1、快速學(xué)會做藥敏試驗 一、藥敏實驗在臨床診斷中應(yīng)用意義：1、在畜牧產(chǎn)業(yè)中，各種細菌性疾病很容易給養(yǎng)殖業(yè)造成經(jīng)濟損失，使用抗生素防治細菌性疾病成為經(jīng)常性工作。但在養(yǎng)殖過程中不科學(xué)的、盲目的濫用抗生素，造成細菌產(chǎn)生耐藥性問題正變得越來越突出，使抗菌藥的療效降低，療程延長，還使死亡率升高和治療費用增加，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失。2、耐藥菌株還可能將耐藥性基因由動物轉(zhuǎn)移給人類，對人類健康造成潛在威脅。如何避免濫用抗生素，藥敏試驗在臨床診斷中的應(yīng)用就顯得重要了。3、藥敏實驗可以相對快速有效地檢測病原菌對各種抗菌藥的敏感性，指導(dǎo)臨床合理用藥、靈活選藥?？梢栽诒镜貐^(qū)容易買到的藥品中選出最敏感的藥物，既能縮短病

2、程，又能避免盲目用藥，減少費用。4、因為藥敏實驗在動物體外進行，操作相對簡單，成本相對較低，既經(jīng)濟又快速有效，可以對流行病學(xué)調(diào)查進行監(jiān)控，控制和預(yù)防耐藥菌株的流行，在生產(chǎn)中具有非常重要現(xiàn)實意義。二、藥敏試驗的步驟：1、瓊脂平板制備按照營養(yǎng)瓊脂干粉說明來進行稀釋，稀釋后瓊脂放在微波爐里進行加熱，加熱后瓊脂移至超凈工作臺中，靜置待溫度降至50（手指能接受的最高溫度）左右時，開始倒平板，內(nèi)徑225px平皿每個平皿倒入約10ml瓊脂液，倒入后迅速混勻鋪滿平皿底部。2、藥液制備：按藥品使用說明書上的配料或飲水濃度配置按1g需加多少毫升水或配多少毫克飼料，就相當(dāng)于配制藥液所加蒸餾水的毫升數(shù)。如10g藥物可

3、配50kg飼料，其換算方法為：1g本品加5000ml蒸餾水。此溶液液即為用于做藥敏試驗的藥液。3、藥敏紙片制備：要用質(zhì)量較好的定性濾紙，用普通的打孔器打成直徑6mm的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔干燥的小瓶或小平皿中，以單層牛皮紙扎口或包扎。經(jīng)15磅15-20分鐘高壓滅菌后，置于37溫箱或烘箱中一天，使完全干燥。按每張紙片飽和吸水量為0.01ml計，在上述含有50片紙片的小瓶內(nèi)加入藥液0.5ml，不時翻動，使濾紙片將藥液均勻吸凈，一般浸泡30分鐘即可。同時在記錄藥物名稱，于37溫箱過夜。在溫箱或烘箱中的時間不宜過長，以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低溫下真空干燥。干燥后即密封。切勿受

4、潮，置陰暗干燥處或家用冰箱中保存，有效期4-6個月。4、病料接種取新鮮病料組織于超凈工作臺中或酒精燈旁，剪取新鮮組織斷面無菌涂抹到營養(yǎng)瓊脂板上，涂布整個瓊脂平板表面，反復(fù)涂布幾次，保證涂布均勻。5、貼藥敏紙片用無菌鑷子將紙片放于固體培養(yǎng)基表面并輕壓，使紙片與培養(yǎng)基表面完全接觸。為了能準(zhǔn)確觀察結(jié)果，要求藥敏紙片均勻分布于培養(yǎng)基上，位置安排適中，防止出現(xiàn)抑制圈重疊。一般各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，可在平皿中央貼一片，外周等距離貼79片。記住每種藥敏紙片的名稱。6、溫箱培養(yǎng)貼完藥敏紙片的平皿倒放在37恒溫箱中培養(yǎng)24小時以上。三、藥敏實驗結(jié)果觀察四、藥敏實驗選藥原則1、在選擇高敏藥物時還應(yīng)考慮藥物

5、的吸收途徑。因為藥敏試驗是藥液直接和細菌接觸，而在給畜禽用藥時，必須通過機體的吸收才能使藥物發(fā)揮療效，所以在給畜禽用藥時，高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法，并予以足夠劑量、足夠療程，才會取得好的治療效果。2、藥敏試驗結(jié)果僅為臨床選擇高敏藥物的參考。因動物機體及環(huán)境等因素影響，藥物的藥敏試驗與臨床治療效果的符合率一般為7080%，所以也不能過分地依賴藥敏試驗。如發(fā)現(xiàn)療效不顯著應(yīng)及時換藥。3、藥敏試驗確定的首選藥物不是一成不變。隨著藥物使用頻率的增加及新特藥的不斷出現(xiàn)，細菌對原先的高敏感藥物可能不再敏感。因此，定期進行藥敏試驗了解本場細菌對抗菌藥的敏感性情況是很有必要的。4、窄譜抗生素能解決的問題

6、不選廣譜抗生素，一種抗生素可達到治療作用時，不要用兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用。必須應(yīng)用兩種抗生素時，應(yīng)選擇聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同作用的藥物。5、避開已經(jīng)使用過的藥物或其同類藥物，發(fā)病期間已用過的藥物或同類藥物一般不用。五、藥敏片的制作藥敏片一般可以由廠家提供，也可以自己制作，制作藥敏片直接選用各藥廠的成品藥來做。制作藥敏片設(shè)備和器皿：需要恒溫箱、平皿（直徑90mm或更大一點的都行）、燒杯、蒸餾水、濾紙、打孔器。具體的操作步驟：1、將濾紙用打孔器打好適量直徑為6mm的小圓紙片。2、將所需培養(yǎng)皿或玻璃小瓶、玻璃棒、微量吸管、鑷子、濾紙、濾紙片等進行高壓滅菌，一般121，0.15帕斯卡，1520min。3、在烘干箱

7、或恒溫箱內(nèi)3760，放置1224小時直至烘干。4、將要選的藥用蒸餾水按藥品使用治療量的比例配制成藥液，按5ml藥液3040個小圓紙片浸泡。5、將浸泡好的藥敏片用鑷子夾出，放到另一干燥平皿中，注意藥敏做的多時，放濕藥敏片不要完全重疊地放。這樣會使有的藥敏片在干燥過程中所沾的藥量不一，影響您對藥的評價。因為有的藥不溶，藥廠會加一些助溶劑，干燥過程中有的藥會析出。這時藥敏片疊放位置會影響所沾的藥量的。6、將盛濕藥敏片的平皿放到恒溫箱中，溫度37，放置1224小時，不同的藥干的時間也可能不一樣，所以自己需要視情況而定。在這個過程中要注意勤翻一下藥敏片，盡量不要讓它們沾在一起。7、藥敏片的儲藏：將烘干的

8、藥敏片分裝，標(biāo)上藥名和日期，儲存要注意防潮。短期可4冷藏保存36個月，長期要-20冷凍保存。六、培養(yǎng)基的制備：獸醫(yī)臨床上一般用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將成品營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基粉按說明取適量，加蒸餾水溶解，放入高壓滅菌鍋，121滅菌1520min，冷卻到50左右，傾注到已滅過菌的培養(yǎng)皿中，厚度約56mm，冷卻凝固后使用或放入4冰箱中備用。七、接種細菌：在對病死畜禽解剖時，切取一小塊肝、脾等器官，使用新鮮創(chuàng)面在培養(yǎng)基上涂滿，操作時就避免感染其他雜菌。八、粘貼藥敏紙片：將鑷子于酒精燈火焰上滅菌后略停，取藥敏片貼到培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼，可用鑷子輕輕按壓幾下藥敏紙片。每個培養(yǎng)皿所用藥敏紙片的數(shù)量

9、和分布可根據(jù)培養(yǎng)皿的大小確定，一般采用中央貼一片，周圍等距離貼5至6片。九、培養(yǎng)細菌：將貼上藥敏紙片的培養(yǎng)基置于37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1218h，觀察抑菌圈大小，判定結(jié)果。在涂有細菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內(nèi)向四周擴散，其濃度呈梯度遞減，因此在紙片周圍一定距離內(nèi)的細菌生長受到抑制，形成抑菌圈。按抑菌圈直徑大小判定敏感度高低，一般抑菌圈直徑在20mm以上為極敏，1520mm為高敏，1015mm為中敏，10mm以下為低敏，無抑菌圈為不敏。十、指導(dǎo)用藥：做藥敏試驗之后，應(yīng)選擇高敏藥物進行治療，也可選用兩種藥物協(xié)助使用，以減少耐藥菌株。因為藥液必須通過機體吸收才能達到一定效果，所以選用高敏藥物同時，還應(yīng)考慮藥物的吸收途徑，配合適宜的給藥方法，才能達到更好的治療效果。十一、注意事項：為了使試驗結(jié)果安全可靠，要注意以下幾個影響藥敏結(jié)果的因素：同一平板上細菌接種