1、吞噬細胞的吞噬作用,新鄉(xiāng)醫(yī)學院免疫學教研室,實驗目的,掌握吞噬作用的原理和方法 掌握顯微鏡油鏡的使用方法 掌握瑞氏染色的方法,實驗原理,血液中的多形核白細胞是一種小吞噬細胞，其細胞漿內含有多種酶類，對侵入體內的細菌具有強大的吞噬和消化功能，是機體非特異性免疫的重要組成部分。 意義：在某些情況下，小吞噬細胞也參與某些超敏反應和自身免疫疾病的組織損傷和炎癥過程，因此，測定小吞噬細胞的功能可在一定程度上反映機體的免疫狀態(tài)，也可作為判定療效的一種指標。,大吞噬細胞（單核巨噬細胞） 小吞噬細胞（中性粒細胞）,吞噬細胞 分類,大吞噬細胞,來源： 單核巨噬細胞 存在部位： 血液（單核細胞) 全身結締組織及小

2、血管的基底 膜組織（巨噬細胞） 功能基礎：富含溶酶體及線粒體 功能： 吞噬病原微生物（寄生蟲等），死亡細胞。 反應時間及壽命：反應時間長（48h），壽命長。,小吞噬細胞,來 源： 中性粒細胞 存在部位： 血液 、 炎癥部位（全身） 功能基礎：溶酶體，過氧化物酶及殺菌物質。 功 能：主要吞噬化膿菌 反應時間及壽命：反應時間快,數分鐘到幾小時，壽命短.平均數小時,吞噬示意圖,吞噬過程,實驗材料,無菌肉湯 白葡菌液 注射器 瑞氏染液 PBS緩沖液 解剖器材 玻片、顯微鏡等,實驗方法,1.誘導：實驗前1小時給小白鼠腹腔注射無菌肉湯2ml，誘導漿液滲出 2. 注射：給小白鼠腹腔內注射白葡菌液1ml，讓小

3、鼠活動 3. 取樣： 注射后35 分鐘處死小白鼠，抽取腹腔液涂片 4.染色：標本干燥后瑞氏染液染色,瑞氏染色,5.瑞氏染色：滴加34滴瑞氏染液于標本上，以完全蓋住標本為宜。 30秒后滴兩倍體積的緩沖液，吹吸均勻。 3分鐘后甩去玻片上的染液，吸水紙吸干。 油鏡鏡檢,油鏡下見中性粒細胞胞漿呈淡蘭色，核分葉、紫紅深染，白葡菌呈蘭色?？梢娭行粤＜毎麧{內吞噬有很多白葡菌。,實驗結果,注射菌液時不要注射到皮下或腹腔臟器內，注射后輕揉腹部，使液體在腹腔內分散均勻 注意掌握好染色時間,注意事項,巨噬細胞吞噬雞紅細胞,大吞噬（示教片）,顯微鏡油鏡的使用,油鏡頭的識別,油鏡頭上常刻有白色環(huán)圈，或標有“油”字、

4、“oil”、100/1.30 等。 使用油鏡可放大1000倍,原理,使用油鏡觀察時，需加香柏油，因為油鏡需要進入鏡頭的光線多，但油鏡的透光孔最小，這樣進入的光線就少，物體不易看清楚。同時又因自玻片透過的光線，由于介質（玻片空氣接物鏡）密度（玻片：n=1.52，空氣：n=1.0）不同而發(fā)生了折射散光，因此射入鏡頭的光線就更少，物體更看不清楚。,原理,采用一種和玻片折光率相接近的介質如香柏油，加于標本與玻片之間，使光線不通過空氣，這樣射入鏡頭的光線就較多，物象就可看得清楚。,原理,使用方法,先用低倍鏡找到視野 a將光線調至最強程度（聚光器提高，光圈全部開放）。 b轉動粗調節(jié)器使載物臺下降，滴香柏油1小滴（不要過多，不要涂開）于接物鏡正下方標本上。 c轉動接物鏡轉換盤，使油鏡頭于鏡筒下方。 d俯身鏡旁側面在肉眼的觀察下，轉動粗調節(jié)器使油鏡頭徐徐浸入香柏油內，輕輕接觸玻片為止。 e慢慢轉動粗調節(jié)器，使載物臺徐徐下降至見到標本的物象為止。 f轉動微調節(jié)器，使視野物象達到最清晰的程度。 g左手徐徐移動推進器，并轉動微調節(jié)器以觀察標本。 h標本觀察完畢后，