1、第五講1 中藥含量測(cè)定方法（Determination of Traditional Chinese Medicine）含量測(cè)定的定義和意義 中藥制劑的含量測(cè)定是指用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)方法或儀器分析方法對(duì)制劑中某種（些）有效成分或有效部位進(jìn)行的定量分析。并以其測(cè)定結(jié)果是否符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定來(lái)判斷藥品的優(yōu)劣，是控制和評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的重要方法。 含量測(cè)定方法 中藥制劑含量測(cè)定的方法包括化學(xué)分析法和儀器分析法兩大類(lèi)。由于中藥制劑組成復(fù)雜，儀器分析法更為常用。中國(guó)藥典中藥制劑含量測(cè)定方法概況見(jiàn)下表。 本章重點(diǎn)介紹TLCS、HPLC、GC、HPCE、揮發(fā)油測(cè)定法、分光光度法、浸出物測(cè)定法、容量分析、重量分析。一、

2、薄層色譜法實(shí)驗(yàn)儀器CAMAG Linomat 5 半自動(dòng)點(diǎn)樣儀 CAMAG Scanner3 薄層色譜掃描儀CAMAG 數(shù)碼攝像系統(tǒng)甘草（Licorice ) 種類(lèi)：烏拉爾甘草（Glycyrrhiza ura.Fis.） 脹果甘草（Glycyrrhiza inflata Bat.） 光果甘草 (Glycyrrhiza glabra L.) 藥效:補(bǔ)脾益氣、解毒保肝、潤(rùn)肺止咳、調(diào)和諸藥。 化學(xué)成分:皂苷類(lèi)（甘草酸）、黃酮類(lèi)（甘草苷）、香豆素類(lèi)、氨基酸和多糖類(lèi)化合物。甘草的硅膠薄層掃描指紋圖譜(SG-TLCS-FP), fingerprintTLCS-3D-FP在監(jiān)控藥材質(zhì)量方面的應(yīng)用聚酰胺薄層指

3、紋圖譜（PA-TLCS-FP)甘草聚酰胺薄層掃描圖譜1、概述 （1）薄層色譜法的特點(diǎn) 設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便。 廣泛地選用各流動(dòng)相，比氣相色譜靈活。 靈敏度較高 薄層色譜法適于分析小量樣品 可以采用多種展開(kāi)方式：如，雙向展開(kāi)，多次展開(kāi)，分步展開(kāi)，連續(xù)展開(kāi)；分離原理是的物理化學(xué)原理，例如，吸附色譜，分配色譜，離子交換，薄層電泳，薄層等電聚焦。適于分析熱不穩(wěn)定，難揮發(fā)的樣品。（2）方法原理原理：薄層色譜分離法是將固定相吸附劑均勻地涂在玻璃上制成薄層板，試樣中的各組分在固定相和作為展開(kāi)劑的流動(dòng)相之間不斷地發(fā)生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配過(guò)程。 不同物質(zhì)上升的距離不一樣而形成相互分開(kāi)的斑點(diǎn)從而達(dá)到分離

4、。（3）固定相 硅膠：微酸性極性固定相，適用于酸性、中性物質(zhì)分離（可以制備成酸度不同或堿性硅膠擴(kuò)大使用范圍） 氧化鋁：堿性極性固定相，適用于堿性、中性物質(zhì)分離（可以制備成中性或酸性氧化鋁擴(kuò)大使用范圍） 聚酰胺：含有酰胺基極性固定相，適用于酚類(lèi)、醇類(lèi)化合物的分離 纖維素：含有羥基的極性固定相，適用于分離親水性物質(zhì)2、方法一：薄層色譜-可見(jiàn)分光光度法 1）點(diǎn)樣：條狀，50300ul 2）定位：對(duì)照的位置，區(qū)帶的范圍 紫外、熒光、碘蒸氣、對(duì)照品定位、紫外掃描 3）捕集： 4）洗脫：類(lèi)似 柱色譜 滲漉、多次浸出、加熱溫浸、索氏回流提取 熒光板應(yīng)洗脫后再比色 5）顯色及比色 顯色劑用量 反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫

5、度 顯色穩(wěn)定性 空白試劑及固定相最好不顯色 Off-line3、方法二：薄層色譜-紫外分光光度法 不需加顯色劑 其他同薄層色譜-可見(jiàn)分光光度法Off-line4、薄層色譜掃描法 （Thin Layer Chromatography Scan,TLCS）Off-line 1）定義 薄層掃描法（TLCS）系指用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中有紫外或可見(jiàn)吸收的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分值用于藥品定性定量分析的方法。 2）特點(diǎn) 具有分離分析雙重功能。與高效液相色譜法比較，具有多通道效應(yīng)，可同時(shí)平行分離分析多個(gè)樣品；流動(dòng)相用量少且選擇范圍寬、更換方便；固定

6、相為一次性使用，對(duì)樣品的預(yù)處理要求不高等優(yōu)點(diǎn)。在中藥及其制劑檢驗(yàn)中，是重要的分析方法。 中國(guó)藥典中有32個(gè)中成藥品種采用該法進(jìn)行含量測(cè)定。 3）儀器及其工作原理1.薄層掃描儀 中國(guó)藥典采用雙波長(zhǎng)薄層掃描儀.常用的有島津CS-930型和CAMAG-型等。2.掃描儀工作原理4）測(cè)定方式（1）吸收法 適用于有紫外（可見(jiàn)）吸收的成分，較常用。該法又可采用反射法或透射法測(cè)定。理論上講，透射法比反射法優(yōu)越，但實(shí)際工作中常用反射法，因?yàn)樽贤夤獠荒芡ㄟ^(guò)玻板。 （2）熒光法 適用于有熒光性質(zhì)的成分，例如小檗堿等。該法僅采用反射法測(cè)定，其靈敏度 比吸收法高。 5）測(cè)定波長(zhǎng) （1）單波長(zhǎng) 一般用于熒光測(cè)定法，即用某

7、一波長(zhǎng)的紫外光（激發(fā)光）進(jìn)行掃描。對(duì)玻板和斑點(diǎn)的質(zhì)量要求較高。 （2）雙波長(zhǎng) 主要用于吸收測(cè)定法。該法可消除背景干擾，對(duì)玻板和斑點(diǎn)的質(zhì)量要求不高，故較常用。測(cè)定時(shí)，樣品波長(zhǎng)（s）和參比波長(zhǎng)（R）依次掃描斑點(diǎn)，所測(cè)吸收度為A=A(s)A(R)。樣品波長(zhǎng)（s）：即被測(cè)成分的max 參比波長(zhǎng)（R）：即被測(cè)成分的min或此波長(zhǎng)處無(wú)吸收。6）光束掃描方式（1）直線掃描 適用于規(guī)則的斑點(diǎn)，僅用于熒光測(cè)定法。 （2）鋸齒掃描 適用于不規(guī)則的斑點(diǎn)，測(cè)量誤差小，被測(cè)成分積分值重現(xiàn)性好，故吸收測(cè)定法常用此掃描方式。7)光源 （1）鎢燈（W）：供可見(jiàn)光（350800nm）測(cè)定，掃描有色成分的斑點(diǎn)。 （2）氘燈（D2

8、）：供紫外光（200400nm）測(cè)定，掃描有紫外吸收成分的斑點(diǎn)。 （3）氙燈（Xe）：供熒光測(cè)定，發(fā)射不連續(xù)光譜，常用波長(zhǎng)為365nm。8)含量測(cè)定方法（外標(biāo)法）TLCS含量測(cè)定有外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法，中國(guó)藥典僅采用外標(biāo)法。 a)原理 外標(biāo)法系將一定量的供試品溶液和對(duì)照品溶液分別點(diǎn)加在同一塊薄層板上，展開(kāi)，顯色，定位，掃描被測(cè)成分和對(duì)照品斑點(diǎn)，測(cè)得相應(yīng)的吸收度或熒光強(qiáng)度積分值，根據(jù)定量關(guān)系，計(jì)算出被測(cè)成分的含量。 b)類(lèi)型 根據(jù)對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線性質(zhì)的不同，外標(biāo)法又分為外標(biāo)一點(diǎn)法和外標(biāo)兩點(diǎn)法。 若標(biāo)準(zhǔn)曲線通過(guò)原點(diǎn)，采用外標(biāo)一點(diǎn)法。 若標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過(guò)原點(diǎn)，采用外標(biāo)兩點(diǎn)法。 外標(biāo)一點(diǎn)法的直線方程：C = F

9、 A F為斜率 外標(biāo)兩點(diǎn)法的直線方程：C=F1A + F2 F1為斜率，F(xiàn)2為截距F1=(C2 C1)/(A2 - A1) F2=(A2C1 A1C2)/(A2 A1) 【說(shuō)明】在根據(jù)藥品標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定樣品時(shí)，并不需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定執(zhí)行即可。當(dāng)然，測(cè)試者應(yīng)能從中明確該測(cè)定是外標(biāo)一點(diǎn)法還是外標(biāo)兩點(diǎn)法。 c)操作步驟 （1）對(duì)照品溶液的制備 （2）供試品溶液的制備 （3）點(diǎn)樣 一般要求使用市售薄層板。 外標(biāo)一點(diǎn)法：至少6個(gè)原點(diǎn) 對(duì)照品（R）2個(gè)（同一質(zhì)量）：2R 供試品（S）4個(gè)（同一質(zhì)量）分2組：2S1 2S2外標(biāo)兩點(diǎn)法：至少8個(gè)原點(diǎn) 對(duì)照品（R）4個(gè) 分2組：大質(zhì)量的2個(gè)：2R1；小質(zhì)

10、量的2個(gè)：2R2 供試品（S）4個(gè)（同一質(zhì)量）分2組：2S1 2S2 對(duì)照品與供試品應(yīng)交叉點(diǎn)加在同一塊薄層板上，目的在于消除各種誤差。測(cè)定時(shí)應(yīng)保證供試品原點(diǎn)的量在線性范圍內(nèi)，必要時(shí)可適當(dāng)調(diào)整供試品溶液的點(diǎn)樣量。外標(biāo)一點(diǎn)法 外標(biāo)兩點(diǎn)法（4）展開(kāi) （5）顯色定位 供試品色譜中待測(cè)斑點(diǎn)的比移值（Rf值）和光譜掃描得到的吸收光譜最大吸收與最小吸收應(yīng)與對(duì)照品相符，以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。 （6）掃描 應(yīng)沿展開(kāi)方向掃描，不得橫向掃描。 （7）含量計(jì)算 外標(biāo)一點(diǎn)法 求出供試品被測(cè)成分（斑點(diǎn)）的質(zhì)量Ms = MRAs/ AR Ms被測(cè)成分的質(zhì)量（M拔 n=2） MR被測(cè)對(duì)照品的質(zhì)量 As被測(cè)成分吸收度（熒光強(qiáng)

11、度）積分值（A拔 n=2） AR被測(cè)對(duì)照品吸收度（熒光強(qiáng)度）積分值（A拔 n=2）求出供試品中被測(cè)成分的含量含量（W/W）= Ms 稀釋倍數(shù) / 取樣量 含量（W/片）= Ms 稀釋倍數(shù) 平均片重 / 取樣量 外標(biāo)兩點(diǎn)法 求出供試品斑點(diǎn)中被測(cè)成分的質(zhì)量Ms = (V2-V1) (A-A1) /(A2-A1) C + V1CMs 被測(cè)成分的質(zhì)量（mg拔 n=2） A1 對(duì)照品小點(diǎn)樣量吸收度（熒光強(qiáng)度） V1 對(duì)照品小點(diǎn)樣量（1） 積分值（A拔 n=2 ） V2 對(duì)照品大點(diǎn)樣量（1） A2對(duì)照品大點(diǎn)樣量吸收度（熒光強(qiáng)度）A 被測(cè)成分吸收度（熒光強(qiáng)度） 積分值（A拔 n=2） 積分值（A拔 n=2）

12、 C 對(duì)照液的濃度（mg/ml） 9)應(yīng)用實(shí)例 1.九分散中士的寧的含量測(cè)定 九分散是由馬錢(qián)子粉、麻黃、乳香和沒(méi)藥等制成。馬錢(qián)子粉中含有士的寧、番木鱉堿等生物堿，具生理活性但也有毒性，故需控制馬錢(qián)子含量。中國(guó)藥典規(guī)定按干燥品計(jì)每包含馬錢(qián)子以士的寧計(jì)應(yīng)為4.55.5mg。 供試品溶液的制備 取本品10包，混合研勻。精密稱取2g置具塞錐形瓶中，精密加氯仿20ml與濃氨試液1ml，輕輕搖勻，稱重，于室溫下放置24小時(shí)，再稱重，補(bǔ)足氯仿減失的重量，充分振搖，濾過(guò)。精密量取濾液10ml，用硫酸溶液（3300）分次提取，至生物堿提盡，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加濃氨試液使呈堿性，用氯仿分次提取，合并氯

13、仿液，蒸干，放冷，殘?jiān)芯芗勇确?ml使溶解，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備 取士的寧對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。 測(cè)定法 吸取上述兩種溶液各5l，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（161214）的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：s=254nm，R=325nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。已知：AR19663.07，As20617.25，取樣量2.098g。解答問(wèn)題：采用外標(biāo)一點(diǎn)法還是外標(biāo)兩點(diǎn)法？采用什么方法顯色定位？計(jì)算每包藥品中馬錢(qián)子的含量。（保留兩位有效數(shù)字）

14、求出供試品斑點(diǎn)中士的寧的質(zhì)量 Ms = MR As/AR = 5l 0.4 g/ l 20617.25/19663.07 = 2.1g求出供試品中士的寧的含量含量（mg/包）= Ms 稀釋倍數(shù) 標(biāo)示重量 / 取樣量= (0.0021mg 5ml 20ml 2.5g/包) /(0.005ml 10ml 2.098g )= 5.0（mg/包）2.枳實(shí)導(dǎo)滯丸中橙皮苷的含量測(cè)定本品系由枳實(shí)、大黃和黃連等八味藥材制成的水丸。中國(guó)藥典規(guī)定按干燥品計(jì)算，每1g含枳實(shí)以橙皮苷（C28H34O15）計(jì)，不得少于20.0mg。供試品溶液的制備 取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.5g，精密稱定（0.5124g），置索氏提

15、取器中，加甲醇90ml，加熱回流4小時(shí)，趁熱濾過(guò)至100ml量瓶中，用少量甲醇洗滌容器，洗液與濾液合并，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取5ml，置250ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。測(cè)定法 精密吸取供試品溶液5l、對(duì)照品溶液2l與5l，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距約3cm，取出，晾干，噴以1三氯化鋁的甲醇溶液，放置3小時(shí)，在紫外光燈(365nm)下定位。上機(jī)進(jìn)行熒光掃描，激發(fā)波長(zhǎng)：330nm ，線性掃描，測(cè)量供試品與對(duì)照品熒光強(qiáng)度的積分值A(chǔ)R(2l) =

16、885.7 AR (5l) = 979.4 As = 835.6，計(jì)算，即得。說(shuō)明：聚酰胺TLC分離黃酮類(lèi)成分效果較好故選之。 橙皮苷與AlCl3反應(yīng)顯色，在330nm紫外光下發(fā)射較強(qiáng)的綠色熒光（波長(zhǎng):500nm）?；卮饐?wèn)題：本法采用的是吸收測(cè)定法還是熒光測(cè)定法？外標(biāo)一點(diǎn)法還是外標(biāo)兩點(diǎn)法？透射法還是反射法？直線掃描還是鋸齒掃描？光源是什么？ 求算枳實(shí)（橙皮苷）的含量（保留三位有效數(shù)字），并判斷是否符合藥典規(guī)定 含量計(jì)算求算出斑點(diǎn)中橙皮苷的質(zhì)量Ms = (V2-V1) (A-A1) /(A2-A1) C + V1C=代入數(shù)據(jù)= 0.0198g.求算出枳實(shí)（橙皮苷）在藥品中的含量含量（mg/g）=

17、 Ms 稀釋倍數(shù) / 取樣量=代入數(shù)據(jù)= 38.6薄層掃描法測(cè)定荷葉中荷葉堿的含量CAMAG TLC SCANNER 3薄層掃描儀(瑞士CAMAG公司)；定量點(diǎn)樣毛細(xì)管(美國(guó)Drummond Scientific Co.)；荷葉堿(中國(guó)藥品生物制品檢定所)；硅膠GF254 (青島海洋化工有限公司) 薄層板：0.5 %氫氧化鈉溶液制備的硅膠GF254薄層板。 展開(kāi)劑：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(30402010)10以下放置12 h的下層溶液。 s = 272 nm。單波長(zhǎng)線性掃描。二、高效液相色譜在經(jīng)典液相柱色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種色譜方法 液相柱色譜法原理和氣相色譜理論相結(jié)合的產(chǎn)物 當(dāng)今色譜

18、技術(shù)中極具活力、發(fā)展迅速的分離分析技術(shù) 技術(shù)難度較大、不宜熟練掌握、極具 挑戰(zhàn)性的分離分析方法 達(dá)到基線分離的分離度 Rs：1.5一般分析要求的分離度 Rs 1.25分離度與實(shí)際分離程度之間的關(guān)系，與兩個(gè)峰的相對(duì)大小有關(guān)常用HPLC模式和儀器配置模式 色譜柱 泵 檢測(cè)器吸附 C18 一元 UV鍵合相 C8 二元 PDA離子交換 Phenyl 三元 FL 尺寸排阻 CN 四元 RI疏水作用 NH2 EC親和 SiO2 ELSD -SO3H MSDHPLC方法總結(jié)正相和反相鍵合色譜法正相鍵合色譜法固定相極性大硅膠-OH(或雙-OH),硅膠-CN流動(dòng)相極性小烴類(lèi)+適量極性溶劑(CHCl3，CH3OH

19、，CH3CN)分析對(duì)象多用于極性或中等極性化合物的分離。還可用于分離異構(gòu)體、極性不同的化合物以及不同類(lèi)型的化合物。反相鍵合色譜法固定相極性小如硅膠-C18,硅膠-苯基流動(dòng)相極性大甲醇-水、乙腈-水、水和無(wú)機(jī)鹽的緩沖液分析對(duì)象多用于多環(huán)芳烴(PAHs)等低極性化合物分離;改變流動(dòng)相配比,也可分離極性化合物;緩沖液可用于易離解的化合物，如有機(jī)有機(jī)酸、有機(jī)堿和酚類(lèi)。正、反相色譜中極性和保留時(shí)間的關(guān)系正相色譜 反相色譜低極性流動(dòng)相 高極性流動(dòng)相 中等極性流動(dòng)相 中等極性流動(dòng)相待測(cè)物極性：ABC 硅膠-烷基鍵合相中烷基鏈長(zhǎng)對(duì)反相色譜分離的影響1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；

20、6-甲苯 可見(jiàn)：反相鍵合色譜中，鍵合相碳鏈越長(zhǎng)，分離效果越好。色譜分離方法的選擇分子量水溶性方法流動(dòng)相2000可溶排阻色譜水不溶排阻色譜水2000不溶分配色譜(同系物)各種吸附色譜(異構(gòu)物)各種排阻色譜(分子大小)各種可溶但不解離反相液液色譜各種排阻色譜水可溶且不解離陽(yáng)離子交換色譜(堿)緩沖液陰離子交換色譜(酸)緩沖液可溶離子或非離子反相離子色譜緩沖液專(zhuān)業(yè)網(wǎng)站： 中國(guó)色譜網(wǎng) www.SeP 中國(guó)分析儀器網(wǎng) www.54PC.com1. 選擇色譜柱未鍵合硅膠顆粒表面 C18鍵合硅膠顆粒表面2. 開(kāi)機(jī)前準(zhǔn)備 配制試劑、流動(dòng)相 做好流動(dòng)相的超聲脫氣工作 確定洗脫方式輸液泵 進(jìn)樣器 色譜柱

21、柱溫箱 檢測(cè)器3. 啟動(dòng)程序 氣泡原因：氧氣 空氣危害：流速不穩(wěn)、基線起伏、尖銳噪音峰 脫氣：超聲波振蕩；惰性氣體鼓泡吹掃脫氣；真空脫氣。3.1 接通電源，脫氣或趕氣泡 3.2 用流動(dòng)相平衡色譜柱 3.3 開(kāi)啟檢測(cè)器 /常見(jiàn)檢測(cè)器原理 見(jiàn)藥物色譜分析4. 測(cè)定程序 編方法 編樣品表 運(yùn)行樣品表 進(jìn)樣 打印結(jié)果5. 結(jié)束程序 結(jié)束時(shí)先關(guān)閉檢測(cè)器燈 換用純化水清洗儀器0.5h，再用65%甲醇清洗0.5h，最后用HPLC級(jí)甲醇清洗0.5h將泵的流速調(diào)至0關(guān)機(jī)時(shí)，先退出色譜工作站，再關(guān)閉液相色譜儀電源，最后關(guān)閉計(jì)算機(jī)； 清洗進(jìn)樣器（微量注射器）；用甲醇清洗進(jìn)樣口 填寫(xiě)儀器使用記錄 出具報(bào)告注意事項(xiàng)：

22、所有進(jìn)入色譜柱的溶劑和樣品均需經(jīng)0.45m或更小孔徑微孔濾膜過(guò)濾。 不同型號(hào)儀器請(qǐng)參考操作手冊(cè)或經(jīng)培訓(xùn)后方可使用。 濾膜類(lèi)型：聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽，并無(wú)任何可溶物。 醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶液，推薦用于蛋白質(zhì)和其相關(guān)樣品。 尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可用于強(qiáng)酸，70%乙醇、二氯甲烷、不 適用于二甲基甲酰胺。 齊墩果酸的含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇水乙酸三乙胺 （88120.040.02 ）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)220nm理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在60

23、減壓干燥4小時(shí)的齊墩果酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml約含200g的溶液，即得。 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取細(xì)粉約150mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇約8ml，超聲處理20分鐘，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。 測(cè)定法 分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20l，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品每粒含女貞子以齊墩果酸（C30H48O3）計(jì)，不得少于2.0mg。HPLC 測(cè)定雙黃連口服液中綠原酸的含量 色譜條件：色譜柱用Hypersil ODS2 C18柱(4. 6 mm200mm ,5m)；流動(dòng)相為甲醇-0.4 %磷酸溶液(2476)；

24、檢測(cè)波長(zhǎng)327nm；檢測(cè)器靈敏度AUFS為0.02；柱溫30；流速1 mlmin-1。三、氣相色譜法 （Gas Chromatography GC）1、定義 以氣體為流動(dòng)相（亦稱載氣）的色譜分析法稱氣相色譜法。 2、特點(diǎn) 分離效能高、選擇性好、靈敏度高、分析速度快等。主要用于中藥制劑中揮發(fā)油及其他揮發(fā)性組分的含量測(cè)定，還可用于水分、乙醇量、甲醇量和農(nóng)藥殘留量的測(cè)定。但本法也存在一定局限性，它對(duì)揮發(fā)性差或遇熱易分解破壞的物質(zhì)難以分析。 3、分類(lèi) 1）按固定相狀態(tài)分類(lèi)：氣固GC、氣液GC 2）按分離原理分類(lèi)：吸附GC、分配GC 3）按色譜柱分類(lèi)：填充柱GC、毛細(xì)管柱GC，后者分辨率高（n10）常用

25、于農(nóng)殘分析。 4、色譜柱 固定液類(lèi)型極性例子分離對(duì)象烴類(lèi)非極性角鯊?fù)?、石蠟烷非極性物質(zhì)分離硅氧烷類(lèi)弱極性甲基硅氧烷、苯基硅不同極性物質(zhì)分離中極性氧烷、氟基硅氧烷強(qiáng)極性氰基硅氧烷醇和醚類(lèi)強(qiáng)極性聚乙二醇強(qiáng)極性物質(zhì)酯和聚酯類(lèi)中強(qiáng)極性苯甲酸二壬酯各類(lèi)物質(zhì)腈和腈醚類(lèi)強(qiáng)極性氧二丙腈極性物質(zhì)有機(jī)皂土弱極性芳香異構(gòu)體5、常用檢測(cè)器結(jié)構(gòu)及原理常用的幾種檢測(cè)器：1.熱導(dǎo)檢測(cè)器(Thermal conductivity detector, TCD); 2.氫火焰離子化檢測(cè)器(Flame ionized detector, FID); 3.電子捕獲檢測(cè)器(Electron capture detector, ECD)

26、; 4.火焰光度檢測(cè)器(Flame photometric detector, FPD); 5.氮磷檢測(cè)器（NPD）也稱熱離子檢測(cè)器(Thermionic detector,TID); 6.原子發(fā)射檢測(cè)器(Atomic emission Detector, AED);7.質(zhì)譜檢測(cè)器（Mass Detector, MSD）.6、開(kāi)/關(guān)機(jī)操作開(kāi)機(jī)操作 1.打開(kāi)GC載氣及支持氣，設(shè)置壓力在0.5MPa左右;2.打開(kāi)計(jì)算機(jī),進(jìn)入Windows操作系統(tǒng)； 3.打開(kāi)主機(jī),等待自檢完畢; 4.雙擊桌面上的online圖標(biāo),進(jìn)入化學(xué)工作站;5.在offline下不可以進(jìn)online。 關(guān)機(jī)操作 1.如使用FI

27、D、NPD、FPD檢測(cè)器，熄滅火焰；2.關(guān)閉檢測(cè)器、進(jìn)樣口、Aux等加熱區(qū); 3.退出工作站,關(guān)閉計(jì)算機(jī)（不保存方法）; 4.待溫度降至100度以下,關(guān)閉主機(jī)電源;5.關(guān)閉GC載氣及支持體。7、儀器參數(shù)編輯8、進(jìn)樣方式 分流 不分流 動(dòng)態(tài)頂空 9、信號(hào)采集過(guò)程調(diào)用方法/編輯一個(gè)新方法 指定數(shù)據(jù)文件路徑和樣品位置 ?等待儀器基線穩(wěn)定 FID、NPD、FPD需點(diǎn)火并穩(wěn)定基線，必要時(shí)調(diào)整基線位置 進(jìn)樣/StartKovats指數(shù)lx測(cè)定10、數(shù)據(jù)處理過(guò)程 調(diào)用標(biāo)樣數(shù)據(jù)優(yōu)化圖形優(yōu)化積分參數(shù)建立校正曲線設(shè)置報(bào)告模式將數(shù)據(jù)處理文 件存入方法調(diào)用樣品數(shù)據(jù)報(bào)告處理結(jié)果11、含量測(cè)定內(nèi)標(biāo)法 常用于藥物分析。 外

28、標(biāo)法 少用，因?yàn)镚C進(jìn)樣量小，造成的誤差較大。 1.色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) （1）色譜條件 主要包括載氣、色譜柱、檢測(cè)器、固定液（相）測(cè)試溫度、進(jìn)樣量、載體等。其中檢測(cè)器種類(lèi)、固定液品種、以及色譜柱的材質(zhì)不得改變，其它的如柱子的內(nèi)徑和長(zhǎng)度、 載體的種類(lèi)和粒度、固定液涂布的濃度、載氣的流速、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等可適當(dāng)改變，以適應(yīng)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。載氣：一般為N2，還可用H2（TCD）、He（很少用）。 色譜柱：玻璃柱和不銹鋼柱 檢測(cè)器氫火焰離子檢測(cè)器（FID)：適用于有機(jī)物，靈敏度高，應(yīng)用廣泛。 熱導(dǎo)檢測(cè)器（TCD)：無(wú)機(jī)物、有機(jī)物均可，靈敏度較低，用于水分測(cè)定。 電子捕獲檢測(cè)器

29、（ECD):適用于含鹵素、硫、氮等強(qiáng)電負(fù)性元素的化合物,主要用于農(nóng)殘測(cè)定。 柱填料 吸附劑：硅膠、氧化鋁等。較少用。 高分子多孔小球：常用二乙烯苯乙基乙烯苯型的。氣固吸附GC用于甲（乙）醇量、水分的測(cè)定。 涂漬固定液的載體（多用）：常用經(jīng)酸洗并硅烷化的硅藻土（紅色載體，白色載體） 氣液分配GC。 固定液 常用甲基聚硅氧烷（SE-30、OV-17等）、聚乙二醇（PEG-20等），一般涂布濃度為525。（2）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)（同HPLC）2.內(nèi)標(biāo)法（同乙醇量測(cè)定法） （1）標(biāo)準(zhǔn)液的制備 （2）供試液的制備 （3）校正因子（f）的測(cè)定 f為內(nèi)標(biāo)法特有的參數(shù)。 內(nèi)標(biāo)法測(cè)定時(shí)，檢測(cè)器對(duì)內(nèi)標(biāo)物和對(duì)照品（即被

30、測(cè)成分）具有不同的響應(yīng)值，故不能用峰面積直接計(jì)算的被測(cè)成分的含量，要引入校正因子。 校正因子（f）其含義為：內(nèi)標(biāo)物峰面積與其濃度之比（As/Cs）是對(duì)照品峰面積與其濃度之比（AR/CR）的多少倍。 選擇內(nèi)標(biāo)物的原則：應(yīng)是樣品中不存在的純物質(zhì)。加入量應(yīng)接近于被測(cè)成分。其色譜峰應(yīng)位于被測(cè)成分色譜峰附近且與之完全分離。（4）樣品的測(cè)定 12、實(shí)例1 十滴水軟膠囊中樟腦含量的測(cè)定本品由樟腦、干姜、大黃、小茴香、肉桂、辣椒、桉油等七味中藥制成，樟腦是其主成分之一，具升華性，故采用氣相色譜法，以樟腦為對(duì)照品，薄荷腦為內(nèi)標(biāo)物，對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。 1.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以聚乙二醇（PEG-20M）為固

31、定相，涂布濃度為10%，柱溫150。理論塔板數(shù)按樟腦峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，樟腦峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于2。 2.校正因子測(cè)定 精密稱取樟腦對(duì)照品（R）50mg，置10ml量瓶中，精密加入薄荷腦內(nèi)標(biāo)物(S)50mg，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，精密量取1 2l，注入氣相色譜儀，AR=、As=，計(jì)算校正因子。 3.測(cè)定法 取本品內(nèi)容物，混勻，取0.8g，精密稱定（0.7956g），置具塞試管中，用無(wú)水乙醇提取5次，每次4ml，分取乙醇提取液，合并，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，精密加入薄荷腦125mg，使溶解，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液(is)。精密量取12l，注入氣相色譜儀測(cè)定，Ai、

32、As，計(jì)算即得（保留兩位有效數(shù)字)。 解答問(wèn)題 本法屬于氣液分配GC還是氣固吸附GC？ 使用哪種載氣？哪種檢測(cè)器？采用的是外標(biāo)-校正因子法還是內(nèi)標(biāo)-校正因子法？求算樟腦的含量。藥典規(guī)定，本品每粒含樟腦不得少于53mg。（平均粒重0.425g粒） 求算校正因子（f）（保留四位有效數(shù)字) f =(As/Cs)/ (AR/CR) =(/5mg/ml)/ (/5mg/ml) =1.108 求算供試液中樟腦的濃度Ci（mg/ml） Ci= f Ai*Cs/As = 4.87 mg/ml求算藥品中樟腦的含量（mg粒） 含量 (4.87mg/ml 25ml 425mg/粒) / 795.6mg 65（mg粒

33、）實(shí)例2 用氣相色譜法同時(shí)測(cè)定石菖蒲揮發(fā)油中-細(xì)辛醚和-細(xì)辛醚的含量 色譜條件 HP-35 (二苯基-65%-二甲基硅氧烷共聚物)毛細(xì)管氣相色譜柱； 程序升溫：起始溫度為30, 6/ min升至220, 保持5min；進(jìn)樣口溫度：250；檢測(cè)器溫度：320； 進(jìn)樣量：2.0l；無(wú)分流進(jìn)樣； 溶劑：甲醇；載氣：氦氣；柱頭壓：5. 5104 Pa； 內(nèi)標(biāo)物：-萘酚。溶液制備 樣品溶液的制備 用水蒸汽蒸餾法提取石菖蒲中的揮發(fā)油，稱取適量，以-萘酚，以甲醇溶解，進(jìn)樣。 對(duì)照品溶液的制備 稱取-細(xì)辛醚、-細(xì)辛醚對(duì)照品適量，加0.2mg/ml -萘酚的甲醇溶液制成含-細(xì)辛醚0.1mg/ml的對(duì)照品溶液(1

34、)和含-細(xì)辛醚0.5mg/l的對(duì)照品溶液(2)。實(shí)例3 GC法測(cè)定冰片中龍腦的含量四、毛細(xì)管電泳 Capillary Electrophoresis分析目的CE模式定量分析(小分子,離子)毛細(xì)管區(qū)帶電泳 Capillary zone electrophoresis(CZE)膠束電動(dòng)色譜 Micellar electrokinetic chromatography(MEKC)毛細(xì)管電色譜 Capillary Electrochromatography(CEC)蛋白分子量毛細(xì)管凝膠電泳-SDS Capillary Gel Electrophoresis(CGE)DNA/RNA大小毛細(xì)管凝膠電泳 C

35、apillary Gel Electrophoresis(CGE)蛋白/肽等電點(diǎn)毛細(xì)管等電聚焦 Capillary Isoelectric Focussing(CIEF)電滲流 Electro-Osmotic Flow (EOF) EOF是空心熔融石英毛細(xì)管柱或涂布毛細(xì)管柱所固有的eof = ( 0 ) / (4 )緩沖鹽的介電常數(shù)緩沖鹽粘度常數(shù)與溫度成反比 zeta電勢(shì)與緩沖液濃度和成反比而與管壁的電荷數(shù)成正比毛細(xì)管區(qū)帶電泳 (CZE)：建立在電滲流基礎(chǔ)上的遷移EOF遷移率 and 表觀遷移率 + -高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定麥當(dāng)乳通顆粒劑中阿魏酸 對(duì)照品溶液（略）供試品溶液的配制 稱取麥當(dāng)乳通顆

36、粒劑2.0g于錐形瓶中，加入甲醇5 mL，超聲提取30 min離心，取上清液；殘?jiān)尤爰状?mL,超聲提取30min,合并上清液,適當(dāng)濃縮后加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL,用甲醇定容至10mL,作供試溶液。 電泳條件 在空心熔融石英分離毛細(xì)管柱(75m84 cm ,有效長(zhǎng)度為79.5 cm)上，以12.5 mmol/L (pH 8.20)的硼砂緩沖液為運(yùn)行緩沖液進(jìn)行電泳，運(yùn)行電壓為16kV，柱溫18，壓力進(jìn)樣6kPa3s，在200 nm波長(zhǎng)紫外檢測(cè)。在此條件下，得到了滿意的分離結(jié)果。五、揮發(fā)油測(cè)定法（Determination of Volatile Oil）1、意義 某些藥品中的主要有效成分為揮發(fā)油，

37、故中國(guó)藥典收載了揮發(fā)油測(cè)定法，采用水蒸氣蒸餾法對(duì)藥品中揮發(fā)油總量進(jìn)行測(cè)定，以控制藥品質(zhì)量。例如，正骨水、牡荊油膠丸、保婦康栓滿山紅油滴丸等中揮發(fā)油的測(cè)定。 2、測(cè)定原理 首先利用揮發(fā)油揮發(fā)性用水蒸氣蒸餾法將其提取完全；再利用其較強(qiáng)的親脂性與水不相溶而分層，即可讀取油的總量并求算出含量。 3、揮發(fā)油測(cè)定裝置 4、測(cè)定方法 供試品需粉碎后過(guò)二號(hào)至三號(hào)篩，混勻再測(cè)定。 1）甲法 本法適用于測(cè)定相對(duì)密度在1.0以下的揮發(fā)油。取供試品適量（約相當(dāng)于揮發(fā)油0.5ml1.0 ml），稱重（準(zhǔn)至0.01g），置燒瓶中，加水300ml500ml（或適量）與玻璃珠數(shù) 粒，振搖混合后，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管。

38、自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止。置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱至沸，并保持微沸約5小時(shí)，至測(cè)定器中油量不再增加，放置片刻，開(kāi)啟測(cè)定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面5mm處為止。放置1小時(shí)以上，再開(kāi)啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發(fā)油量，計(jì)算即得。2）乙法 本法適用于測(cè)定相對(duì)密度在1.0以上的揮發(fā)油。取水約300ml與玻璃珠數(shù)粒，置燒瓶中，連接揮發(fā)油測(cè)定器。自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，再用移液管加入二甲苯1ml，然后連接回流冷凝管。將燒瓶?jī)?nèi)容物加熱至沸，并繼續(xù)蒸餾，其速度以保持冷凝管的中部呈冷卻狀

39、態(tài)為度。30分鐘后，停止加熱，放置15分鐘以上，讀取二甲苯的容積。然后照甲法自“取供試品適量”起，依法測(cè)定，自油層中減去二甲苯量，即為揮發(fā)油量，計(jì)算即得。5、含量計(jì)算 含量（V/W）= V0 / Ws100% 含量（W/W）= V0 D0 / Ws100% 含量（V/V）= V0 / Vs100% V0揮發(fā)油體積（ml）;D0揮發(fā)油密度（g/ml）;Vs樣品體積（ml）;Ws樣品重量（g）.6、實(shí)例 1.正骨水中揮發(fā)油的含量測(cè)定 2.牡荊油膠丸揮發(fā)油的含量測(cè)定 3.石菖蒲揮發(fā)油的含量測(cè)定六、紫外-可見(jiàn)分光光度法（Ultraviolet and Visible Spectrophotometry

40、） 定義 根據(jù)被測(cè)物質(zhì)在紫外-可見(jiàn)光的特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸光度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析的方法稱紫外-可見(jiàn)分光光法。 特點(diǎn) 本法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，常用于中成藥含測(cè)。但本法不具分離功能，常用于總成分的測(cè)定。定量分析的理論基礎(chǔ) 朗伯比爾定律 A = K C LA為吸收度，K為吸收系數(shù)，C為溶液濃度，L為溶液厚度 藥典收載了三種測(cè)定方法 1.吸收系數(shù)法 僅用于UV，不需對(duì)照品。 2.對(duì)照品比較法 主要用于Vis，需用對(duì)照品。 3.標(biāo)準(zhǔn)曲線法 主要用于Vis，需用對(duì)照品。（原計(jì)算分光光度法取消）1、吸收系數(shù)法 1）原理 A = E1cm C L C = A /（E1cm L） C為供試液濃

41、度（g/100ml），A為供試液測(cè)得的吸收度，E為被測(cè)物質(zhì)的百分吸收系數(shù)（藥典給出），L為比色皿（液層）厚度（1cm）將求得的C值（供試液濃度）、樣品溶液的稀釋倍數(shù)和取樣量或平均片（丸）重代入公式計(jì)算，即可求出藥品中被測(cè)成分的含量。 2）特點(diǎn) 不需對(duì)照品隨行測(cè)定，操作簡(jiǎn)便，僅用于紫外分光光度法。故需嚴(yán)格校正儀器，規(guī)范實(shí)驗(yàn)條件，做好前處理工作。3）實(shí)例 （1）前列舒丸（水蜜丸）中牡丹皮的含量測(cè)定 取本品切碎，取2g，精密稱定（2.135g）；用水蒸氣蒸餾，收集餾出液約450ml，置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，照分光光度法（附錄 A）在274nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度（A=0.333），按丹皮

42、酚（C9H10O3）吸收系數(shù)（）為862 計(jì)算，即得。本品含牡丹皮按丹皮酚(C 9 H 10 O 3 ) 計(jì)，每 1g不得少于0.53mg (1) 供試液濃度的計(jì)算 C供（g/100 ml）A / E L =0.（(2）牡丹皮含量計(jì)算 含量（mg/g） C供（g/100ml）500ml1000 / 100 m供（g）0.90（2）駐車(chē)丸（水丸）中總生物堿的含量測(cè)定 本品由黃連、炮姜、當(dāng)歸、阿膠等四味中藥制成。取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）2g，精密稱定，置索氏提取器中，加鹽酸甲醇(1:100)的混合溶液適量，加熱回流至回流提取液無(wú)色時(shí)為止，將提取液（必要時(shí)濃縮）移至50ml量瓶中，加鹽酸甲醇(1:10

43、0)的混合溶液至刻度，搖勻。照柱色譜法（附錄 C）試驗(yàn)，精密量取5ml，置中性氧化鋁柱（5g，內(nèi)徑0.9cm,濕法裝柱，用乙醇30ml預(yù)洗）上，用乙醇25ml分次洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取2ml置50ml量瓶中，加0.05molL硫酸溶液至刻度，搖勻，照分光光度法（附錄 A），在345nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按鹽酸小檗堿(C20H17NO4HCl)的吸收系數(shù)（）為728計(jì)算，即得。本品按干燥品計(jì)算，每1g含總生物堿以鹽酸小檗堿(C20H17NO4HCl)計(jì)，不得少于 30.0mg。 2、對(duì)照品比較法 1）原理 在相同條件下分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，在

44、規(guī)定波長(zhǎng)處測(cè)定試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度后，按下式計(jì)算供試品溶液的濃度：C供(g/ml) =（A供/A對(duì)）C對(duì) 計(jì)算公式的推導(dǎo)：因?yàn)?供試品=對(duì)照品 所以 E供 = E對(duì) A供 / C供 =A對(duì) / C對(duì)A供 / A對(duì) =C供 / C對(duì) 供試品的含量（%）=（C供 D供 V樣 )/ W供 100% 式中，C對(duì)為供試品溶液濃度；D供為供試品溶液的稀釋倍數(shù)；W供為供試品取樣量；V樣為樣品溶液（未經(jīng)稀釋的供試品溶液）的體積。2）特點(diǎn) 對(duì)照品溶液與供試品溶液的濃度應(yīng)盡可能接近，一般要求對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分標(biāo)示量的100%10%。3）應(yīng)用實(shí)例中國(guó)藥典華山參片中總生物堿,

45、黃楊寧片中黃楊寧的含量測(cè)定等均采用本法。 黃楊寧片中黃楊寧的含量測(cè)定 本品為黃楊寧經(jīng)加工制成的片劑。每片含環(huán)維黃楊星D0.5mg或1mg。 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)105干燥至恒重的環(huán)維黃楊星D對(duì)照品25mg，置250ml量瓶中，加甲醇70ml使溶解，用0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml含環(huán)維黃楊星D10g）。供試品溶液的制備 取本品20片（每片含環(huán)維黃楊星D0.5mg），精密稱定（2.050g），研細(xì)，精密稱取0.1020g（約相當(dāng)于黃楊0.5mg），置50ml量瓶

46、中，加0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液至近刻度，80水浴恒溫1.5小時(shí)后取出，冷卻至室溫，加0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液至刻度，搖勻，離心6分鐘（每分鐘轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)），取上清液，即得。 測(cè)定法 精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5ml，分別置分液漏斗中，各精密加入溴麝香草酚藍(lán)溶液（取溴麝香草酚藍(lán)18mg，置250ml量瓶中，加甲醇5ml使溶解，加0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液至刻度，搖勻，即得）5ml，搖勻，立即分別精密加入氯仿10ml，振搖2分鐘，靜置1.5小時(shí)，分取氯仿層，置含0.5g無(wú)水硫酸鈉的具塞試管中，振搖，靜置，取上清液，照分光光度法（附錄 A），在410nm的波長(zhǎng)處分

47、別測(cè)定吸收度（A對(duì) 0.454,A供0.445），計(jì)算，即得。 本品每片含黃楊寧以環(huán)維黃楊星D(C26H46N2O)計(jì)，應(yīng)為標(biāo)示量90.0%110.0?！咀ⅰ凯h(huán)維黃楊星D無(wú)紫外吸收，故本法采用酸性染料比色法 （1）求算供試液的濃度 C供（g/ml）=（A供 /A對(duì) ）*C 對(duì) = 9.8 （2）求算供試品的含量（標(biāo)示量 ） 含量= C供（mg/ml）10-3 50ml 平均片重（mg）/ 取樣量（mg） 標(biāo)示量（mg） 100% = 96.53、標(biāo)準(zhǔn)曲線法 1）原理 配制一系列不同濃度（Ci）的對(duì)照品溶液（57份），在相同條件下分別測(cè)其吸收度(Ai)，以A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)繪制A-C曲線

48、，即得標(biāo)準(zhǔn)曲線（又稱工作曲線）。在相同條件下測(cè)定供試品的A, 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出與之對(duì)應(yīng)的C，即可求出濃度和含量。亦可將一系列對(duì)照品溶液的C與相應(yīng)的A進(jìn)行一元線性回歸，求出回歸方程（相關(guān)系 r0.999），將供試品溶液的A代入回歸方程，算出被測(cè)成分的濃度和含量。 標(biāo)準(zhǔn)曲線：A = a + b C. 2）特點(diǎn) 本法多用于可見(jiàn)分光光度法，由于影響顯色反應(yīng)的因素多，有的儀器單色光純度較差，故測(cè)定時(shí)應(yīng)用對(duì)照品同時(shí)操作。本法適用于批量樣品的分析，當(dāng)儀器和測(cè)定條件固定時(shí)，曲線可多次使用。 3）應(yīng)用 主要用于總成分的測(cè)定。例如中國(guó)藥典復(fù)方皂礬丸中的硫酸亞鐵，獨(dú)一味膠囊、益心酮片、消咳喘糖漿和排石顆粒中的總黃酮

49、、桂林西瓜霜中的總生物堿的含量測(cè)定。益心酮片總黃酮的含量測(cè)定 本品為山楂葉經(jīng)提取總黃酮制成的片劑。 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)120干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品25mg置50ml量瓶中，加乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取20ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml含無(wú)水蘆丁0.20mg）。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml、6.0 ml，分別置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，使混勻，放置6分鐘。加10%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6 分鐘，加氫氧化鈉試液

50、10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘；以相應(yīng)的溶液為空白。照分光光度法（中國(guó)藥典附錄V B），在500nm為波長(zhǎng)處測(cè)定吸度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 測(cè)定法 取本品20片，除去包衣，精密稱定0.2100g，研成細(xì)粉，精密稱取0.5315g（約相當(dāng)于5片的重量），精密加入稀乙醇25ml，密塞，搖勻，超聲處理5分鐘，靜置3小時(shí)以上，濾過(guò)，精密量取濾液4ml，置50ml量瓶中，用水稀釋到刻度，搖勻，再精密量取2ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線置備項(xiàng)下的方法，自“加水至6ml”起，依法測(cè)定吸收度，A=0.3620，并取同樣量的供試品溶液，加水至25ml作空白。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上

51、讀出供試品溶液中蘆丁的重量，計(jì)算每片總黃酮含量（以無(wú)水蘆丁計(jì)）。中國(guó)藥典規(guī)定本品每片含黃酮以無(wú)水蘆?。–27H30O16）計(jì)，不得少于25.0mg。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 A0.0004510.8696C (r0.9998) C 0.092A 0. 計(jì)算供試溶液濃度 C（mg/ml）0.092 0.3620 0. 0.03335計(jì)算每片總黃酮含量 含量(mg/片) = (C25ml50ml25ml0.105g/片) / (2ml4ml0.5315g) = 25.7七、浸出物測(cè)定法 （Determination of Extractive） 定義 浸出物測(cè)定法系根據(jù)制劑中化學(xué)成分的溶解性，選擇適當(dāng)?shù)娜軇?/p>

52、浸提(提取)樣品，并測(cè)定浸出物（提取物）的含量，以此來(lái)控制藥品的質(zhì)量。意義 這是一種較為粗略的定量分析方法。但對(duì)于有效成分不明確或無(wú)法建立確切的定量分析方法的中藥材及其制劑，尚具有一定的意義。 中國(guó)藥典附錄收載了三種測(cè)定方法：水溶性浸出物測(cè)定法、醇溶性浸出物測(cè)定法和揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定法。有的品種還采用了乙酸乙酯浸出物測(cè)定法。供試品需粉碎，使能通過(guò)二號(hào)篩，并混合均勻。1、水溶性浸出物測(cè)定法 本法系以水為溶劑，對(duì)制劑中水溶性成分進(jìn)行提取，并計(jì)算其在制劑中的含量(%)。本法包括冷浸法和熱浸法。后者適用于不含或少含淀粉、粘液質(zhì)等成分的樣品且中成藥較少用。 1）冷浸法 取供試品約4g，稱定重量，置250

53、300ml的錐形瓶中，精密加入水100ml，塞緊，冷浸，前6小時(shí)內(nèi)時(shí)時(shí)振搖，再靜置18小時(shí)，用干燥濾器迅速濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取濾液20ml，置己干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴蒸干后，于105干燥3小時(shí)，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量（W/W %）。含量（W/W %）= (m i100mL) / (20mLm s) 100%m i為水溶性浸出物重量（g）m s為干燥供試品的重量（g）= 供試品重量 （1含水量%）2、醇溶性浸出物測(cè)定法 本法系以甲醇、乙醇或正丁醇為溶劑，提取藥品中相應(yīng)的醇溶性成分，并計(jì)算其含量（%）。正丁醇浸

54、出物測(cè)定法主要用于含較多皂苷類(lèi)成分的制劑，專(zhuān)屬性較強(qiáng)。 1）甲醇、乙醇浸出物的測(cè)定 照水溶性浸出物測(cè)定法測(cè)定。 2）正丁醇浸出物的測(cè)定 按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法測(cè)定。一般說(shuō)來(lái)，水溶液制劑可直接用水飽和的正丁醇提取數(shù)次，合并提取液，置已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，蒸干，置105干燥3小時(shí)，移置干燥皿中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，計(jì)算供試品中正丁醇浸出物的含量（W/V %）。固體制劑可先加水溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取數(shù)次，合并提取液，照上述方法蒸干，干燥，稱定浸出物重量，計(jì)算出制劑中正丁醇浸出物的含量（W/W%）。 3）實(shí)例 （1）兒康寧糖漿正丁醇浸出物的測(cè)定 （2）刺五加浸膏的甲醇浸出物測(cè)定3、揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定法 本法以乙醚為溶劑，對(duì)制劑中揮發(fā)性醚溶性成分進(jìn)行提取，并計(jì)算其在制劑中的含量（W/W %）