1、磁珠法核酸提取試劑盒,背景,DNA提取技術(shù)是分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)技術(shù)。提取DNA的純度及結(jié)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)，是進(jìn)行基因工程各項(xiàng)研究所必須的條件，DNA提取技術(shù)是DNA檢驗(yàn)的第一步驟，也是最關(guān)鍵的步驟。能否成功地進(jìn)行DNA檢驗(yàn)，完全取決于能否從生物檢材中獲得純量的DNA。DNA提取技術(shù)的優(yōu)劣，將直接關(guān)系下游實(shí)驗(yàn)的安全與成敗。,提取核酸的方法,1、PC 抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會(huì)被一次去除，必須靠多次抽提，方可徹底去除。PC抽提最大的優(yōu)勢(shì)是成本低廉，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求較低，對(duì)于經(jīng)費(fèi)緊張的實(shí)驗(yàn)室較為實(shí)用。 2、高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法，同樣也是一個(gè)非常不錯(cuò)的方法。與

2、PC 抽提方法相比，除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點(diǎn)外，該方法幾乎克服了 PC 抽提的所有缺點(diǎn)。更快、更輕松的去除蛋白質(zhì)所可以用于大規(guī)模抽提，但其不足之處是純度 (蛋白質(zhì)殘留) 不夠穩(wěn)定，蛋白質(zhì)的沉淀效率在4會(huì)更好一些。,核酸提取的方法,3、離心柱法是目前試劑盒提取廣泛應(yīng)用的方法。其最大特點(diǎn)是受人為操作因素影響小，純度的穩(wěn)定性很高 (雖然純度不一定比PC 純化方法更高)。加入的液體通過離心后會(huì)進(jìn)入另外一個(gè)離心管中，與含有核酸的柱子完全是分開的，所以洗滌更徹底。其致命弱點(diǎn)是樣品過量，提取效率較低，且需要反復(fù)離心，操作復(fù)雜，成本也較高。 4、生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級(jí)生物磁珠表面，通過介質(zhì)對(duì)核

3、酸的吸附，在外加磁場(chǎng)下使核酸附著于磁珠定向移動(dòng)，從而達(dá)到固液分離純化的作用。與其他幾種方法相比，生物磁珠法具有很多無法比擬的優(yōu)勢(shì)。,生物磁珠的概述,概念：生物磁珠是指具有細(xì)小粒徑的超順磁微球，一般具有超強(qiáng)的順磁性。 1、有超強(qiáng)的順磁性，在磁場(chǎng)中能夠迅速聚集，離開磁場(chǎng)后又能夠有助于磁分離地均勻分散。 2、有合適的且差別較小的粒徑，保證了足夠強(qiáng)的磁響應(yīng)性又不會(huì)沉降。 3、有豐富的表面活性基團(tuán)，以便可以和生化物質(zhì)偶聯(lián)，并在外磁場(chǎng)的作用下實(shí)現(xiàn)與被待測(cè)樣品的分離。,生物磁珠的用途,1、核酸提取 2、細(xì)胞分離（CD4、CD8） 3、蛋白、抗體分離（氨基磁珠、羧基磁珠、環(huán)氧基磁珠） 4、重金屬檢測(cè)（巰基磁珠

4、） 5、核磁共振（無包被磁珠）用于造影劑等。,生物磁珠的分類,按功能用途：環(huán)氧基磁珠、氨基磁珠、羧基磁珠、醛基磁珠、硅基磁珠等。 按直徑：納米級(jí)、微米級(jí)、亞微米級(jí) 按包被情況：裸珠、包被磁珠 按磁珠形態(tài)：磁流體、磁粉,磁珠法核酸提取試劑盒的原理,磁珠法核酸純化技術(shù)采用了納米級(jí)磁珠微珠，這種磁珠微珠的表面標(biāo)記了一種官能團(tuán)，能同核酸發(fā)生吸附反應(yīng)。不同性質(zhì)的磁珠微珠所對(duì)應(yīng)的純化原理是不一致。使用磁珠法來純化核酸的最大優(yōu)點(diǎn)就是自動(dòng)化。磁珠在磁場(chǎng)條件下可以發(fā)生聚集或分散，從而可徹底擺脫離心等所需的手工操作流程。 磁珠法中的細(xì)胞裂解液是一種蛋白變性劑，可使動(dòng)植物的細(xì)胞裂解，并使與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)變性，D

5、NA游離釋放，磁珠可以特異地吸附DNA，通過洗滌，去除DNA以外的蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)，再用洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA，得到純度和濃度均很高的DNA，可用于PCR模板、基因工程等。,磁珠法核酸提取試劑盒適用范圍,磁珠法核酸提取試劑盒是納米技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)、生物醫(yī)學(xué)技術(shù)和法醫(yī)學(xué)技術(shù)的綜合高科技產(chǎn)品?？蓮V泛應(yīng)用于分子生物學(xué)中的基因組研究、分子進(jìn)化研究、醫(yī)學(xué)中遺傳病的研究、突變基因的檢測(cè)、腫瘤的篩查、HPV等的檢測(cè)、HLA分型、移植配型等、法醫(yī)學(xué)生物樣本血斑、精斑、頭發(fā)、煙蒂等現(xiàn)場(chǎng)證物的檢測(cè)、和司法上的親子鑒定、血緣關(guān)系的鑒定等提供證據(jù)、考古學(xué)、大中小學(xué)的生物試驗(yàn)等許多領(lǐng)域。,磁珠法核酸提取試

6、劑盒的優(yōu)勢(shì),簡(jiǎn)便快捷：與傳統(tǒng)提取方法相比耗時(shí)更短，效果更好，簡(jiǎn)化了離心步驟。 高通量：適用于全自動(dòng)機(jī)械化多樣品平臺(tái)操作。 安全無毒：不含酚、氯仿等有機(jī)試劑。 純度高：純化得到的DNA可直接用于酶切、PCR、文庫構(gòu)建、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。,磁珠法核酸提取試劑盒的組成,裂解液：破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使核酸充分的游離出來。 結(jié)合液：使核酸和生物磁珠結(jié)合。 洗滌液：去除殘留雜質(zhì)。 洗脫液：分離DNA與磁珠，得到高質(zhì)量的DNA溶液。 生物磁珠,磁珠法核酸提取試劑盒的提取過程,2、加入磁珠 磁珠起到吸附DNA分子的作用，此時(shí)大部分蛋白質(zhì)等雜質(zhì)在裂解液中,1、裂解 使樣品細(xì)胞破碎，胞內(nèi)dna、rna及蛋白質(zhì)等雜質(zhì)釋放到液體