1、質(zhì)量控制在保證疫苗的安全性和有效性中的作用,中國藥品生物制品檢定所,疫苗的適用人群,接種人群: -以健康人為適用人群 -兒童,疫苗的分類,使用目的，主要分為 預(yù)防性疫苗，是目前主要的疫苗 治療性疫苗 預(yù)防性疫苗又可分為 活疫苗：麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎、乙腦、OPV等 滅活疫苗：狂犬、流感、IPV等 重組疫苗：乙肝、HPV等 亞單位和組份疫苗：流感亞單位疫苗，多糖類,疫苗的兩個(gè)要素,安全性 適用人群為健康人群，因此，安全性為首要考慮的要素 本報(bào)告中安全性只涉及質(zhì)量控制保證疫苗的安全性，不 涉及疫苗內(nèi)在原因產(chǎn)生的副反應(yīng)問題。 有效性 有效性是指應(yīng)用該疫苗后，使個(gè)體達(dá)到預(yù)防感染該病原 的能力 由于疫苗主

2、要由病原體或大分子物質(zhì)（蛋白、多糖等）組成，存在較多的可變因素。在生產(chǎn)過程中進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制有助于保證疫苗的安全性和有效性，另外，保證疫苗質(zhì)量的連續(xù)性。 疫苗的質(zhì)量控制涉及疫苗生產(chǎn)的全過程，遵守GMP原則，符合藥典中通則和個(gè)論的要求。,第一部分：疫苗質(zhì)量控制中的安全性 考慮要點(diǎn),第二部分：疫苗質(zhì)量控制中的有效性 考慮要點(diǎn),內(nèi) 容,一，起始原材料，須符合藥典中要求，重點(diǎn)考慮： 1. 生產(chǎn)用菌毒種： 例：減毒活疫苗，毒種的安全性考慮要點(diǎn)包括： 神經(jīng)毒力（猴體試驗(yàn)或其它敏感動(dòng)物） 毒種傳代穩(wěn)定性（突變、返祖），結(jié)合有效性制訂毒種代次 2.生產(chǎn)用基質(zhì) 原代細(xì)胞：重點(diǎn)為外源因子、逆轉(zhuǎn)錄酶等因素 生產(chǎn)活

3、疫苗時(shí)，應(yīng)來自SPF級(jí)動(dòng)物 傳代細(xì)胞：制訂細(xì)胞庫，對(duì)外源因子、致瘤性檢定（限定代次） 人二倍體細(xì)胞：鑒別、核型檢查等 雞胚：制備毒種或活疫苗時(shí)應(yīng)為SPF級(jí)雞胚,第一部分：疫苗質(zhì)量控制中的安全性考慮,起始原材料質(zhì)量控制,3. 動(dòng)物原性材料 牛血清、胰酶等，進(jìn)行必要的外源因子檢測(cè)，不允許從瘋牛病疫區(qū)進(jìn)口此類原材料 4. 其它材料 4.1 化學(xué)試劑（滅活、裂解、純化、穩(wěn)定劑等） 應(yīng)使用藥用級(jí) 例：某企業(yè)的穩(wěn)定劑成份導(dǎo)致異常毒性不過關(guān) 4.2 生產(chǎn)用水 4.3 抗生素， 嚴(yán)禁使用青霉素或-內(nèi)酰胺類抗生素 將來要求在細(xì)胞維持液中不得添加抗生素,國產(chǎn)疫苗中慶大霉素檢測(cè)結(jié)果,國產(chǎn)疫苗中卡那霉素檢測(cè)結(jié)果,二、

4、生產(chǎn)過程中控制，必須符合GMP原則,1. 生產(chǎn)條件嚴(yán)格控制，例如： 1.1 活疫苗培養(yǎng)溫度：OPV疫苗中溫度升高時(shí)，病毒容易返祖，導(dǎo)致猴體神經(jīng)毒力試驗(yàn)不過關(guān)。 1.2 滅活溫度及時(shí)間：對(duì)滅活疫苗至關(guān)重要，尤其是采用野毒株生產(chǎn)疫苗時(shí)。1955年發(fā)生在美國的“卡特門”事件，未充分滅活的脊灰疫苗導(dǎo)致60名兒童和89名接觸者發(fā)生脊髓灰質(zhì)炎。 1.3 病毒裂解劑濃度、溫度及時(shí)間：流感裂解不充分，在小年齡兒童中導(dǎo)致副反應(yīng)增加 1.4 純化設(shè)備及條件：防止純化能力下降后增加疫苗的副反應(yīng),三、生產(chǎn)材料產(chǎn)生的殘留物質(zhì)檢測(cè),1. 傳代細(xì)胞的外源DNA殘留量 考慮DNA殘留量 考慮殘留DNA片段大小 2. 傳代細(xì)胞

5、的宿主蛋白殘留量 安全性考慮 制品純度考慮 正在建立Vero細(xì)胞殘留蛋白含量檢測(cè)方法 3. 原代細(xì)胞宿主成份 如：雞胚卵清蛋白 4. 內(nèi)毒素 來源：生產(chǎn)材料中含有，容器具引入 總的來講，制品純度越高，上述殘留成份越少，疫苗的安全性越高,流感疫苗總蛋白、卵清蛋白檢驗(yàn)結(jié)果分析,四、生產(chǎn)工藝中引入的殘留物質(zhì)檢測(cè),1. 培養(yǎng)基中成份:不使用人血清,可用人血白蛋白 2. 牛血清殘留(致敏物質(zhì)) 3. 生產(chǎn)工藝中采用的化學(xué)試劑 滅活劑：甲醛等滅活試劑 裂解劑：Tween80, TritonX100,乙醚等 防腐劑：硫柳汞，苯酚，2-苯氧乙醇 佐劑：氫氧化鋁 特點(diǎn)：大多數(shù)為限度實(shí)驗(yàn) 某些檢測(cè)項(xiàng)目為生產(chǎn)過程中

6、的控制，或在原液中進(jìn)行檢測(cè)，在成品中不含有檢測(cè)項(xiàng)目，企業(yè)應(yīng)建立可靠的檢測(cè)方法并進(jìn)行充分驗(yàn)證。如乙醚檢測(cè)，如采用人工嗅覺法則不可靠，而HPLC或氣相法則更加準(zhǔn)確。,異常毒性試驗(yàn)與疫苗的安全性,異常毒性試驗(yàn)主要用于檢測(cè)疫苗中與制品無關(guān)的任何毒性，如錯(cuò)誤添加、混淆等導(dǎo)致的明顯的毒性。 限于劑量和動(dòng)物數(shù)量，該試驗(yàn)不能充分反應(yīng)或代替疫苗的安全性。歐美國家要求工藝驗(yàn)證后，一般不再進(jìn)行該項(xiàng)目常規(guī)檢測(cè)。 疫苗中的不安全因素在大量人群使用時(shí)得以體現(xiàn) 只有進(jìn)行嚴(yán)格的生產(chǎn)過程控制，采用可靠、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法才能保證疫苗的安全性 我國在異常毒性檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)一些問題，如疫苗稀釋液滲透壓或凍干保護(hù)劑成份導(dǎo)致的注射后瞬間反應(yīng)。

7、,疫苗的有效性,研發(fā)階段：主要依賴于臨床試驗(yàn)，在雙盲、隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)中確定 生產(chǎn)階段：依靠嚴(yán)格的生產(chǎn)和質(zhì)量控制保證疫苗質(zhì)量（包括有效性）的連續(xù)性,第二部分：疫苗質(zhì)量控制中的 有效性考慮要點(diǎn),1. 生產(chǎn)用菌毒種：核心問題 1.1 與預(yù)防疾病的對(duì)應(yīng)關(guān)系：不同血清型 1.2 菌毒株的免疫原性：藥典中規(guī)定對(duì)主種子進(jìn)行免疫 原性檢查，多數(shù)活疫苗規(guī)定在人體中檢查。 如：麻疹毒株主種子批，接種健康易感兒童至少30名，抗體陽 轉(zhuǎn)率不低于95。 1.3 毒種傳代次數(shù)：尤其是減毒活疫苗，不同代次的免 疫原性有差別。例如：OPV疫苗，毒種傳代次數(shù)有 嚴(yán)格限定。 1.4 毒種保藏條件，一般為凍干或低溫保藏。,2. 生產(chǎn)

8、用基質(zhì) 傳代細(xì)胞和人二倍體細(xì)胞應(yīng)建立細(xì)胞庫系統(tǒng)，有效保證生產(chǎn)疫苗質(zhì)量的連續(xù)性。 3. 生產(chǎn)中控制 培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基、血清等的細(xì)胞增殖能力 收獲次數(shù)：限定收獲次數(shù)，細(xì)胞老化導(dǎo)致繁殖的病毒滴度變化 中間品的保藏條件：防止抗原聚合，病毒滴度下降 包裝材料：抗原吸附在容器上,疫苗有效性的保證,鑒別試驗(yàn)：證明為本疫苗，防止混淆，尤其是多價(jià)疫苗 有效成份含量 1. 活疫苗滴度：盡量采用凍干劑型，液體疫苗時(shí)需有合適的保護(hù)劑 例如：OPV液體疫苗中添加1mol/L 的MgCl, -20C凍存保藏 2. 滅活疫苗中抗原含量 采用可靠的方法準(zhǔn)確測(cè)定：基于抗原抗體的含量測(cè)定采用平行線法 效期末標(biāo)準(zhǔn)：臨床試驗(yàn)確定的抗

9、原含量 放行標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)合穩(wěn)定性考核數(shù)據(jù)在效期末標(biāo)準(zhǔn)上適當(dāng)增加抗原 含量，保證效期末標(biāo)準(zhǔn) 例如：流感疫苗中有效成份標(biāo)示量為15ug/劑, 穩(wěn)定性考核一年 下降2ug /劑, 則企業(yè)放行標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)為17 /劑。 3. 制品的裝量：附加量保證可抽出體積,流感疫苗血凝素趨勢(shì)圖,重組乙型肝炎疫苗,穩(wěn)定性： 原液和半成品：制訂儲(chǔ)藏條件下的效期 成品：進(jìn)行穩(wěn)定性檢查 對(duì)凍干減毒活疫苗：熱穩(wěn)試驗(yàn)，熱穩(wěn)后滴度達(dá)到效期末標(biāo)準(zhǔn) 水分含量測(cè)定：水分含量影響穩(wěn)定性，應(yīng)低于藥典中標(biāo)準(zhǔn) 效力試驗(yàn)參考品： 效力試驗(yàn)是疫苗有效性的核心，基于生物活性測(cè)定方法的高變異性，在效力測(cè)定時(shí)必須包含有明確含量標(biāo)示（以及變異范圍）的參考品，以便：

10、 1. 證明該次測(cè)定有效 2. 對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行標(biāo)定 3. 監(jiān)測(cè)效力試驗(yàn)方法和參考品的變化趨勢(shì) 若企業(yè)采用自制參考品，應(yīng)對(duì)國際參考品或國家參考品進(jìn)行校正，采用多次測(cè)定數(shù)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，確定含量及變異范圍，并保藏在合適條件下，制訂參考品的趨勢(shì)圖，監(jiān)測(cè)參考品的變化。,脊灰國家參考品滴定趨勢(shì)圖,疫苗有效性總結(jié),臨床試驗(yàn)確定 包括：劑量探索 免疫原性：有替代指標(biāo)時(shí) 保護(hù)效果：最有說服力的證據(jù) 上市后監(jiān)測(cè)：大量人群應(yīng)用后的實(shí)際效果 生產(chǎn)中進(jìn)行控制保證疫苗的有效性 包括：保證生產(chǎn)的連續(xù)性 準(zhǔn)確的效力試驗(yàn)方法 穩(wěn)定性,定義 生物制品批簽發(fā)，是指國家對(duì)疫苗類制品、血液制品、用于血源篩查的體外生物診斷試劑以及國家

11、藥品管理當(dāng)局規(guī)定的其他生物制品，每批制品出廠上市或進(jìn)口時(shí)實(shí)行強(qiáng)制性資料審查、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)后決定是否簽發(fā)上市的管理制度。 生物制品批簽發(fā)是一項(xiàng)重要的科學(xué)的生物制品管理制度。 國家食品藥品監(jiān)督管理局第11號(hào)令：生物制品批簽發(fā)管理辦法,生物制品批簽發(fā),我國實(shí)行批簽發(fā)的法律基礎(chǔ) 中華人民共和國藥品管理法（第四十一條） 中華人民共和國藥品管理法實(shí)施條例（第三十九條） 疫苗流通及預(yù)防接種管理?xiàng)l例(第十七條) 生物制品批簽發(fā)管理辦法 進(jìn)口藥品管理辦法,生物制品批簽發(fā),生物制品批簽發(fā),批簽發(fā)產(chǎn)品的銷售 疫苗流通和預(yù)防接種管理?xiàng)l例第十七條規(guī)定: 疫苗生產(chǎn)企業(yè)、疫苗批發(fā)企業(yè)在銷售疫苗時(shí)，應(yīng)提供由藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)依法簽發(fā)

12、的生物制品每批檢驗(yàn)合格或者審核批準(zhǔn)證明復(fù)印件，并加蓋企業(yè)印章。 疫苗批發(fā)企業(yè)經(jīng)營進(jìn)口疫苗的，還應(yīng)當(dāng)提供進(jìn)口藥品通關(guān)單復(fù)印件，并加蓋企業(yè)印章。 疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、接種單位在接收或者購進(jìn)疫苗時(shí)，應(yīng)當(dāng)向疫苗生產(chǎn)企業(yè)、疫苗批發(fā)企業(yè)索取前款規(guī)定的證明文件，并保存至超過疫苗有效期2年備查”。,我國批簽發(fā)實(shí)施過程 準(zhǔn)備階段 試行階段 正式實(shí)施階段 2001年12月我國開始試行批簽發(fā)（EPI 5種制品） 2002年12月頒布了生物制品批簽發(fā)管理辦法（試行） 2003年1月15日開始正式實(shí)行批簽發(fā) 2004年6月頒布了生物制品批簽發(fā)管理辦法 2006年1月1日對(duì)所有疫苗實(shí)施批簽發(fā)管理 2007年12月31日對(duì)所

13、有血液制品實(shí)施批簽發(fā)管理,生物制品批簽發(fā),生物制品批簽發(fā),執(zhí)行批簽發(fā)機(jī)構(gòu) 國家食品藥品監(jiān)督管理局主管全國批簽發(fā)工作。 由國家藥品監(jiān)督管理當(dāng)局指定藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)承擔(dān)批 簽發(fā)檢驗(yàn)和資料審核。,生物制品批簽發(fā),批簽發(fā)制品質(zhì)量執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn) 生物制品批簽發(fā)檢驗(yàn)和/或資料審核的標(biāo)準(zhǔn) 現(xiàn)行的中國藥典 國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的其他藥品標(biāo)準(zhǔn) 企業(yè)藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn) 進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn) 同時(shí)需提供制品生產(chǎn)國政府的批簽發(fā)合格證,批簽發(fā)方式 資料審查 資料審查及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn) 樣品檢驗(yàn) 全部項(xiàng)目檢驗(yàn) 部分項(xiàng)目檢驗(yàn),生物制品批簽發(fā),批簽發(fā)程序（1）,進(jìn)口批簽發(fā)程序（2）,生物制品批簽發(fā),企業(yè)申請(qǐng)批簽發(fā)時(shí)應(yīng)提供的資料 批準(zhǔn)文件（下列其

14、中之一） 藥品批準(zhǔn)文號(hào) 進(jìn)口藥品注冊(cè)證或醫(yī)藥產(chǎn)品注冊(cè)證 體外生物診斷試劑批準(zhǔn)注冊(cè)證明 提交資料 生物制品批簽發(fā)申請(qǐng)表 批制造及檢驗(yàn)記錄摘要 檢驗(yàn)所需的同批號(hào)樣品 企業(yè)質(zhì)量保證部門負(fù)責(zé)人簽字的質(zhì)量保證證明件 進(jìn)口預(yù)防用疫苗類制品應(yīng)同時(shí)提交生產(chǎn)國國家藥品管理當(dāng)局出具 的批簽發(fā)證明文件，并提供中文譯本。,生物制品批簽發(fā),執(zhí)行批簽發(fā)機(jī)構(gòu)審查資料內(nèi)容 生產(chǎn)用菌/毒種、細(xì)胞等是否與國家藥品管理當(dāng)局批準(zhǔn)的一致 生產(chǎn)工藝是否與國家藥品管理當(dāng)局批準(zhǔn)的一致 生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制是否達(dá)到國家藥品標(biāo)準(zhǔn)的要求 制品原液、半成品、成品的檢驗(yàn)項(xiàng)目、方法、結(jié)果是否符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定 制品包裝、標(biāo)簽、使用說明書是否符合相關(guān)規(guī)定 申報(bào)資料的完整性,生物制品批簽發(fā),生物制品批簽發(fā)時(shí)限要求 疫苗類制品 55 工作日 血液制品 30 工作日 血源篩查試劑類制品 15 工作日 承擔(dān)批簽發(fā)檢驗(yàn)或?qū)徍说乃幤窓z驗(yàn)機(jī)構(gòu)在規(guī)定的時(shí)限內(nèi)不能作 出批簽發(fā)檢驗(yàn)或?qū)徍私Y(jié)論的，應(yīng)當(dāng)將延期的理由和時(shí)限書面通 知批簽發(fā)申報(bào)企業(yè)，并報(bào)國家食品藥品