1、一、 實驗準備1 通知來血后，就應開始做實驗準備，準備采集盒里面要有一個采血袋、采血管、溫度計放置于有冰袋的保溫箱里交給運輸人員，保持運輸溫度高于4低于20.2 實驗室要事先做好清潔，打開傳遞窗口的紫外燈和生物安全柜的紫外燈，需照射30min，吹風10min。3 準備的物品：信息采集室要有無塵布、酒精棉球、棉簽、噴壺、手套、儲物盒、垃圾桶、垃圾袋、最好有熱合機；在潔凈室要準備，5ml、10ml、20ml、50ml注射器各2-3個，冷凍袋1個，剪刀3把，止血鉗3把，EP管2-3個。二、 信息采集1 接收到采集盒，帶上手套，并噴上酒精消毒，打開盒子檢查里面的物品，采血袋，采血管是否破損，有無漏血現(xiàn)

2、象，并把各個管道的夾子夾緊。2填寫各種信息表格。臍血接收登記表、臍血交接記錄、臍血采集信息等記表、臍血供者健康信息調(diào)查登記表。3按照公司規(guī)定打印標簽，等酒精干后在采血袋上貼標簽。4 把采血袋放入儲物盒里放到傳遞窗中。（傳遞窗口應用紫外照射30min，吹風10min）三、 臍血制備1 到洗手間把采集室所帶的手套扔掉，用洗手液徹底把手洗干凈。2 在一更換鞋，并脫掉日常穿的白大衣放在衣柜里；二更換潔凈服，戴上帽子、口罩、手套。3 進入潔凈室，從傳遞窗口把臍帶拿到天平工作臺上，稱重采集袋毛重，稱重時應注意管子別掉到天平外面，以免稱重不準確。臍血重量=采血袋毛重-采血袋凈重4 計算應加入HESPAN的體

3、積，按照HESPAN:臍帶血=1:4加入HESPAN。5 把采血管熱合掉（就是連接針頭的那一根長管）。6 用托盤把采血袋和HESPAN放入生物安全柜，放入之前應用酒精噴洗一遍。拿一只5ml的注射器從采血袋的熱合掉的端口扎入，抽取1ml的全血打入EP管中用于提取前細胞計數(shù)，然后再把針孔熱合掉。拿一只20ml的注射器從裝HESPAN袋的黃色端口扎入抽取相應體積的HESPAN溶液，注入到采血袋中，并熱合掉針孔。（注意：每一次注射器扎入前，端口部位必須先用碘伏擦拭一遍再用酒精擦拭一遍）。剪一段封口膜，一面用碘伏擦一遍再用酒精消毒一遍，涼干后纏繞黃色端口確保針孔被密封嚴實。把HESPAN拿出生物安全柜。

4、7 打開低溫離心機，配平，把采血袋倒置放入并固定好，開始離心，4,10min，1000轉(zhuǎn)。8 在離心期間可以開始細胞計數(shù)，打開血細胞計數(shù)儀，按照機器的規(guī)章操作，記錄好數(shù)據(jù)（紅細胞、白細胞、血小板數(shù)目）并存檔。9第一次離心結(jié)束后，把離心過的采血袋倒置的懸掛在分漿夾的固定擠壓板上，用止血鉗夾住通向紅細胞分離袋的管道，打開管道上白色的卡子，活動一下出紅細胞的端口，松開活動擠壓板，并打開止血鉗使紅細胞緩慢的流出，將要流完夾緊止血鉗，封閉管道上白色的卡子，紅細胞分離結(jié)束。10第二次離心，配平，條件和第一次一樣，這一次是正置放置采血袋，4,10min，2000轉(zhuǎn)，離心結(jié)束后操作和第一次一樣，分離出血漿，里

5、面如果不夠25ml應回流一部分血漿。11把去除紅細胞和血漿的部分即我們所要的單個細胞用5ml的注射器抽取1ml來，打入EP管中用于細胞計數(shù)。用50ml的注射器把剩余的部分全部抽取出來，打入冷凍袋中，用一只10ml的注射器抽取相應量的冷凍液從冷凍袋的另一端口注入。(單個細胞懸液：冷凍液=5:1)。在操作過程中應把放置在冰袋上勻速搖動。注意：打開任何端口消毒步驟都要同6。12在冷凍帶上貼上標簽，放入冷凍盒中，在冷凍盒上寫上標簽。把冷凍盒放入程序降溫儀中降溫，繼而放入液氮永久保存。13細胞活性檢驗：按照細胞裂解液的說明，用臺盼藍染色，在光學顯微鏡下用肉眼計數(shù)，觀察100個細胞里存活率即可。細胞計數(shù)板