1、2005-3-212020/9/24,Slide 1,HPLC 1100 ChemStation高級操作培訓,授課教師 紀學海,2020年9月24日,2005-3-212020/9/24,Slide 2,HPLC 1100 Advance操作培訓日程安排,第一天 上午： 1 課程簡介及相互介紹 2 化學工作站各個工作界面介紹 3 完整方法的編輯、修改、存儲及運行 4 HPLC 1100 儀器配置及參數(shù)設置 下午：1 數(shù)據(jù)分析參數(shù)設置 2 色譜圖的優(yōu)化處理 3 積分事件及手動積分的選擇和應用 4 高級校正表的編輯和設置 第二天 上午：1 報告格式的選擇及設定 2 光譜的提取、光譜庫的建立及檢索

2、3 色譜峰純度檢測 4 色譜條件的優(yōu)化及色譜圖的提取下午：1 序列參數(shù)的設置以及統(tǒng)計功能的使用 2 批處理功能的設置及應用,2005-3-212020/9/24,Slide 3,第三天 上午：1 個性化報告的設定與編輯 2 工作站故障診斷功能的應用 3 結(jié)業(yè)考試 結(jié)業(yè)午餐 下午：1 化學工作站的重新安裝、配置及啟動(選修) 2 發(fā)結(jié)業(yè)證 3 自由練習、討論,2005-3-212020/9/24,Slide 4,第一章 化學工作站各個工作界面介紹,2005-3-212020/9/24,Slide 5,化學工作站各個工作界面的切換,切換工作界面,2005-3-212020/9/24,Slide 6

3、,化學工作站Views菜單,2005-3-212020/9/24,Slide 7,化學工作站的Change Access Level功能,2005-3-212020/9/24,Slide 8,化學工作站Scheduler的使用,2005-3-212020/9/24,Slide 9,化學工作站Scheduler的使用,2005-3-212020/9/24,Slide 10,選擇在線信號,從 View菜單, 選擇 Online Signals, 單擊 Change，在Edit Signal Plot窗口中選擇要監(jiān)控的信號。,2005-3-212020/9/24,Slide 11,在線信號顯示,20

4、05-3-212020/9/24,Slide 12,查看Logbook,從View菜單選擇Logbook，單擊Current Logbook顯示當前Logbook內(nèi)容。,2005-3-212020/9/24,Slide 13,方法的概念：方法是一個參數(shù)集，它包括分析一個樣品所需要 的所有參數(shù)。 方法文件名：xxx.m。 方法的組成： 方法信息(Method information) 儀器參數(shù)及采集參數(shù)(Instrument/Acquisition) 數(shù)據(jù)分析參數(shù)(Data Analysis) 運行時間表(Run Time Checklist),第二章 方法編輯、保存,2005-3-212020

5、/9/24,Slide 14,使用 Edit Entire Method 編輯一個完整的方法,編輯一個完整的方法,單擊圖標，也可以開始編輯一個完整的方法。,2005-3-212020/9/24,Slide 15,選擇所要編輯的內(nèi)容,2005-3-212020/9/24,Slide 16,方法信息 (Method Information),2005-3-212020/9/24,Slide 17,包括：流量(Flow)，流動相組成(Solvents)，停止采集時間(Stop Time)，后運行時間(Post Time)，梯度編程(Timetable)，壓力限制設定(Pressure Limits)

6、等,泵的操作參數(shù),2005-3-212020/9/24,Slide 18,標準自動進樣器參數(shù),2005-3-212020/9/24,Slide 19,標準進樣過程原理示意圖,準備位置,抓取樣品瓶 吸取樣品,進樣和運行位置,2005-3-212020/9/24,Slide 20,標準自動進樣器的程序進樣,2005-3-212020/9/24,Slide 21,Wellplate自動進樣器參數(shù),2005-3-212020/9/24,Slide 22,控溫范圍：低于室溫1080 兩個單獨的加熱區(qū) 安裝切換閥可以進行柱切換 可以容納30 cm長色譜柱 安裝柱識別可以自動記錄進樣次數(shù),柱溫箱參數(shù)設置,2

7、005-3-212020/9/24,Slide 23,可以選擇存儲 5 個信號 信號波長范圍 191 - 949 nm 可變狹縫： 1, 2, 4, 8, 16 nm 可以時間編程 可以保存數(shù)張或所有光譜,DAD檢測器參數(shù)設置,2005-3-212020/9/24,Slide 24,DAD參數(shù)優(yōu)化 Step and Slit: Agilent 1100 DAD 狹縫寬度可以程序變化，變化步徑1，2，4，8，16nm。如果樣品濃度較高，而需要精細的光譜結(jié)構(gòu)，建議使用1或2nm的狹縫寬度。如果樣品濃度較稀，建議使用8或16nm寬度狹縫。采集樣品的譜帶寬度至少要與狹縫寬度一樣。 Peak Width

8、: 增加響應時間（峰寬）可以增加組成色譜信號中每個數(shù)據(jù)點的采集次數(shù)。因為檢測器的噪音與采集次數(shù)平方根成反比，所以增加響應時間可以降低噪音。但增加響應時間（峰寬）會降低定量分析的重復性。一般對于精確的定量分析，一個色譜峰要求采集20個數(shù)據(jù)點。設置峰寬的經(jīng)驗：設置峰寬等于實際色譜峰的最窄峰寬。,2005-3-212020/9/24,Slide 25,Sample Signal and Reference Signal: 設置樣品吸收波長與參比波長遵從下列規(guī)則： 樣品吸收波長選擇在樣品的最大吸收波長，而且在此吸收波長下沒有流動相吸收的干擾。 選擇樣品信號的譜帶寬度應覆蓋樣品吸收譜帶的半峰寬（假設樣品

9、吸收譜帶為高斯峰）。 參比吸收譜帶應選擇在盡量靠近樣品吸收譜帶，而且在此區(qū)域沒有或盡量低的吸收強度。 參比峰譜帶寬度要大于或等于樣品譜帶寬度。 注意：增加樣品譜帶寬度，會降低樣品的吸收強度，但會降低噪音。 選擇合適的參比吸收波長可以減小梯度洗脫過程中的基線漂移。 Peak Supression（峰抑制）: DAD檢測器一個非常有趣的功能是進行峰抑制。例如有兩個樣品沒有分開，共同洗脫出來，可以設置某一個樣品的等吸收波長為參比波長，則被設為參比峰的樣品被抑制，而另一個樣品峰被分離。不過，此樣品峰的吸收強度要損失1030。,2005-3-212020/9/24,Slide 26,VWD檢測器參數(shù)設置

10、,2005-3-212020/9/24,Slide 27,選擇在方法中要執(zhí)行的項目 可以選擇保存GLP數(shù)據(jù) 可以將方法和數(shù)據(jù)保存在一起,運行時間表(Run Time Checklist),2005-3-212020/9/24,Slide 28,從Method菜單選擇Save Method / Save Method as或從存貯方法工具圖標存貯方法。,存儲方法,單擊本圖標可以保存方法，務必注意不要發(fā)生方法覆蓋、丟失,2005-3-212020/9/24,Slide 29,要分析單個樣品，先從RunControl菜單選擇 Sample Info., 輸入樣品信息。 樣品信息包括： 操作者姓名(O

11、perator Name)，存盤數(shù)據(jù)文件(Data File)，樣品參數(shù)(Sample Parameters) 樣品評述(comment)。 然后運行方法(Run Method)。,運行方法,2005-3-212020/9/24,Slide 30,用戶圖形友好界面(GUI),2005-3-212020/9/24,Slide 31,用戶圖形友好界面各個模塊的控制,2005-3-212020/9/24,Slide 32,用戶圖形界面溶劑瓶的填充量,2005-3-212020/9/24,Slide 33,用戶圖形友好界面各種參數(shù)的顯示,2005-3-212020/9/24,Slide 34,Inst

12、rument菜單簡介,2005-3-212020/9/24,Slide 35,選擇Instrument More Pump Auxiliary菜單，即可彈出下圖窗口。,泵的輔助功能,在該窗口可以設置泵的最大升流速率、泵沖程大小以及設置溶劑的壓縮補償因子。,2005-3-212020/9/24,Slide 36,自動進樣器的擴展功能,2005-3-212020/9/24,Slide 37,色譜柱信息的輸入,2005-3-212020/9/24,Slide 38,VWD停泵掃描采集光譜,使用VWD停泵掃描的功能，可以采集樣品的吸收光譜，主要操作步驟如下： 1.在Online工作站界面的View菜單

13、下打開VWD Scans窗口； 2.按照正常的進樣方式采集樣品色譜數(shù)據(jù)，并保證能夠在 Online Signal窗口中觀測到色譜信號； 3.進樣后，色譜圖上出現(xiàn)基線時，掃描空白吸收光譜 在Instrument菜單下，選擇More VWD中的Blank Scan 4.色譜圖上出現(xiàn)色譜峰時，掃描樣品吸收光譜 在Instrument菜單下，選擇More VWD中的Sample Scan 此時得到的是自動扣除空白吸收后的樣品吸收光譜。,2005-3-212020/9/24,Slide 39,可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能,進樣之前選擇VWD Scans菜單，打開VWD光譜掃描窗口,2005-3-2

14、12020/9/24,Slide 40,可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能,2005-3-212020/9/24,Slide 41,可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能,掃描所得的流動相吸收光譜,2005-3-212020/9/24,Slide 42,可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能,出現(xiàn)色譜峰時，點擊Sample Scan，掃描樣品峰的吸收光譜,2005-3-212020/9/24,Slide 43,可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能,光譜窗口中給出扣除流動相吸收光譜后的樣品峰吸收光譜,2005-3-212020/9/24,Slide 44,第三章 譜圖優(yōu)化,本章內(nèi)容：,譜圖調(diào)用 空白譜圖的

15、扣除 譜圖優(yōu)化 譜圖加標注 譜圖比較、處理,2005-3-212020/9/24,Slide 45,調(diào)用數(shù)據(jù)文件,在Data Analysis界面，F(xiàn)ile菜單下選擇Load Signal。,扣除空白譜圖,2005-3-212020/9/24,Slide 46,扣除空白譜圖,選擇需要扣除的空白運行色譜文件,2005-3-212020/9/24,Slide 47,選擇、規(guī)定一個方法中要進行調(diào)用、處理的信號,Signal Details,2005-3-212020/9/24,Slide 48,使用 Signal Options. 功能來優(yōu)化色譜圖的顯示,譜圖優(yōu)化,在Data Analysis界面下

16、，Graphics菜單下選擇Signal Options.,2005-3-212020/9/24,Slide 49,譜圖優(yōu)化工具,譜圖優(yōu)化圖標,譜圖顯示方式,化合物名稱,保留時間顯示,標題顯示,軸,單獨/重疊顯示,基線,打印窗口,色譜圖控制圖標,移動標注,文字標注,設置標注格式,線形標注,刪除標注,WMF圖標注,拷貝,2005-3-212020/9/24,Slide 50,選擇: 字體和字型 字體大小 字體顏色、旋轉(zhuǎn)角度等,在色譜圖上加標注,2005-3-212020/9/24,Slide 51,Add Annotation Draw Line in Window Move Annotatio

17、n Delete Annotation,譜圖處理工具,譜圖處理工具,2005-3-212020/9/24,Slide 52,如何執(zhí)行積分 自動積分 如何建立積分事件表 如何使用積分事件表 手動積分,本章內(nèi)容：,第四章 積分優(yōu)化,2005-3-212020/9/24,Slide 53,增強積分方式可以提供: 當基線波動時，基線的定位。 使用初始峰高參數(shù)去除噪音峰。 控制積分開始和結(jié)束的標識。 在噪音中定位信號峰。 使用二階導數(shù)確定肩峰。,增強積分方式,2005-3-212020/9/24,Slide 54,當調(diào)用信號時，可以通過Integrate after load選項自動積分。 您也可以通過

18、以下方式進行積分: 從 Integration 菜單選擇積分或自動積分 選擇積分工具。 運行一個包括數(shù)據(jù)分析的完整方法。,如何執(zhí)行積分,2005-3-212020/9/24,Slide 55,自動積分,檢查開始和結(jié)束區(qū)域，確定噪音。 賦予初始Slope Sensitivity和Height Reject值. 對第一次積分賦予一個臨時峰寬值。 設置Area Reject為0。 執(zhí)行測試性積分，有可能重復幾次。 基于較早洗脫出的色譜峰寬計算峰寬值。 優(yōu)化Slope Sensitivity和Height Reject。 從初始的峰寬和噪音水平計算Area Reject。,2005-3-212020/

19、9/24,Slide 56,積分事件,初始值,信號選項框,高級基線選擇,2005-3-212020/9/24,Slide 57,高級基線,2005-3-212020/9/24,Slide 58,添加積分事件功能,刪除積分事件功能,積分事件表,2005-3-212020/9/24,Slide 59,積分任務,對當前色 譜圖積分,自動積分,積分事件,設置Baseline Now,設置Baseline Hold,設置拖尾 切線撇去,積分器開關,設置斜率,設置最小峰面積,設置固定峰寬,設置肩峰檢測,積分工具欄,2005-3-212020/9/24,Slide 60,Peak width: (半峰寬)

20、如果沒有設置半峰寬的時間積分表，半峰寬在整個積分過程中自動變化，變化遵從0.75exiting peak + 0.25current peak。 Timed Events :(時間性積分事件) Area Sum ON or OFF:設定某一時間段內(nèi)進行峰面積加和，加和后保 留時間被分配到第一個峰的保留時間上。 Baseline All Valleys On or OFF: 設定是否進行峰谷積分。,2005-3-212020/9/24,Slide 61,Baseline Hold ON or OFF: 在Baseline Hold ON與Baseline Hold OFF兩點間做水平基線。,Ba

21、seline Now: 在某一時刻點重新設置基線。 Baseline Back: 設置某一時刻點，從檢測到的基線向此點做水平基線。,2005-3-212020/9/24,Slide 62,存貯積分事件到方法,作為方法的一部分存貯積分參數(shù),保存方法,2005-3-212020/9/24,Slide 63,選擇積分工具,對目前色譜 圖進行積分,自動積分,積分事件,手動積分 畫基線,手動積分 負峰,手動積分 切線撇去,手動積分 裂分峰,手動積分 去除峰,手動積分工具,2005-3-212020/9/24,Slide 64,Draw Baseline Negative Peak(s) Tangent

22、Skim Split peaks Delete Peak(s) All Valleys,手動積分,2005-3-212020/9/24,Slide 65,峰類型符號 峰起止點符號 B 基線P 基線滲透 V 峰谷點H 水平基線 M 手動積分T 切線撇去 其它符號 + 參考峰I 內(nèi)標峰 A+ 面積加和峰N 負峰 S 溶劑峰 警示符號 + 高于含量上限 低于含量下限,2005-3-212020/9/24,Slide 66,基線符號,B BB B,B=基線,B V B,V=峰谷點,B P B,P=基線滲透,B H H,H=水平基線,2005-3-212020/9/24,Slide 67,如何建立校正表

23、 如何選擇校正表的設置 如何進行再校正 如何使用峰識別工具,本章內(nèi)容：,第五章 高級校正表的建立,2005-3-212020/9/24,Slide 68,配置系列標樣*，然后逐一進樣分析。 *系列標樣濃度范圍要包含未知樣品濃度。 調(diào)用低濃度標樣數(shù)據(jù)，優(yōu)化譜圖顯示。 優(yōu)化積分參數(shù)，獲得滿意的積分結(jié)果， 然后存貯積分事件到方法。 用最低濃度標樣數(shù)據(jù)建立一級校正表。 逐個對每個標樣進行優(yōu)化譜圖，優(yōu)化 積分后，分別加入校正表。 檢查校正曲線，把校正曲線存入方法。,建立校準表的過程,2005-3-212020/9/24,Slide 69,校 正 參 數(shù) 的 建 立,Signal details,2005

24、-3-212020/9/24,Slide 70,Available Signals 此框包括了所有要被處理的信號，可從此框選擇被處理的信號，通過Add to Method 按鍵拷貝到方法中。拷貝之后可以編輯初始時間(Start)和中止時間(End)。只有在此時間范圍內(nèi)的信號才被處理。如果初始時間和中止時間及延遲時間(Delay Time) 均設置為0，被選定信號的 所有數(shù)據(jù)均被處理。 Delay 可以通過設置時間延遲(Delay)來補償檢測器信號的延遲。例如：串聯(lián)使用兩個檢測器，對于同一信號會有時間延遲。通過設置Delay來補償時間延遲，這樣可以進行峰識別。通過時間延遲，還可以修改某個色譜數(shù)據(jù)

25、的保留時間。保留時間設置區(qū)域沒有限制，而且數(shù)值可正可負。 Align 此功能用于LC/MSD。,2005-3-212020/9/24,Slide 71,Calibration Settings,2005-3-212020/9/24,Slide 72,校正參數(shù)的設置,Title 輸入校正表的標題。 Use Sample Data 此對話框有兩種選擇： From Sample Defaults Below: 選擇此項后，可以設置下面Sample Defaults各參數(shù)，所有在Sample Info.中所設置的參數(shù)均被新參數(shù)替代。From Data File: 所有涉及到的參數(shù)在數(shù)據(jù)處理過程中均以S

26、ample Info.表中參數(shù)為準。 Amount 此處濃度只在計算ESTD%和ISTD%時有效。Amount輸入樣品總濃度。,2005-3-212020/9/24,Slide 73,Sample ISTD 未知樣品中內(nèi)標濃度。可以輸入幾個內(nèi)標。 I 用于識別內(nèi)標物。此處I與校正表中I一致。 Calculate Uncalibrated Peaks 此選項用于定義未校正峰的響應因子。校正因子可以使用某一校正化合物的校正因子(Using Compound)，也可以輸入某一響應因子數(shù)值(With Rsp Factor)。 Weight 作標準曲線時，定義不同校正點的權重（重要性）。,2005-3-

27、212020/9/24,Slide 74,調(diào)用標樣進行積分參數(shù)優(yōu)化,2005-3-212020/9/24,Slide 75,建立一級校正表,2005-3-212020/9/24,Slide 76,Calibration Table 可以通過兩種方法建立新校正曲線表： Manual Setup: 手工輸入保留時間和響應因子。 Automatic Setup Level: 工作站自動將保留時間及其它色譜參數(shù)輸入校正表，用戶只需輸入標樣濃度，工作站自動計算響應因子。 Calibration Mode 此項選擇只在歸一化法(Norm%)中有效。選擇Calculate Signals Separatel

28、y后，在計算時，每個信號被獨立報告。否則所有的信號均被歸一化。,2005-3-212020/9/24,Slide 77,填入: 化合物名稱 濃度 選擇: 參比峰 內(nèi)標 內(nèi)標標號#,校正表的建立,2005-3-212020/9/24,Slide 78,校正表的選擇,Compound, Amt, Area, Rsp Factor, Ref, ISTD, #,Compound, Grp, Amt, Low Limit, Hight Limit,Compound, Amt, Area, Def, Curve Type, Origin,Compound, Area, Rsp%, Def, +-, PK

29、Usage,編輯校準表的內(nèi)容,峰加和,2005-3-212020/9/24,Slide 79,每種校正表方式都有各自的缺省方式，用戶可根據(jù)自己的需要使用Edit Options對每種方式進行編輯。 在左側(cè)Columns not shown框中選擇所需內(nèi)容后按“”鍵，所需內(nèi)容加到右側(cè)Columns shown框中。,2005-3-212020/9/24,Slide 80,Compound Details,2005-3-212020/9/24,Slide 81,Peak Details,Peak Details表包含了校正曲線的信息。 如果Def欄被選擇，校正曲線參數(shù)由Calibration Se

30、ttings中的參數(shù)決定。如果校正曲線參數(shù)在Calibration Settings中發(fā)生改變，則Calibration Table會自動更新。 校正曲線參數(shù)包含：校正曲線類型、原點的選定以及各校正點的權重。,2005-3-212020/9/24,Slide 82,Identification Details,Identification Details中定義了每個峰的作用，并允許用戶定義特征峰。每個峰的最大吸收總被定義為主峰。 Rsp%: 顯示響應比率（特征峰/主峰）。 Def Qualifier Tolerance(Def): 選擇此欄使用缺省的響應比率偏差。 : 特征峰的響應占主峰響應的

31、百分數(shù)。此欄設置用戶期待的響應比率偏差。例如此欄設置20，則偏差窗口為 -1010。,2005-3-212020/9/24,Slide 83,Peak Usage 顯示峰的選擇Main, Qualifier或Ignore。儀器設定的缺省值為：化合物最大峰為Main（主峰），其它峰為Ignore。 Main: 主峰。此峰用作定量計算。主峰和特征峰一起用作定性。只能選擇一個主峰。 Qualifier: 特征峰。特征峰用于確定主峰屬于哪一期望化合物。一般情況下：一個化合物在不同的波長范圍有一恒定的響應比率。因此對于一個化合物，其特征峰的響應與主峰的響應為一恒定比率?？梢酝ㄟ^ +- 欄設置允許的響應比

32、率偏差。如果某一化合物的響應比率超出此設定值，則此化合物峰不被定量。 Ignore: 如果峰選擇此項，則此峰既不用于定量，也不用于定性。此峰在校正表中留作將來使用。可以用Delete鍵刪除此峰。,2005-3-212020/9/24,Slide 84,Calibration Table option,Calibration Table Option讓用戶選擇校正表中顯示哪些內(nèi)容。Calibration Table Option包括兩部分內(nèi)容：Columns not shown顯示了哪些內(nèi)容可以加到校正表中；Columns shown顯示校正表中的內(nèi)容。要選擇哪些內(nèi)容加到校正表中，只需選擇Col

33、umns not shown中的內(nèi)容，單擊-鍵把所需內(nèi)容加Columns shown中。,2005-3-212020/9/24,Slide 85,峰加和功能主要用于石化或制藥行業(yè)某些特殊應用，該功能可以對某個時間段內(nèi)連續(xù)或不連續(xù)的色譜峰進行總含量定量計算。如下圖所示，需要測量除四個主要目標化合物峰aaa、bbb、ccc、ddd以外的所有413min時間段內(nèi)的雜質(zhì)峰總含量時，即可使用Peak Summing功能。,Peak Summing,2005-3-212020/9/24,Slide 86,調(diào)用標樣數(shù)據(jù)，并對所有峰(包括雜質(zhì)峰)進行積分參數(shù)優(yōu)化，得到各個峰的準確峰面積。 在Calibrati

34、on菜單下，建立標準的校正表，即在校正表中輸入aaa、bbb、ccc、ddd四個標準化合物的含量。 選擇Calibration Table Option選項中Peak Summing。此命令執(zhí)行后，校準表變成峰加和型校正表，如下所示。 輸入413min時間段的片斷名稱，如impurity，并指定所需的RF因子。如果Use Reference項中選擇None，則可以在Response Factor欄中手工輸入所需的RF數(shù)值。,2005-3-212020/9/24,Slide 87,峰加和表編輯好，選擇Report菜單下Specify Report選項，在Specify Report窗口，選中Ad

35、d Summed Peaks Table選擇，并規(guī)定使用外標法定量。 調(diào)用未知樣品，選擇Report菜單下Print Report，發(fā)現(xiàn)得到的報告中除正常的外標報告以外還有如下內(nèi)容：,= Summed Peaks Report = Signal 1: DAD1 B, Sig=305,190 Ref=550,100 Name Start Time End Time Total Area Amount min min mAU*s ng/ul -|-|-|-|-| impurity 4.000 13.000 2098.37931 2.0984 Totals : 2.0984 注：此處用于雜質(zhì)定量計算

36、的RF值為手工輸入的 0.001。,2005-3-212020/9/24,Slide 88,調(diào)用信號加入二級校正,輸入二級標樣含量,2005-3-212020/9/24,Slide 89,加入更多的級別輸入對應標樣含量,線性相關系數(shù),2005-3-212020/9/24,Slide 90,Save Table to Method,把校正表存入方法,2005-3-212020/9/24,Slide 91,再校正,當校正曲線上的點發(fā)生偏移，需要對相應的濃度點做再校正。 再校正過程如下： 進一針相應濃度的標樣。 調(diào)用此數(shù)據(jù)文件。 在Calibration 菜單下，選擇Recalibrate, 選擇需

37、要再校正的級別，然后選擇如何再校正Average或Replace。工作站自動進行再校正。,2005-3-212020/9/24,Slide 92,Advanced Calibration,2005-3-212020/9/24,Slide 93,Calibration Report Option,此項功能可以設置再校正報告在序運行許過程中如何打印。,2005-3-212020/9/24,Slide 94,第六章 設定報告格式,本章內(nèi)容: 如何定義一個報告類型 報告文件的存貯方式 報告類型選擇 如何使用系統(tǒng)適用性報告 GLP報告中內(nèi)容 如何存貯GLP數(shù)據(jù) 如何執(zhí)行自動庫檢索 如何獲得峰純度信息,2

38、005-3-212020/9/24,Slide 95,定義報告,From Data Analysis:,2005-3-212020/9/24,Slide 96,定義報告: 報告輸出目的地,報告的輸出目的地可以是打印機、屏幕或者存貯成報告文件。,報告可以存貯成下列文件格式： .TXT - 只有報告文本，存貯成純文本文件 .WMF - 每個報告的圖形存貯成meta file .DIF - 數(shù)據(jù)存貯成 EXCEL的DIF格式(Data Interchange Format)只適用于短報告格式 .CSV - 數(shù)據(jù)存貯成數(shù)據(jù)庫文件(Comma Separated Values),適用于短報告 .XLS

39、- EXCEL報告格式 .HTM - 超文本格式, 可以使用Internet瀏覽器瀏覽,2005-3-212020/9/24,Slide 97,使用網(wǎng)絡瀏覽器IE查看報告,2005-3-212020/9/24,Slide 98,報告類型選擇,None Short Detail Header + Short GLP + Short GLP + Detail Short + Spectrum Detail + Spectrum Full Library Search Performance Performance + Noise Performance + Library Search Exten

40、ded Performance,2005-3-212020/9/24,Slide 99,儀器參數(shù)曲線編輯,2005-3-212020/9/24,Slide 100,報告格式存貯到方法中,2005-3-212020/9/24,Slide 101,打印報告,打印報告,2005-3-212020/9/24,Slide 102,報告工具,選擇校正工具,定義報告,打印預覽,打印報告,顯示/隱藏當前色譜圖,2005-3-212020/9/24,Slide 103,化學工作站一共有四種系統(tǒng)適用性報告格式：Performance, Performance+Noise, Performance+Lib Sear

41、ch, Extended Performance。每種報告格式包含不同的報告內(nèi)容。 Performance: 根據(jù)Edit Performance Limits對話框中設定的限度給出系統(tǒng)適用性報告。對于未校正的方法，報告結(jié)果包括：峰號，保留時間，峰面積，峰高，信號描述，半峰寬，對稱性，K，塔板數(shù)和分辨率；對于校正的方法，報告結(jié)果包括：峰號，保留時間，化合物名稱，濃度，信號描述，半峰寬，對稱性， K，塔板數(shù)和分辨率。 Performance+Lib Search: 包括Performance報告及庫檢索報告。 Performance+Noise: 包括Performance報告及噪音檢測報告。

42、Extended Performance: 包括Performance報告格式及每個峰的色譜圖 。此報告格式只用于校正峰。,系統(tǒng)適用性報告,2005-3-212020/9/24,Slide 104,系統(tǒng)適應性報告(System Suitability) 在日常分析前或分析中，您可以用系統(tǒng)適用性報告檢查分析系統(tǒng)的性能。此報告允許用戶設定保留時間、峰高、峰面積、濃度、半峰寬、K、塔板數(shù)、分辨率、選擇性、庫匹配以及校正峰純度的上下限。同時可以測量基線噪音和基線漂移。 噪音檢測： 選擇Edit Noise Ranges命令進入噪音編輯對話框，在此對話框內(nèi)可以編輯7組噪音檢測區(qū)間。噪音檢測區(qū)間不要選在有

43、色譜峰出現(xiàn)的區(qū)域。,2005-3-212020/9/24,Slide 105,在Specify Report中選擇Performance + Noise報告格式，噪音檢測報告會單獨給出。噪音檢測報告包括三種噪音計算方法的結(jié)果（六倍標準偏差法，峰對峰測量法及ASTM測量法），噪音的來回漂移(wander)及噪音漂移(drift)。同時計算每個峰的信噪比。噪音檢測方法原理見了解您的化學工作站第249頁。,2005-3-212020/9/24,Slide 106,編輯系統(tǒng)性能限度： 選擇Edit Performance Limits命令進入編輯系統(tǒng)性能限度對話框。此框內(nèi)可以設定不同系統(tǒng)參數(shù)的上下限。

44、例如在Retention time參數(shù)設置框內(nèi)輸入期望保留時間范圍（下限和上限）。,2005-3-212020/9/24,Slide 107,在Specify Report報告中選擇Performance報告格式，如果樣品測量值超出設定的限制范圍，報告中會用 或 代表測量值超出設定上限， 代表測量值低于下限。,2005-3-212020/9/24,Slide 108,化學工作站中有兩種GLP報告格式：GLPShort，GLPDetail。 GLP+Short: 包括標題頁，樣品信息，操作條件，Logbook，色譜圖和定量結(jié)果。標題頁存貯在Method子目錄下，文件名為RPTHEAD.TXT，可

45、以對其進行修改。 GLP+Detail: 包括標題，樣品信息，操作條件，Logbook，色譜圖，定量結(jié)果和校正曲線。標題存貯在Method子目錄下，文件名為RPTHEAD.TXT。可以對此文件進 行修改。,存貯GLP數(shù)據(jù) 在運行時間表(Run Time Checklist)中，選擇Save GLP Data。GLP數(shù)據(jù)與分析方法以二進制方式記錄在GLPSave.Reg文件中。此文件不可修改。GLPSave.Reg中包括以下信息： 儀器設定參數(shù)；儀器性能參數(shù)；信號；積分結(jié)果；定量結(jié)果；數(shù)據(jù)分析方法；Logbook,GLP報告類型,2005-3-212020/9/24,Slide 109,查看GL

46、P數(shù)據(jù),2005-3-212020/9/24,Slide 110,自動庫檢索,要得到一個庫檢索報告，首先從Specify Report中選擇Library Search或Performance+Lib Search報告形式。 選擇Automated Library Search命令，進入自動檢索編輯對話框，通過此對話框可以編輯檢索參數(shù)。,2005-3-212020/9/24,Slide 111,Time Range: 定義檢索時間范圍。 Library: 選擇標準譜庫，可以同時選擇四個譜庫。 Edit Search Parms: 編輯檢索參數(shù)。利用Left Window%和Right Wind

47、ow%可以定義檢索區(qū)間。 Peak Purity Check: 是否進行峰純度檢測。如果進行峰純度檢測，還可以設置庫檢索匹配閾值。庫檢索匹配閾值決定樣品的檢索結(jié)果。如果樣品的庫檢索匹配閾值低于設定值，則此樣品與標準譜庫檢索譜圖不匹配。,自動庫檢索參數(shù)設置,Library Search Modes: 有三種庫檢索方式： Identification by spectral library search: 在設定檢索區(qū)間內(nèi)對每個化合物進行庫檢索。 Target compound analysis using the calibration table: 在規(guī)定檢索區(qū)間內(nèi)對校正表給定的化合物進行檢索

48、。 Target compound analysis using the spectra library: 在檢索區(qū)間內(nèi)對校正表給的化合物進行檢索。校正表內(nèi)給定的化合物名稱一定要與標準譜庫中檢索到的標準物名稱一致以保證匹配度。,2005-3-212020/9/24,Slide 112,庫檢索報告,檢索報告中不同欄中有不同的標記，這些標記解釋如下： u: 化合物在峰上坡處檢測到不純。 d: 化合物在峰下坡處檢測到不純。 X: 匹配因子低于設定閾值。 ?: 搜索到的化合物名稱已經(jīng)分配給另一個匹配度更好的色譜峰。對于該色譜峰，無法找到一個匹配度更好的化合物與之對應。,2005-3-212020/9/

49、24,Slide 113,化學工作站有三種報告格式可以進行峰純度分析： Short+Spectra: 包括儀器操作條件，定量結(jié)果以及峰純度譜圖。 Detail+Spectra: 包括標題，儀器操作條件，定量結(jié)果，校正曲線和峰純度譜圖。 Full: 包括標題，樣品信息，儀器操作條件，Logbook，色譜圖定量結(jié)果以及峰純度譜圖。,自動峰純度分析,2005-3-212020/9/24,Slide 114,顯示紫外譜圖,第七章 DAD高級功能,2005-3-212020/9/24,Slide 115,光譜選項 -紫外譜圖,2005-3-212020/9/24,Slide 116,自動扣除背景 平滑譜

50、圖 使用導數(shù)譜圖,光譜選項,2005-3-212020/9/24,Slide 117,紫外譜圖顯示,紫外譜圖和參比譜圖,扣除背景的紫外譜圖,2005-3-212020/9/24,Slide 118,譜圖處理工具圖標,光譜選項,選擇色譜圖上任意一點紫外譜圖,選擇峰頂紫外譜圖,平均譜圖,選擇一組紫外譜圖,選擇第一個參比,選擇第二個參比峰,選擇峰純度,譜圖處理工具,2005-3-212020/9/24,Slide 119,紫外譜庫: 原理,2005-3-212020/9/24,Slide 120,紫外譜庫: 當前的局限性,2005-3-212020/9/24,Slide 121,影響譜圖匹配的因素,

51、2005-3-212020/9/24,Slide 122,創(chuàng)建譜庫,2005-3-212020/9/24,Slide 123,輸入譜庫名稱及描述,2005-3-212020/9/24,Slide 124,提取化合物光譜圖,2005-3-212020/9/24,Slide 125,把譜圖加入譜庫,2005-3-212020/9/24,Slide 126,工作站自動標出物質(zhì)的最大吸收和最小吸收波長。,波長表,2005-3-212020/9/24,Slide 127,譜圖管理,2005-3-212020/9/24,Slide 128,存貯譜庫文件,2005-3-212020/9/24,Slide 1

52、29,開始譜圖檢索 - 打開譜庫,可以打開自己工作站中的譜庫， 也可以通過網(wǎng)絡調(diào)用網(wǎng)上的譜庫。,2005-3-212020/9/24,Slide 130,檢索模板,2005-3-212020/9/24,Slide 131,檢索譜圖,2005-3-212020/9/24,Slide 132,檢索結(jié)果,2005-3-212020/9/24,Slide 133,譜圖處理工具,調(diào)用譜庫,保存譜庫,檢索工具,2005-3-212020/9/24,Slide 134,峰純度檢測,在峰的洗脫過程中，可以通過比較所記錄的吸收光譜圖來評估色譜峰是否包含不純的物質(zhì)。,光譜處理工具圖標,峰純度檢測,2005-3-2

53、12020/9/24,Slide 135,峰純度檢測,峰純度檢測就是確認一個色譜峰是純物質(zhì)還是含有其它物質(zhì)的過程。這個過程是要依靠峰流出中所記錄到的光譜進行比較而實現(xiàn)的。通常對每個峰以三個光譜圖來確認純度。其中兩個光譜取自于固定點（斜率上升點和斜率下降點），另一個取自于最高點（最高點或頂點光譜）。如果需要，還可以選擇5、7、9或 All 光譜圖來進行純度計算。 如果這些光譜不相同，理論上講這個峰含有不純物。這種光譜不純可能是由一個或多個化合物引起的，也可能是由背景吸收引起的。 要進行峰純度檢測，首先選擇Spectra菜單下Spectra Option，進行峰純度參數(shù)編輯。,2005-3-212

54、020/9/24,Slide 136,Spectra: 此選項允許用戶選擇光譜處理參數(shù)，工作站按用戶選擇的參數(shù)進行譜圖處理，然后顯示在屏幕上。此選項共有三組參數(shù)： Wavelength Range: 設定光譜在屏幕上的顯示范圍。并且可通過此參數(shù)范圍的設定去除流動相或背景噪音吸收的干擾。 Spectra Per Peak: 選擇從色譜峰上提取光譜圖個數(shù)。例如選擇7，則從色譜峰上等距離選擇7個點進行處理。同時選擇Threshold, 去除雜質(zhì)峰只有高于設定Threshold值的峰才被顯示。 Spectra Processing: 選擇光譜處理過程。 Smooth Factor: 當噪音干擾非常利害

55、，即噪音光譜與樣品光譜吸收強度相近時，峰純度檢測的可靠性受到限制，選用平滑參數(shù)處理譜圖，可以降低系統(tǒng)噪音，使得平滑后的光譜圖更可靠，同時改變譜圖輪廓。此值越高，譜圖平滑越利害。建議在作譜圖間比較時，使用相同的平滑參數(shù)。 Spline Factor: 當采集譜圖時使用低靈敏度，得到的譜圖可能象個多邊形。通過Spline Factor選擇，在原始數(shù)據(jù)點之間加入新數(shù)據(jù)點進行數(shù)學處理， 產(chǎn)生一條平滑的曲線，使譜圖更美觀。 此值越大，新增數(shù)據(jù)點越多。 Logarithm: 對每張譜圖取對數(shù)，以縮小顯示比例。 Derivative Order: 對選擇的譜圖取導數(shù)，以揭示譜圖更細節(jié)的信息。,峰純度參數(shù)設置

56、,2005-3-212020/9/24,Slide 137,Reference: 設定參比吸收，然后從選擇的樣品譜圖中扣除參比吸收。,None: 不設置參比波長。 Manual: 當選擇一個參比時間時，此參比時間的光譜被所選擇的樣品譜圖扣除。當選擇兩個參比時間，兩個參比時間的參比光譜用內(nèi)插法重建一個參比光譜，然后被所選擇的樣品光譜扣除。 Automatic: 工作站自動選擇參比光譜。,2005-3-212020/9/24,Slide 138,Display: 規(guī)定譜圖顯示的格式。,Multi-Spectra: 顯示重疊譜圖還是分別顯示譜圖。 Display: 顯示譜圖的內(nèi)容。,2005-3-2

57、12020/9/24,Slide 139,Purity: 允許用戶選擇適當?shù)拈撝祷蛲ㄟ^工作站自動計算閾值。,Peak controlled spectral data file Threshold：定義控制譜圖的限制，高于此限制的色譜峰則為純峰。限制范圍為01000。 All Spectra data file Calculate Threshold：基于每個峰的信噪比，工作站自動計算每個峰的峰純度閾值。（只適應于數(shù)據(jù)文件中用ALL或ALL in PEAK存貯的樣品） Fixed Threshold：用戶自己設定閾值限制，而不用計算機自動計算。,2005-3-212020/9/24,Slide

58、 140,Advanced： 選擇峰純度計算方法及擬合曲線的顯示方式。,2005-3-212020/9/24,Slide 141,等高圖,3D 顯示,峰純度信息,峰純度分析窗口,閾值曲線,模擬曲線,Spectral Overlay,2005-3-212020/9/24,Slide 142,峰純度檢測屏幕顯示,峰起點,參考譜圖,每張光譜圖的相似性,模擬曲線,閾值曲線,峰終點,參考譜圖,超出閾值,未超閾值,紅色：超出Threshold,綠色：未超出Threshold,2005-3-212020/9/24,Slide 143,Spectra Similarity Curve: 給出峰純度的詳細信息。一個色譜峰上所有光譜圖與某一個或多個譜圖（缺省值為平均譜）。理想的絕對純的色譜峰的Similarity