1、名校名 推薦第二節(jié)分離特定的微生物并測(cè)定其數(shù)量1認(rèn)識(shí)各種微生物形成的菌落特征。2學(xué)會(huì)利用涂布平板法分離、培養(yǎng)微生物，并測(cè)定其數(shù)量。( 重難點(diǎn) )3掌握利用選擇培養(yǎng)基分離特定微生物的方法。( 重點(diǎn) )微 生 物 的 分 離1分離原理在實(shí)驗(yàn)室中利用選擇培養(yǎng)基可以篩選和分離出某種微生物，然后在高度稀釋的條件下，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)該微生物形成的單個(gè)菌落，即為純培養(yǎng)物。2分離方法(1) 平板分離法：包括涂布平板法和混合平板法。能將單個(gè)微生物分離和固定在固體培養(yǎng)基表面或里面，每個(gè)孤立的活微生物體經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)、繁殖均可形成單個(gè)菌落。(2) 選擇培養(yǎng)分離：科學(xué)家針對(duì)某種微生物的特性，設(shè)計(jì)一個(gè)特定的環(huán)境，使之特別適

2、合這種微生物的生長(zhǎng)， 而抑制其他微生物的生長(zhǎng)。 這種通過(guò)選擇培養(yǎng)進(jìn)行微生物純培養(yǎng)分離的技術(shù)，稱為選擇培養(yǎng)分離。(3) 根據(jù)菌落特征初步分離：菌落的含義： 是指單個(gè)微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)、繁殖到一定程度，形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長(zhǎng)群體。菌落特征： 不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的菌落一般都具有穩(wěn)定的特征，如菌落的大小、形狀、邊緣特征、隆起程度、顏色等，這些可以成為對(duì)微生物進(jìn)行分類、鑒定的重要依據(jù)。 合作探討 探討 1：在瓊脂固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的單個(gè)菌落含有多種細(xì)菌嗎？提示： 標(biāo)準(zhǔn)的單個(gè)菌落中只含有一種細(xì)菌。探討 2：如果要分離厭氧菌，應(yīng)在什么條件下培養(yǎng)？提示： 在

3、無(wú)氧條件下培養(yǎng)。探討 3：在選擇培養(yǎng)分離微生物的過(guò)程中，“選擇培養(yǎng)”的培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分屬于什么培養(yǎng)基？為什么？1名校名 推薦提示： 固體培養(yǎng)基。便于選擇、分離所需要的微生物。 思維升華 1涂布平板法與混合平板法的比較比較操作特點(diǎn)結(jié)果取一定稀釋度的樣品涂涂布布平板先制作瓊脂平板后加入細(xì)菌菌落通常僅在平板平板法菌液表面生長(zhǎng)用無(wú)菌玻璃刮鏟將樣品涂布均勻取一定稀釋度的樣品與混合熔化的瓊脂混合菌液與瓊脂混合，共同細(xì)菌菌落出現(xiàn)在平板表平板法倒平板面及內(nèi)部將與樣品混合后的瓊脂倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿2. 選擇培養(yǎng)基的選擇作用(1) 原理：根據(jù)不同微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性不同而制備培養(yǎng)基。(

4、2) 方法：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。 例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌； 加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。改變培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分。例如， 缺乏氮源時(shí)可以分離固氮微生物；石油作為唯一碳源時(shí)，可以分離出能消除石油污染的微生物；用含無(wú)機(jī)碳源的培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物。改變微生物的培養(yǎng)條件。 例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物；用普通培養(yǎng)基在無(wú)氧條件下分離厭氧型和兼性厭氧型微生物。1微生物的接種方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，關(guān)于兩者的區(qū)別下列說(shuō)法正確的是 ()比較方面平板劃線法稀釋涂布平板法需在無(wú)菌條不需無(wú)菌操作件下操作培養(yǎng)基中培養(yǎng)基中加有瓊脂不加瓊脂2

5、名校名 推薦不可計(jì)算菌液可計(jì)算菌液中的活菌數(shù)中的活菌數(shù)需要接種環(huán)需要玻璃刮鏟a. 、b、c、d、【解析】平板劃線法和稀釋涂布平板法都需要進(jìn)行無(wú)菌操作，避免雜菌污染； 平板劃線法和稀釋涂布平板法都使用固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中都加有瓊脂； 平板劃線法采用接種環(huán)或接種針進(jìn)行接種， 而稀釋涂布平板法采用玻璃刮鏟進(jìn)行接種；稀釋涂布平板法可計(jì)算菌液中的活菌數(shù)，平板劃線法不能計(jì)算出菌液中的活菌數(shù)?！敬鸢浮縝2下面是本課題將用到的培養(yǎng)基配方，請(qǐng)根據(jù)下表回答下面的問題：【導(dǎo)學(xué)號(hào)： 67850009】編號(hào)成分含量khpo1.4 g24na2hpo42.1 gmgso47h2o0.2 g葡萄糖10.0 g尿素1.0 g

6、瓊脂15.0 g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 ml(1) 在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物提供碳源的是_，提供氮源的是 _。(2) 絕大多數(shù)微生物都能利用_ ，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解_。(3) 分析該培養(yǎng)基的配方，該培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？【解析】 碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。 絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖， 但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這種培養(yǎng)基對(duì)微生物有選擇作用。 選擇的原則是只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)?！敬鸢浮?1) 葡萄糖尿素(2) 葡萄糖尿素(3)

7、 具有。以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以分離到產(chǎn)生脲酶的微生物( 即分解尿素的微生物 ) 。3名校名 推薦土 壤 微 生 物 的 分 離 、 培 養(yǎng) 與 數(shù) 量 測(cè) 定1涂布平板法培養(yǎng)和計(jì)數(shù)土壤微生物(1) 過(guò)程：(2) 計(jì)數(shù)：每克土壤樣品的細(xì)菌數(shù)某一稀釋度幾次重復(fù)培養(yǎng)后的菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù) ( 涂布所用稀釋液為 1 ml)2顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(1) 原理：利用血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。(2) 血球計(jì)數(shù)板：血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片。其上有特定面積為21 mm、高為 0.1mm的計(jì)數(shù)室， 一個(gè)計(jì)數(shù)室又被分成25 個(gè) ( 或 16 個(gè) ) 中方格，每個(gè)中方格再被劃分成1

8、6 個(gè)( 或25 個(gè) ) 小方格，每個(gè)計(jì)數(shù)室都由400 個(gè)小方格組成。(3) 操作過(guò)程：將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，用無(wú)菌的毛細(xì)滴管吸取搖勻的土壤微生物懸液，在蓋玻片的邊緣滴一小滴，讓菌液沿著縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室。加樣后靜止5 min ，然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)45 個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按計(jì)算公式求出每毫升樣品中所含的菌體總數(shù)。(4) 計(jì)算公式： 1 ml 懸液所含菌體總數(shù)每小格平均菌體數(shù) 40010 4稀釋倍數(shù)。3分離土壤中能分解纖維素的微生物(1) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模悍蛛x以纖維素為唯一碳源的微生物。(2) 培養(yǎng)基配方特點(diǎn)：纖維素是唯一的碳源。(3) 基本

9、步驟：制備培養(yǎng)基制備土壤懸液 接種培養(yǎng) 觀察。 合作探討 探討 1：你認(rèn)為涂布平板法計(jì)數(shù)的菌落數(shù)與實(shí)際活菌數(shù)之間存在什么樣的關(guān)系？提示： 實(shí)際活菌數(shù)大于計(jì)數(shù)的菌落數(shù)目。原因是有的菌落不只由一個(gè)細(xì)菌生長(zhǎng)而成。探討 2：常見的菌數(shù)計(jì)數(shù)的方法有哪些？它們所利用的原理分別是什么？提示： (1) 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。其原理：利用特定的血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。4名校名 推薦(2) 間接計(jì)數(shù)法 ( 活菌計(jì)數(shù)法 ) 。其原理： 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。 思維升華 1直

10、接計(jì)數(shù)法與間接計(jì)數(shù)法的比較微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定有計(jì)數(shù)法、重量法、 生理指標(biāo)法等， 但是一般使用計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)法可分為直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。二者比較如下：項(xiàng)目直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板培養(yǎng)基計(jì)數(shù)菌株本身培養(yǎng)基上菌落數(shù)依據(jù)優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)的是活菌缺點(diǎn)死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)操作較復(fù)雜，且有一定誤差計(jì)算每毫升原液含菌株數(shù)每毫升原液含菌株數(shù)培養(yǎng)40010 4每小格平均菌基上平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)公式株數(shù)稀釋倍數(shù)( 涂布所用稀釋液為 1 ml)2. 篩選能分解纖維素的微生物流程圖1某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106 的培養(yǎng)基上測(cè)得平板上的菌落數(shù)的平均值為215，那么每毫升樣品中菌落數(shù)是( 涂布

11、平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1 ml)()a2.15 10 8b2.15 10 9c 215d 21.5【解析】 稀釋倍數(shù)為 106, 0.1 ml稀釋液的菌落數(shù)的平均值為 215，則每毫升樣品中菌落數(shù)就為 2150.1 10 62.15 10 9?！敬鸢浮縝2(2016 四川高考) 圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過(guò)程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的5名校名 推薦mrna部分序列。(1) 中 培養(yǎng)基 以 _ 唯一氮源； 培養(yǎng)基 需添加 _作指示 ， 菌在 培養(yǎng)基上生 一段 后，其菌落周 的指示 將 成_色。(2) 在 5個(gè) 菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀 倍數(shù) 105 的土壤 品溶液 0.1 ml ，培養(yǎng)一段

12、 后，平板上 出的 菌菌落數(shù)分 13、 156、 462、 178 和 191。 程采取的接種方法是_，每克土壤 品中的 菌數(shù)量 _10 8 個(gè)；與血 胞 數(shù)板 數(shù)法相比，此 數(shù)方法 得的 菌數(shù) _。(3) 有一菌株的 由于基因突 而失活，突 后基因 的mrna在 乙箭 所示位置增加了 70 個(gè)核苷酸，使 乙序列中出 止密 ( 止密 有uag、uga和 uaa)。突 基因 的 mrna中， 止密 _，突 基因表達(dá)的蛋白含_個(gè)氨基酸?！窘馕觥?1) 能 催化尿素水解 放出氨和二氧化碳，因此 培養(yǎng)基中 以尿素 唯一氮源。 挑取 菌落接種到加有酚 指示 的 培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段 后， 菌落周 的氨增加

13、， ph 升高，酚 指示 將 。(2) 程采取的接種方法 稀 涂布平板法。利用稀 涂布平板 數(shù)法 菌 行 數(shù) ， 菌落數(shù)在 30 300 的平板，因此平板上 出的 菌菌落平均數(shù) (156 178191) 3 175 個(gè)。每克土壤 品中的 菌數(shù) 1750.1 10 51.75 10 8。血 胞 數(shù)板 數(shù)法能將死 胞 算在內(nèi)，而稀 涂布平板 數(shù)法只能 數(shù)活 胞( 只有活 胞才能在平板上生 ) ，故一般血 胞 數(shù)板 數(shù)法要比稀 涂布平板 數(shù)法的 果大。(3) 箭 插入70 個(gè)核苷酸，箭 后密 子的解 方式 *ag，uga，gaa 比3 種 止密 可 ，此 的 止密 uga。從起始密 到 止密 之前共

14、有 273 72 個(gè)堿基，因此突 基因表達(dá)的蛋白含115 個(gè)氨基酸?！敬鸢浮?1) 尿素酚 紅(2) 稀 涂布平板法1.75少(3)uga1151下列關(guān)于微生物分離和培養(yǎng)的有關(guān)敘述， 的是()a微生物培養(yǎng)前，需 培養(yǎng)基 行消毒b 定土壤 品中的 菌數(shù)目，常用菌落 數(shù)法c分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀 度6名校名 推薦d分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源【解析】微生物培養(yǎng)前，需對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，而不是消毒；測(cè)定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目， 常用菌落計(jì)數(shù)法而一般不用活菌計(jì)數(shù)法；分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀釋度以便能從中選擇出菌落數(shù)在30 300 間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；分離

15、能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源?！敬鸢浮縜2分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，對(duì)培養(yǎng)基的要求是()【導(dǎo)學(xué)號(hào)： 67850010】加尿素不加尿素加瓊脂不加瓊脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸鹽不加硝酸鹽abcd【解析】要分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)基中尿素應(yīng)是唯一的氮源，不能加硝酸鹽；在固體培養(yǎng)基上形成菌落，要加瓊脂作凝固劑；分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，要加有機(jī)碳源 ( 如葡萄糖 ) ?！敬鸢浮縞3用涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí)，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測(cè)出樣品中的活菌數(shù)，原因是()a平板上的一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌b菌落中的細(xì)菌數(shù)是固定的c此時(shí)的一個(gè)菌落一般來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌d

16、此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)一定與活菌的實(shí)際數(shù)相同【解析】當(dāng)稀釋倍數(shù)適宜時(shí)，培養(yǎng)基上的一個(gè)菌落可能來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，但也可能由2 個(gè)或 2 個(gè)以上活菌生長(zhǎng)而成，因此菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)低?！敬鸢浮縞4空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下：配制培養(yǎng)基( 成分：牛肉膏、蛋白胨、nacl、 x、 h2o)；制作無(wú)菌平板；設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；將各組平板置于37 恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。回答下列問題：(1) 該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于_

17、。若要完成步驟，該培養(yǎng)基中的成分x 通常是 _。7名校名 推薦(2) 步驟中，實(shí)驗(yàn)組的操作是_ 。(3) 若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36 個(gè) / 平板，而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6 個(gè)菌落，這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了_現(xiàn)象。若將30( 即36 6) 個(gè) / 平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法_( 填“正確”或“不正確”) ?！窘馕觥?1) 牛肉膏和蛋白胨中均含有氮元素，因此微生物所需的氮來(lái)源于牛肉膏和蛋白胨。若要完成步驟，需要進(jìn)行倒平板操作，用到的是固體培養(yǎng)基，所以培養(yǎng)基中要有瓊脂。 (2) 該實(shí)驗(yàn)的空白對(duì)照組為不進(jìn)行處理的無(wú)菌平板，實(shí)驗(yàn)組的操作為將各無(wú)菌平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露相同時(shí)間。(3) 若空白對(duì)照組的平板上出現(xiàn)了菌落，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象?？瞻讓?duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6 個(gè)菌落， 導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)變量不唯一，不能確定實(shí)驗(yàn)組平板上的菌落是否僅由教室內(nèi)不同高度空氣中的微生物形成，因此不能求出實(shí)驗(yàn)組的菌落平均數(shù)?！敬鸢浮?1) 牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2) 將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時(shí)間(3) 污染 不正確課堂小結(jié)：網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建核心回扣1. 實(shí)驗(yàn)室中分離微生物的方法有平板分離法和選擇培養(yǎng)分離，平板分離法常用的有涂布平板法和混合