后通過發(fā)生構(gòu)象改變而加固C3b與Bb間的結(jié)合力，從而可使其半衰期由2分鐘延長至26分鐘。另外，P因子還可封閉H因子的抑制作用，更增加了上述兩種酶的穩(wěn)定性及活性，有利于促進替代途徑級聯(lián)反應的繼續(xù)進行。因此，P因子實際上是替代途徑中的一個重要的正調(diào)節(jié)分子。因其常成為c 3bBb和C3bnBb復合物中的組成成分之一，故將其作為補體系統(tǒng)的固有成分在此一并描述。此外，在膜增生性腎小球腎炎病人血清中發(fā)現(xiàn)有一種C3腎炎因子（C3nephritic factor,C3NeF）實際為C 3bBb的自身抗體，也可與C3bBb結(jié)合而增加c 3bnBb的穩(wěn)

7、定性，使其半衰期處長10-30倍。,凝血蛋白類: 14個凝血因子中的13個均為蛋白質(zhì)。 免疫球蛋白: IgG 、IgA、IgM、IgD、IgE,蛋白酶抑制物 A1-抗胰蛋白酶（a1-AT） A1-抗糜蛋白酶（a1-ACT) A2-巨球蛋白（ a2-MG),血清酶類: 血漿固有酶LCAT、脂蛋白酯酶、凝血酶原、纖溶酶等 蛋白類激素 胰島素、胰高血糖素、生長素等,3、血漿蛋白質(zhì)的功能： 營養(yǎng)：其中的氨基酸 緩沖與膠體滲透壓：維持血液滲透壓 運輸：類固醇、甲狀腺激素、維生素A、D、脂類、金屬、微量元素、藥物等； 免疫與防疫功能：免疫球蛋白、補體 凝血與纖溶 酶的特殊功能 代謝調(diào)控,（三）影響血漿蛋白

8、質(zhì)濃度的因素 1、關于血漿蛋白質(zhì)的正常參考值 A、年齡組的差異 AFP、AGM、a1AT濃度在新生兒期顯著高于成人；AlbFibIgG與成人接近。其他成分特別是IgMIgA及C3、C4補體成分均偏低。 對895歲的年齡組分布調(diào)查有以下幾個特征 Alb在50歲以前保持恒定，50歲以后有下降趨勢；AA天災男30歲、女40后有上升趨勢；a1脂蛋白、AAT40后有上升趨勢；Hp隨年齡增加而增加；AGM在40歲以前隨年齡增加而下降，到年老時 由有上升。,B、關于性別差異 男性成人略高于女性的有：Alb、AAT、IgA等 女性略高于男性成人的有：CER、AGM、a1脂蛋白等；在妊娠期明顯增高的有：CER、

9、TRF等。 C、個體不同時期的差異及個體間的差異,五種血漿蛋白在個體內(nèi)與人群間的差異 血漿蛋白 個體內(nèi)不同時間的變異（CV%） 不同個體間的變異（CV%） 結(jié)合珠蛋白 9.5 71 1-酸性糖蛋白 11 42 轉(zhuǎn)鐵蛋白 2.5 9 1-抗胰蛋白酶 3 16 2-巨球蛋白 3 17,2、急性時相反應蛋白（acute phase reactants,APR) 概念：在炎癥、創(chuàng)傷、心肌梗塞、感染、腫瘤等情況下血漿中濃度顯著上升或降低的蛋白質(zhì)。 升高的有：AAT、AAG、CER、C3、C4、CRP、Flb、hP等 降低的有：PA、Alb及TRF，稱為負性APR。,3、類固醇激素,二、血清蛋白質(zhì)電泳組分

10、的臨床分析,1、正常血清蛋白電泳（serum protein electrophoresis,SPE) 正常參考值：Alb: 57%-68%1: 1.0%-5.7%2: 4.9%-11.2%: 7%-13%: 9.8%-18.2%,方法：瓊脂凝膠電泳染料：氨基黑,正常血清蛋白電泳圖,2、異常血清蛋白電泳 （1）雙白蛋白血癥型：主要特征：在白蛋白部位有兩個區(qū)帶，光密度計掃描出現(xiàn)雙峰，呈剪刀狀。 產(chǎn)生原因：雙白蛋白血癥分為持久型和暫時型兩種。持久型主 要是一種家族性血清蛋白異常的疾病，極少見，為 常染色體不完全顯性遺傳；而暫時型主要是指腎功 能不全的患者在治療期間使用大劑量的-內(nèi)酰胺類 抗生素，可

11、形成快泳動性的白蛋白成分，治療中斷 即逐漸消失。,（2）先天性白蛋白缺陷型：主要特征：由于血清白蛋白的顯著降低，血清總蛋白也隨之降 低，1、2球蛋白明顯增高，球蛋白也增高。 嚴 重無白蛋白血癥時，白蛋白有時可降為零。 產(chǎn)生原因：本病是極少見的先天性疾病，可能由于肝細胞內(nèi)白 蛋白合成功能遺傳性缺陷或明顯低下所致。該病患 者的白蛋白含量盡管只有正常人的0.05%， 而其血 漿膠滲透壓仍為正常人水平的 1/2左右， 這是由于球蛋白代償性增加所致，如傳鐵蛋白為正常人的 2 -3倍， 1巨球蛋白為正常人的3.5倍， 脂蛋白為3 倍，IgM為3倍，這時血清白蛋白的半衰期也明顯延長， 可為正常人的3-4倍，

12、 對維持血漿膠體滲透壓 均有一定作用。,（3）低白蛋白血癥型： 主要特征：血清總蛋白濃度明顯減低，其中以白蛋白減低為主。 產(chǎn)生原因：由于合成蛋白質(zhì)所需的氨基酸長期供應不足，以致 血清中的主要成分白蛋白合成減少。常見于慢性營 養(yǎng)失調(diào)、肝硬化、肝炎、腎炎、腎病綜合癥、大面 積燒傷或內(nèi)分泌紊亂、垂體病等。,檢查結(jié)果：Alb 44.2%()；1 4.6%(N)；2 14.6%() 18.3%()； 18.3%(N)；慢性腎炎患者。,（4）1球蛋白缺陷型： 主要特征：1球蛋白明顯降低，有時可接近零，血清總蛋白及 其它各組分的蛋白通常沒有明顯變化。 產(chǎn)生原因：此病通常認為是先天性或家族性的，系由于1抗胰

13、蛋白酶合成低下所致。因為血中1抗胰蛋白酶減少 或缺乏，致使血中或組織中的胰蛋白酶活性相對增 加，肺結(jié)締組織破壞亢進，對青年可以發(fā)生肺氣腫 ，當合并感染時，可見白蛋白減低，但由于1抗胰 蛋白酶減少，即使有炎性病灶，1區(qū)帶也不增加。,（5）.2球蛋白缺陷型：主要特征： 2球蛋白帶有時可輕度減低，其它組分多正常。 產(chǎn)生原因：在此區(qū)帶出現(xiàn)缺陷的主要有結(jié)合珠蛋白、血漿 銅藍蛋白，分別稱無結(jié)合珠蛋白血癥和銅藍蛋 白缺乏癥。前者極少見，沒有特別癥狀，有時 可伴有輕度貧血。銅藍蛋白缺陷已知有Willson 氏病，特別在肝、腦和角膜較多。,3、r球蛋白增多與M蛋白 正常SPE中球蛋白區(qū)帶：IgG；IgM；IgA

14、；IgD；IgE M蛋白是漿細胞或B淋巴細胞單克隆惡性增殖所產(chǎn)生的一種大量的異常免疫球蛋白，因其多見于多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma)、巨球蛋白血癥(macroglobulinemia)及惡性淋巴瘤(malignant lymphoma)，都是以M開頭的疾病，故稱為“M蛋白”。,特點是區(qū)帶窄而濃,掃描峰高而尖,基底部窄,在區(qū)高與寬的比例2,區(qū)則1(正常時小于此比例),其他區(qū)帶明顯減少。,三、血漿蛋白質(zhì)種類及其異常,1、前白蛋白（prealbumin,PA）：分子量5.4萬，由肝細胞合成。在pH8.6電泳中移速比白蛋白快而得名。 功能：營養(yǎng) 半衰期12小時； 運載 結(jié)合T3、T4

15、、結(jié)合維生素A。 意義：測定其在血漿中的濃度對于了解蛋白質(zhì)的營養(yǎng)不良和肝功能不全，比白蛋白和TFR具有更高的敏感性，在急性炎癥、惡性腫瘤、肝硬化或腎炎時其濃度下降。,2、白蛋白（aibumin,Alb)：由肝實質(zhì)細胞合成，半衰期1519天，含量最多的蛋白質(zhì)，占40%60%。在肝細胞中沒有貯存。 分子結(jié)構(gòu)1975年闡明，含585個氨基酸殘基的單鏈多肽，分子量66458，含17個二硫鍵（SS），不含糖的組分。 功能 運載：膽紅素、長鏈脂肪酸、膽汁酸鹽、前列腺素、類固醇激素、金屬離子（銅、鎳、鈣等）； 營養(yǎng)：內(nèi)源性氨基酸 維持血漿蛋白質(zhì)膠體滲透壓、緩沖酸堿作用。 血液中80的滲透壓是由白蛋白承擔的。

16、,臨床意義 可以作為個體營養(yǎng)狀態(tài)的評價指標 血漿白蛋白明顯減少時，可以影響許多配體在循環(huán)血液中的存在形式； 白蛋白增高較少見，在嚴重失水時，對監(jiān)測血濃縮有診斷意義；,白蛋白減少在不少疾病時常見：白蛋白的合成減少急性或慢性肝炎；營養(yǎng)不連或吸收不良；遺傳性缺陷無白蛋白血癥是一種極少見的代謝性缺損，血漿白蛋白含量常低于1g/L，但可以沒有癥狀（如水腫等），可能部分由于血漿中球蛋白含量代償性升高；組織損傷（外科手術(shù)或創(chuàng)傷）或炎癥（感染性疾?。┮鸬陌椎鞍追纸獯x增加；白蛋白的異常丟失腎病綜合癥、慢性腎小球腎炎、糖尿病、SLE等尿中白蛋白損失，燒傷及滲出性皮炎可以從皮膚喪失大量蛋白質(zhì)；白蛋白的分布異常門

17、靜脈高壓引起腹水中有大量蛋白質(zhì)。是從血管內(nèi)滲漏入腹腔。 白蛋白的遺傳變異：已發(fā)現(xiàn)20多中種。,3、a1酸性糖蛋白（AAG）： 分子量近4萬，含糖約45%，pI為2.7-3.5，包括等分子的已糖、已糖胺和唾液酸。 AAG是主要的急性時相反應蛋白，在急性炎癥時增高，顯然與免疫防御功能有關明。早期工作認為肝是合成1-糖蛋白的唯一器官，近年有證據(jù)認為某些腫瘤組織亦可以合成。,4、a1抗胰蛋白酶（AAT）： 是具有蛋白酶抑制作用的一種急性時相反應蛋白，分子量為5.5萬，P1值4.8，含有10%-12%糖。在醋酸纖維薄膜或瓊脂糖電泳中泳動于1區(qū)帶，是這一區(qū)帶的主要組分。區(qū)帶中的另2個主要組分；1-酸性糖蛋

18、白含糖量特別高，1-脂蛋白含脂類特別高，因此蛋白質(zhì)的染色都很淺。 作為蛋白酶的抑制物，它不僅作用于胰蛋白酶，同時也作用于糜蛋白酶、尿激酶、腎素、膠原酶、彈性蛋白酶、纖溶酶和凝血酶等。AAT占血清中抑制蛋白酶活力的90%左右。AAT的抑制作用有明顯的pH依賴性，最大活力處于中性和弱堿性，當pH4.5時活性基本喪失，這一特點具有重要的生理意義。,AAT具有多種遺傳分型，利用不同pH的緩沖劑和電泳支持物，迄今已分離鑒定有33種等位基因（allotypes），其中最多見的是PiMM型（為M型蛋白抑制物的純合子體）占人群的90%以上，另外還有兩種蛋白稱為Z型和S型，可表現(xiàn)為以下遺傳分型：PiZZ、PiS

19、S、PiSZ、PiMZ、PiMS，S型蛋白與M蛋白之間的氨基酸殘基僅有一個差異。對蛋白酶的抑制作用主要限于血循環(huán)中M型蛋白的濃度。以MM型的蛋白酶抑制能力為100%相比，ZZ型的相對活力僅為15%、SS為60%、MZ為57%、MS為80%，其它則無活性。,5、甲胎蛋白（-fetoprotein,FP或AFP） 主要在胎兒肝中合成，分子量6.9萬，在胎兒13周AFP占血漿蛋白總量的1/3。在妊娠30周達最高峰，以后逐漸下降，出生時血漿中濃度為高峰期的1%左右，約40mg/L，在周歲時接近成人水平（低于30mg/L）。,甲胎蛋白在產(chǎn)婦羊水或母體血漿中AFP可用于胎兒產(chǎn)前監(jiān)測。如在神經(jīng)管缺損、脊柱裂

20、、無腦兒等時，AFP可由開放的神經(jīng)管進入羊水而導致其在羊水中含量顯著升高。胎兒在宮腔內(nèi)死亡、畸胎瘤等先天缺陷亦可有羊水中AFP增高。AFP可經(jīng)羊水部分進入母體血循環(huán)。在85%脊柱裂及無腦兒的母體，血漿AFP在妊娠16-18周可見升高而有診斷價值，但必須與臨床經(jīng)驗結(jié)合，以免出現(xiàn)假陽性的錯誤。,6、結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，hp）：觸珠蛋白 是人血清中能與游離血紅蛋白（hb）在血漿中與游離的血紅蛋白結(jié)合，是一種急性時相反應蛋白。在CAM電泳及瓊脂糖凝膠電泳中位于2區(qū)帶。分子中有兩對肽鏈（與鏈）形成22四聚體。鏈有1及2兩種。,7、a2巨球蛋白（a2Macroglobulin， a2MG）

21、 是溶纖維蛋白酶、凝血酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶和禪性蛋白酶等多種蛋白水解酶的抑制劑，是存在于血液中的具有重要生物活性的大分子的糖蛋白，分子量725000，由肝臟的淋巴細胞、單核細胞及纖維母細胞合成和釋放，對血中內(nèi)源性、外源性蛋白水解酶有清除作用。,8、銅藍蛋白（ceruloplasmin,CER） 是一種含銅的2糖蛋白，分子量約為12萬-16萬，不易純化。目前所知為一個單鏈多肽，每分子含6-7個銅原子，由于含銅而呈藍色，含糖約10%，末端唾液酸與多肽鏈連接，具有遺傳上的基因多形性。 CER具有氧化酶的活性，對多酚及多胺類底物有催化其氧化的能力。最近研究認為CER可催化Fe2+ 氧化為Fe3+ 。

22、,9、轉(zhuǎn)鐵蛋白:（transferrin，TRF，siderophilin） 是血漿中主要的含鐵蛋白質(zhì)，負責運載由消化管吸收的鐵和由紅細胞降解釋放的鐵。以TRF-Fe3+的復合物形式進入骨髓中，供成熟紅細胞的生成。 TRF分子量約7.7萬，為單鏈糖蛋白，含糖量約6%。TRF可逆地結(jié)合多價離子，包括鐵、銅、鋅、鈷等。每一分子TRF可結(jié)合兩個三價鐵原子。TRF主要由肝細胞合成，半壽期為7天。血漿中TRF的濃度受鐵供應的調(diào)節(jié)，在缺鐵狀態(tài)時，血漿TRF濃度上升，經(jīng)鐵有效治療后恢復到正常水平。,10、10、C反應蛋白（Creactive protein,CRP) CRP由肝細胞所合成。 CRP含5個多肽

23、鏈亞單位，非共價地結(jié)合為盤形多聚體。分子量為11.5萬-14萬。電泳分布在慢區(qū)帶，有時可以延伸到區(qū)帶。其電泳遷移率易受一些因素影響，如鈣離子及緩沖液的成分。,臨床意義： CRP作為急性時相蛋白在各種急性炎癥、組織損傷、心肌梗塞、手術(shù)創(chuàng)傷、放射性損傷等疾病發(fā)作后數(shù)小時迅速升高，并有成倍增長之勢。病變好轉(zhuǎn)時，又迅速降至正常，其升高幅度與感染的程度呈正相關。 CRP與其它炎癥因子的相關性：CRP與其它炎癥因子如白細胞總數(shù)、紅細胞沉降率和多形核白細胞等具有密切相關性。CRP與WBC存在正相關。在炎癥反應中起著積極作用，使人體具有非特異性抵抗力。在患者疾病發(fā)作時，CRP可早于WBC而上升，回復正常也很快

24、。故具有極高的敏感性。, CRP可用于細菌和病毒感染的鑒別診斷：一旦發(fā)生炎癥，CRP水平即升高，而病毒性感染CRP大都正常。膿毒血癥CRP迅速升高，而依賴血培養(yǎng)則至少需要48小時，且其陽性率不高。又如CRP能快速有效地檢測細菌性腦膜炎，其陽性率達99。 惡性腫瘤患者CRP大都升高。如CRP與AFP的聯(lián)合檢測，可用于肝癌與肝臟良性疾病的鑒別診斷。CRP測定用于腫瘤的治療和預后有積極意義。手術(shù)前CRP上升，手術(shù)后則下降，且其反應不受放療、化療和皮質(zhì)激素治療的影響，有助于臨床估價腫瘤的進程。 CRP用于評估急性胰腺炎的嚴重程度。當CRP高于250L時，則可提示為廣泛壞死性胰腺炎。 正常參考值：10L

25、,11、血清淀粉樣蛋白A（serum amyloid A，SAA)是一種急性時限反應蛋白，屬于載脂蛋白家族中的異質(zhì)類蛋白質(zhì)，相對分子量約12 000。在急性時限反應中，經(jīng)IL-1、IL-6和TNF刺激，SAA在肝臟中由被激活的巨噬細胞和纖維母細胞合成，可升高到最初濃度的100-1000 倍，但半衰期極短，只有50分鐘左右。 血清淀粉樣蛋白 A 與高密度脂蛋白 (HDL)有關，它能在炎癥期間調(diào)節(jié)高密度脂蛋白的代謝。血清淀粉樣蛋白 A 一個特別重要的特性是其降解產(chǎn)物能以淀粉樣蛋白 A (AA) 原纖維的方式沉積在不同的器官中，在慢性炎癥疾病中這是一種嚴重的并發(fā)癥。,與 C 反應蛋白 (CRP) 類

26、似，血清淀粉樣蛋白 A 的含量濃度是反映感染性疾病早期炎癥的敏感指標，有助于診斷炎癥、評估其活性、監(jiān)控其活動及治療。,注意： 正性APRP：升高 如：AAT、AAG、Hp、Cp、C4、C3、CRP和纖維蛋白原。 負性APRP：降低 如：PA、ALB、TRF。 2-MG不是APRP。,以%表示： Alb: 57%68% 1: 1.0%5.7%2: 4.9%11.2% : 7%13% : 9.8%18.2%,以g/L表示： Alb: 3552 g/L 1: 1.04.0 g/L 2: 4.08.0 g/L : 5.010.0 g/L : 6.013.0 g/L,血清蛋白電泳的正常組分,四、血清電泳

27、組分分析,圖形分析,直接法：電泳染色后，直接觀察圖形的變 化，大概判斷各區(qū)帶的增減。如需定量， 可進一步脫色、比色。 光密度掃描法：可直接觀察各區(qū)帶的掃描圖 形，且可以以數(shù)值表示各組分的含量。,怎樣判斷蛋白電泳圖譜,區(qū)帶的外觀：（估算） 區(qū)帶的濃度：測定區(qū)帶Pr含量（相對值），洗脫法或直接光密度。 波峰（光密度掃描）：同一濃度下，波峰的高度和寬度與Pr的純度密切相關。 均一Pr：形成一個窄、頂尖和峰高的波峰 數(shù)種Pr：形成一個寬、頂平和峰低的波峰,異常電泳圖譜的臨床意義,異常血清蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型及其特征 圖譜類型 TP Alb 1 2 腎病型 不定 肝硬化型 N N N -融合 急性炎癥

28、N N N 慢性炎癥 蛋白質(zhì)缺乏型 個別區(qū)帶出現(xiàn)特征性缺乏,M蛋白血癥型,在- 區(qū)帶中間出現(xiàn)M蛋白區(qū)帶,(1)急性和慢性炎癥,主要特征：白蛋白減少或正常，1和2球蛋白增高，當有明顯的急性炎癥病灶時，可顯著增高。炎癥轉(zhuǎn)為慢性時其增加程度減低。球蛋白增高不明顯，當炎癥轉(zhuǎn)為慢性時，可明顯增加。,（2）腎臟疾病,腎臟疾病常有血漿蛋白質(zhì)的丟失。蛋白尿包括腎小球性、腎小管性和混合性蛋白尿三類。 腎小球性蛋白尿：以中分子量為主，如TRF等，稱選擇性蛋白尿;可見于腎小球性腎炎、糖尿病、自身免疫性疾病等。 腎小管性蛋白尿:主要是相對小分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)排泄增多，如:2-微球蛋白（2-M）?？梢娪谀I盂腎炎，腎血管性

29、疾病等。 混合性蛋白尿：兼有腎小球濾過功能與腎小管重吸收功能的障礙。嚴重腎病致腎小球失去分子篩作用，出現(xiàn)非選擇性蛋白尿，可表現(xiàn)為廣泛的低血漿蛋白質(zhì)血癥。,主要特征：此圖形的分子篩效應明顯，為典型的選擇性蛋白漏出型圖形，其特征為白蛋白明顯減低，1球蛋白輕度增,2球蛋白明顯增加，球蛋減低、正?；蛟龈摺３扇四I病綜合征時,球蛋白通常增加，特別是狼瘡性腎炎淀粉樣腎病等，球蛋白則明顯增加。,病理分析：腎小球損傷 Alb TP Alb 1（主要是1-AG） 2-MG、 2 ,選擇性蛋白質(zhì)丟失的特征,Alb區(qū)帶： Alb明顯低下，PA也下降 1-球蛋白區(qū)帶：AAG，AAT下降， AAG合成增加 2-球蛋白區(qū)帶

30、：AMG和Hp增加 -球蛋白區(qū)帶：-Lp增加，TRF下降 -球蛋白區(qū)帶：IgG降低，IgM可有增加,不定,低白蛋白血癥型,（3）肝臟疾病,+ (),主要特征：清蛋白在所有病例中均有不同程度的減低，1、2和球蛋白正?；蚪档停虻鞍壮Ｃ黠@增高，區(qū)帶的寬度也明顯增加，可見-橋，為本病的特征。根據(jù)-橋的程度可將其分為三型。,Alb帶: PA，Alb明顯降低 1-帶：AAT增高顯著, AAG偏低 2-帶：Cp輕度升高，AMG明顯增 高； Hp偏低 -帶：TRF明顯降低 -帶：IgG彌散性增高，IgA明顯升 高；CRP輕度升高。,肝硬化,第型： 和區(qū)帶連成一片，難于分開，稱為-橋。此型除見于極少數(shù)結(jié)締組織

31、疾病外，幾乎全見于肝硬化，如見到-橋，并伴有1和2球蛋白減少時可確診為肝硬化，故將此型稱為肝硬化型。 第型： 有-橋存在，但在與區(qū)帶之間仍可見一淺谷，兩者可分開，稱為不完全性-橋，但僅據(jù)此尚不能診斷為肝硬化，僅能作出提示診斷，故將此型稱為提示肝硬化型。 第型： 為非特異型，與區(qū)帶能明顯分離，沒有形成-橋，與其它原因所致的高球蛋白血癥完全不能區(qū)別。,病理分析: -橋的出現(xiàn)與血清免疫球 蛋白,特別是IgG、IgA、IgM同時 增加有關,其中又以IgA影響較大, IgA IgM泳動在2與之間時,使 與區(qū)融合而形成-橋。,原發(fā)性肝癌型,主要特征： 白蛋白和1球蛋白之間有一小的甲胎蛋白帶。,AFP,（4

32、）M蛋白血癥,M蛋白血癥：漿細胞病時，異常漿細胞克隆增 殖,產(chǎn)生大量單克隆免疫球蛋白或其輕鏈或重鏈片段，病人血清或尿液中可出現(xiàn)結(jié)構(gòu)單一的M蛋白。 三種類型： 免疫球蛋白型：IgE、IgA、IgM或IgD的一種 輕鏈型：由于K或輕鏈合成超過重鏈，而游 離于血清 重鏈型：漿細胞只產(chǎn)生免疫球蛋白的重鏈或有缺陷的重鏈,主要特征：在電泳圖形上，出現(xiàn)異常濃 集色澤深染的窄區(qū)帶，此區(qū)帶多出 現(xiàn)在或區(qū)，偶見于區(qū)。用光 密度計掃描，可見到尖銳的高峰。 （其寬窄是與ALB區(qū)帶相較，若大致相 等或窄，應考慮M蛋白）,IgG 型多發(fā)性骨髓瘤,M區(qū)帶,特點：多出現(xiàn)于到慢區(qū)，且較IgA或 IgM形成的M蛋白區(qū)帶窄而濃集。

33、如果濃度很高，可形成象小波浪的蛋白帶。,IgA 型多發(fā)性骨髓瘤,M區(qū)帶,特點：可出現(xiàn)于2 、區(qū)。多出現(xiàn)和之間。,代表性疾?。憾喟l(fā)性骨髓瘤、原發(fā)性巨球蛋白血癥、重鏈病、輕鏈病、自身免疫性疾病、淋巴肉瘤、良性M蛋白血癥等。,四、尿液蛋白質(zhì),1、2-微球蛋白（2-microglobulin,BMG）分子量為11800，存在于所有有核細胞的表面，特別是淋巴細胞和腫瘤細胞，并由此釋放入血循環(huán)。它是細胞表面人類淋巴細胞抗原（HLA）的鏈（輕鏈）部分（為一條單鏈多肽），分子內(nèi)含一對二硫鍵，不含糖。半壽期約107分鐘，可透過腎小球，但尿僅有濾過量的1%，幾乎完全可由腎小管回收。 2-微球蛋白在腎功能衰竭、炎癥

34、及腫瘤時，血漿中濃度可升高。主要的臨床應用在于監(jiān)測腎小管功能。特別用于腎移植后，如有排斥反應影響腎小管功能時，可出現(xiàn)尿中BMG排出量增加。在急性白血病和淋巴瘤有神經(jīng)系統(tǒng)浸潤時，腦脊液中BMG可增高。因含量微，常用放射免疫方法測定，正常血漿BMG參考值為1.0-2.6g/L，尿中0.03-0.37mg/d。,增高：見于近端腎小管損害自身免疫性疾病惡性腫瘤肝病臟器移植后的排斥反應艾滋病等尿2微球蛋白增高見于急性或慢性腎小球腎炎尿毒癥糖尿病腎病系統(tǒng)性紅斑狼瘡累及腎病變腎盂腎炎先天性Fanconi綜合征Wilson病鎘金屬中毒以及攝入慶大霉素硝苯地平（心痛定）妥布霉素等藥物 減低：見于急性或慢性腎小球

35、腎炎腎病綜合征等,四、尿液蛋白質(zhì),2、1-微球蛋白：1-Microglobulin.1M 用于評價近曲小管對濾過的微小蛋白重吸收的功能和容量。肝細胞和淋巴細胞可合成1M，其相對分子量在2533KD之間，等電點pH為3.64.4。1M也稱作蛋白質(zhì)HC，據(jù)報導有免疫抑制性，它對抗原誘導的淋巴細胞的激活和嗜中性白細胞的向化性具有抑制作用。部分1M在血清中以游離分子狀態(tài)出現(xiàn)。也有一部分外于IgA和蛋白結(jié)合狀態(tài)中。腎臟中一定量的腎小球濾過液后，被近曲小管的上皮細胞接納，再通過特異的內(nèi)吞作用機制重吸收，在這些細胞的溶酶體中代謝。所以健康人的尿中只有痕量的2M、1M、視黃醇結(jié)合蛋白和人免疫球蛋白輕鏈的存在。

36、,1M是低分子量血漿蛋白（LMW）的一種，有內(nèi)種機制會導致尿中LMW蛋白濃度的增加：腎小球濾出率保持不變，損害腎小管重吸收（腎小管蛋白尿）；血漿中LMW蛋白濃度增加（例如，合成的增加或腎功能不全）會導致濾出量的增加，造成LMW蛋白質(zhì)的腎小管內(nèi)吞容量負擔加重；兩種機制兼而有之。故LMW蛋白是腎小管重吸收功能障礙的合適標志。1M與2M有著相似的性質(zhì)，但優(yōu)點是在酸性尿的pH范圍內(nèi)1M有著更高的穩(wěn)定性，同時在“無肌酸酐”條件下（血清）對于腎功能不全是靈敏度最高的一種標記物。正常值：痕量（透射濁度法）,第二節(jié) 體液蛋白質(zhì)測定,總蛋白測定,個別蛋白質(zhì)的測定,蛋白分離測定技術(shù),發(fā)展趨勢:,測定體液標本:,血

37、漿：普遍,尿液，腦脊液和胸腹水等：有選擇性的組織病變檢查,免疫化學法特異定量個別蛋白質(zhì),體液蛋白質(zhì)的測定方法概括：,常規(guī)：免疫濁度法、免疫擴散法，免疫電泳法， 微量：放射免疫測定（RIA），酶免疫測定法（ELA/ELISA）,電泳測定：,定量化學測定TPr，Alb,電泳 組成圖譜 半定量 定量,染料結(jié)合法，UV法，折光法等,一、血清總蛋白測定,假設：,、 純多肽鏈，含氮量平均為16 % 、各種蛋白質(zhì)與化學試劑反應性一致，僅為相對定量,測定依據(jù)：蛋白質(zhì)測定一般利用蛋白質(zhì)以下的結(jié)構(gòu)或性質(zhì),1、元素組成測定：含N穩(wěn)定； 2、重復的肽鏈結(jié)構(gòu)：具有多個肽鍵； 3、酪氨酸和色氨酸與Folin-酚試劑反應顯

38、色或UV 吸收； 4、與色素結(jié)合的能力：與染料以離子鍵或共價鍵連接； 5、沉淀后借濁度測定：光度計測定； 6、光折射測定：折射儀測定。,方法：,1.凱氏定氮法參考方法2.雙縮脲法( 推薦) 3.酚試劑法4.散射比濁法 5.染料結(jié)合法6. UV 法 .折光測定法,1.凱氏定氮法參考標準方法(0.05mg N 0.3g pro),消化用濃硫酸將蛋白質(zhì)消化為硫酸銨；（耗時） 蒸餾用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發(fā)； 吸收用酸性溶液（硼酸）吸收氣態(tài)氨（使H+ ） 滴定用已標定的無機酸滴（使H+ 恢復），計算總氮量 定蛋白（總氮量-非蛋白氮）6.25=蛋白含量,納氏試劑：碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應生成

39、淡黃棕色膠態(tài)化合物，其色度與氨氮含量成正比。,原理：,三聚氰胺化學式：C3N6H6，分子量：126 含氮量達66%。,評價：,優(yōu)點：準確度高，精密度高，靈敏度高，是公認的參考方法。 缺點：操作復雜，費時，不適合常規(guī)檢測，血清各蛋白含氮量會有所變化尤其是疾病時。,應用：標準蛋白的標定及校正其它常規(guī)方法,2.雙 縮脲法,原 理：,蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性溶液中能與Cu2+作用而產(chǎn) 生紫紅色絡合物，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與 蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸成分無關。,條件：至少含兩個肽鍵（-CONH-）基團才能和Cu2+形成絡合物,氨基酸及二肽無反 應,三肽以上才能反應。,雙縮脲生成

40、,評價：,優(yōu)點：簡便，準確，重復性好，10g-120g/L線性好，特異性與精密度好，批內(nèi)CV%2%，顯色穩(wěn)定。 缺點：靈敏度較差，對蛋白質(zhì)含量低的體液標本不適合。,應用：常規(guī)推薦方法。手工或上機使用。,3.酚試劑法(Folin試劑法）,原理：,蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸殘基和色氨酸殘基能夠和酚試劑中的磷鎢酸-磷鉬酸反應生成藍色化合物，,Lowry改良法：在酚試劑中加入Cu2+，提高了呈色的靈敏度，為雙縮脲法的100倍左右。吸收峰為745-750nm。,評價及應用：,優(yōu)點：操作簡單，改良法靈敏度高（10g-60g），適合測定蛋白含量少的標本。 缺點：各種蛋白質(zhì)酪氨酸和色氨酸比例不同，只適合測定單一蛋白

41、質(zhì)。受一些藥物干擾。,4.比濁法,原理：,評價及應用：,優(yōu)點：簡便不需特殊儀器。 缺點：濁度形成的干擾因素多（加試劑方法，反應溫度，蛋白絮狀沉淀等）,某些酸類（磺基水楊酸等）和血清蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生沉淀，測其濁度，與標準對比，可求蛋白含量。,5.染料結(jié)合法,在酸性環(huán)境下，帶正電的蛋白質(zhì)（-NH3+)與染料的陰離子產(chǎn)生顏色反應，使染料的吸收峰改變，可既而用分光光度法比色測定。,原理：,常用染料：氨基黑，考馬斯亮藍等,考馬斯亮藍G-250在游離狀態(tài)下呈紅色，最大光吸收在488nm；當它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌鞍踪|(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。 蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍G-250結(jié)合在2min左右的時間內(nèi)達到平衡，完成反應十分迅速；其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。該法是1976年Bradford建立，試劑配制簡單，操作簡便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質(zhì)含量，測定蛋白質(zhì)濃度范圍為01 00