1、幽門螺桿菌感染的實(shí)驗(yàn)診斷,講課內(nèi)容,第一節(jié) 幽門螺桿菌特點(diǎn) 第二節(jié) 幽門螺桿菌感染的檢測方法 第三節(jié) 幽門螺桿菌檢測方法的臨床應(yīng)用,1 2 3,第一節(jié) 幽門螺桿菌特點(diǎn),幽門螺桿菌（Helicobacter pylori 簡稱HP），呈弧形或S形，有12個(gè)微小彎曲，屬微需氧菌，在pH值為68時(shí)繁殖最為活躍，該菌具有豐富的尿素酶，可分解食物中的尿素產(chǎn)生氨，該菌生長于胃粘液深層，胃粘膜表面，多在胃竇部以胃小凹、上皮皺褶的內(nèi)折及腺腔內(nèi)為多。,H. Pylori感染和十二指腸潰瘍,H. Pylori感染 D/G細(xì)胞功能改變遺傳易感性 壁細(xì)胞總體增加 B型慢性胃竇炎 胃泌素 胃酸分泌量 H. Pylori

2、的遷移十二指腸粘膜胃上皮化生 十二指腸球炎 十二指腸球潰瘍,H. Pylori感染和胃癌的關(guān)系,淺表性胃炎 正常胃粘膜基因損傷 H. Pylori感染彌漫性胃癌 萎縮性胃炎 環(huán)境因素胃粘膜腸上皮化生 高CagA+-HP滴度 宿主因素 的H.pylori菌株感染 腸型早期胃癌進(jìn)展期胃癌,3.HP的毒力作用,取決于 定植能力 菌株的基因型 細(xì)菌的圓球體樣型態(tài) 對抗菌藥物的敏感性,第二節(jié) 幽門螺桿菌感染的檢測,侵入性檢測方法,非侵入性檢測方法,快速尿素酶試驗(yàn) 病理切片染色 培養(yǎng) 黏膜涂片革蘭氏染色 基因方法: PCR等,13C-或14C-尿素呼氣試驗(yàn) Hp糞便抗原試驗(yàn) Hp血清抗體試驗(yàn),試驗(yàn)原理,H

3、P能產(chǎn)生豐富尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個(gè)分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。,操作過程,活檢同時(shí)取2塊組織進(jìn)行檢測（胃竇和胃體各1塊），標(biāo)本放置于試劑后觀察顏色變化。,注意事項(xiàng),檢測結(jié)果受試劑pH值、取材部位、組織大小、細(xì)菌量、觀察時(shí)間、環(huán)境溫度等因素影響,（一）快速尿素酶試驗(yàn)RUT,一、創(chuàng)傷性檢查,胃鏡檢查胃黏膜取材, 直接涂片革蘭氏染色，也可包埋切片，常規(guī)HE染色或銀染，直接鏡檢觀察Hp。,直接鏡檢,其它組織學(xué),（二）組織學(xué)檢查,1.免疫組化染色特異性高。 2.HE染色可同時(shí)作病理診斷； 3.熒光原位雜交（ FISH）具有較高敏感性,2020/8/27,10,可編輯,1.在胃鏡取胃粘

4、膜放在轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中。 2. 接種于Hp牛腦浸液培養(yǎng)基，分區(qū)劃線。 3. 置5-12CO2培養(yǎng)箱35-37，3-5d形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶血環(huán)。,培養(yǎng)過程,診斷Hp最可靠的方法，可作為驗(yàn)證其他診斷性試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。 一般用于藥敏試驗(yàn)和科研。,特點(diǎn),（三）細(xì)菌培養(yǎng),幽門螺桿菌的尿素酶(A、B、C、D)基因、16S-rDNA基因、VacA及CagA基因均已克隆成功，根據(jù)幽門螺桿菌不同的耙基因，設(shè)計(jì)不同的引物，從而建立不同的PCR系統(tǒng)，擴(kuò)增產(chǎn)物可經(jīng)凝膠電泳分析.,原理與方法,特點(diǎn),（四） 聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)(PCR檢測技術(shù)),1.與細(xì)菌培養(yǎng)和組織學(xué)染色鏡檢比較無明顯優(yōu)越性。 2.現(xiàn)在可收集

5、胃液PCR檢測幽門螺桿菌敏感性高，但可能與口腔和胃內(nèi)其它尿素酶陽性菌叢起交叉反應(yīng),注：HP的基因分型（HP菌屬亞群）及致病性,VacA基因表達(dá)空泡毒素87KD CagA基因表達(dá)細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白128KD CagA基因僅出現(xiàn)于VacA產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng)時(shí)，是VacA產(chǎn)生效果的標(biāo)志,原理和過程,HP能產(chǎn)生豐富尿素酶，能分解胃中的尿素，當(dāng)整粒攝入含同位素碳-13的尿素膠囊后，碳-13尿素在尿素酶作用下，分解為氨和碳-13二氧化碳，碳-13二氧化碳被小腸上段吸收后，進(jìn)入血循環(huán)，并隨呼氣排出，分析呼氣中的碳-13就可診斷該細(xì)菌的存在,特點(diǎn)和注意事項(xiàng),1.易于操作；可反映全胃Hp感染狀況。 2.檢測前一個(gè)周內(nèi)應(yīng)停用抗生素、鉍劑、質(zhì)子泵抑制劑等藥。 3.孕婦、哺乳期婦女及兒童不宜做。,（一）13C-或14C-尿素呼氣試驗(yàn),二、非創(chuàng)傷性檢查,多采用ELISA雙抗體夾心法，或膠體金試條法。留取晨糞便，用稀釋液稀釋，再加入試條或微孔板檢測。,原理與方法,特點(diǎn),（二）幽門螺桿菌糞便抗原檢測,1.糞便抗原檢測靈敏度高、準(zhǔn)確性好，HP死亡但抗原成分仍保留下來，故在治療前后都可用。 2.適用于所有年齡和類型的患者（兒童）。,多采用ELISA雙抗原夾心法，或膠體金試條法?？煽焖贆z測人血清、血漿或全血中幽門螺桿菌抗體。,原理與方法,特點(diǎn),（三）幽門螺桿菌血清抗體檢測,1.檢測的抗體是IgG，反映一段時(shí)間內(nèi)Hp