1、醫(yī)學(xué)免疫學(xué) 課件模板-14,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：二、HLA表達(dá)異常與疾病的關(guān)系,二、HLA表達(dá)異常與疾病的關(guān)系：,HLA表達(dá)異常即細(xì)胞表面HLA分子質(zhì)與量的異常，可參與疾病發(fā)生。 （一）HLA-類抗原表達(dá)異常 在小鼠及許多人類腫瘤或腫瘤衍生的細(xì)胞株均已發(fā)現(xiàn)MHC-類抗原表達(dá)缺失或密度降低。若將類基因轉(zhuǎn)染給腫瘤細(xì)胞株，則惡變細(xì)胞可發(fā)生逆轉(zhuǎn)，且浸潤性與轉(zhuǎn)移性消失或降低。這可能是由于MHC-類抗原缺失的腫瘤細(xì)胞不能補TC識別并攻擊，從而導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸（sneaking through）。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：二、HLA表達(dá)異常與疾病的關(guān)系,二、HLA表達(dá)異常與疾病的關(guān)系：,（二）HLA-類抗原表達(dá)異常 器官特異性

2、自身免疫疾病的靶細(xì)胞可異常表達(dá)HLA-類抗原。諸如Graves病患者的甲狀腺上皮細(xì)胞、原發(fā)性膽管肝硬化患者的膽管上皮細(xì)胞、型糖尿病患者的胰島細(xì)胞等均可發(fā)現(xiàn)HLA-抗原異常表達(dá)。其機制可能是局部感染誘生IFN-，后者誘導(dǎo)類抗原表達(dá)。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：二、HLA表達(dá)異常與疾病的關(guān)系,二、HLA表達(dá)異常與疾病的關(guān)系：,類抗原乃抗原呈遞的效應(yīng)分子，一旦靶細(xì)胞異常表達(dá)類抗原，就可能以組織特異性方式把自身抗原呈遞給自身反應(yīng)性T細(xì)胞，從而啟動自身免疫反應(yīng)。激活的自身反應(yīng)性TH又可分泌大量IFN-，誘導(dǎo)更多的靶細(xì)胞表達(dá)類抗原，加重和延續(xù)自身免疫反應(yīng)，最終導(dǎo)致遷延不愈的自身組織損傷。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：三、HLA與排斥反

3、應(yīng),三、HLA與排斥反應(yīng)：,移植物存活率很大程度上取決于供者和受者之間HLA型別相合的程度。在腎移植中，各HLA座配合的重要性依次為HLA-DR、HLA-B、HLA-A。近年來特別重視HLA-DP對移植器官長期存活的意義。在骨髓移植中，為預(yù)防嚴(yán)重的移植物抗宿主反應(yīng)（graft versus host reaction,GVHR），一般要求從同胞中選擇HLA全相同的個體作為供者。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：三、HLA與排斥反應(yīng),三、HLA與排斥反應(yīng)：,此外，某些輸血反應(yīng)以及習(xí)慣性流產(chǎn)也與HLA不兼容所導(dǎo)致的排斥反應(yīng)有關(guān)。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：四、HLA與法醫(yī),四、HLA與法醫(yī)：,由于HLA復(fù)合體的高度多態(tài)性，在無關(guān)個

4、體間HLA表型全相同的機率極低，故HLA復(fù)合體被看作是伴隨個體終生的特異性遺傳標(biāo)記。借助HLA基因型和（或）表型檢測，可用于法醫(yī)上的個體識別。另外，由于HLA復(fù)合體具有高度多態(tài)性以及單倍型遺傳的特點，使HLA分型成為鑒定親子關(guān)系的重要手段。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：第五節(jié)HLA分型技術(shù),第五節(jié)HLA分型技術(shù)：,HLA分型并不只是一種應(yīng)用性的臨床檢測指標(biāo)，免疫遺傳學(xué)研究的發(fā)展，很大程度上依賴于以分型為主要手段的HLA多態(tài)性分析。60年代建立的并不斷完善的血清學(xué)及細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)主要側(cè)重于分析HLA產(chǎn)物特異性；80年代起建立的DNA分型方法則側(cè)重于基因的分型。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：一、血清學(xué)分型技術(shù),一、血清學(xué)分型技術(shù)

5、：,（一）HLA-類抗原的檢測 HLA-A、B、C抗原型別鑒定均借助微量淋巴細(xì)胞毒試驗（microlymphocytotoxicitytest）或稱補體依賴的細(xì)胞毒試驗（complement dependent cytotoxicitytest）。原理為取已知HLA抗血清加入待測外周血淋巴細(xì)胞，作用后加入免補體，充分作用后加入染料，在倒置顯微鏡下判斷結(jié)果，著染的細(xì)胞為死亡細(xì)胞，表示待檢淋巴細(xì)胞表面具有已知抗血清所針對的抗原。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：一、血清學(xué)分型技術(shù),一、血清學(xué)分型技術(shù)：,標(biāo)準(zhǔn)抗原清取自多次經(jīng)產(chǎn)婦或計劃免疫志愿者。 （二）HLA-DR、DQ抗原檢測 該二抗原分型方法同HLA-類抗原，但所

6、用抗血清須經(jīng)過血小板吸收以去除針對類抗原的抗體。另外，待測細(xì)胞須是經(jīng)純化的B細(xì)胞。 血清學(xué)分型是一項古老的技術(shù)，雖然近年來已建立許多新的分型技術(shù)，但血清學(xué)方法目前仍是HLA分型的基礎(chǔ)。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：二、細(xì)胞學(xué)分型技術(shù),二、細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)：,HLA-Dw特異性與HLA-DP特異性可分別通過純合分型細(xì)胞（homozygote typing cell,HTC）及預(yù)致敏淋巴細(xì)胞試驗（primed lymphocyte test,PLT）檢測。二種方法的基本原理均是判斷淋巴細(xì)胞在識別非已HLA抗原決定簇后發(fā)生的增殖反應(yīng)。由于分型細(xì)胞來源困難以及操作手續(xù)繁瑣，細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)下正逐漸淘汰。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：三、

7、HLA的DNA分型技術(shù),三、HLA的DNA分型技術(shù)：,上述傳統(tǒng)的HLA分型方法有許多不足之處，近年來國內(nèi)外已將HLA分型技術(shù)由抗原水平發(fā)展到基因水平。 （一）限制性片段長度多態(tài)性檢測技術(shù) 這是首先建立的對多態(tài)性進(jìn)行檢測的DNA分析技術(shù)。個體間抗原特異性來自氨基酸順序的差別，后者由編碼基因的堿基順序不同所決定。這種堿基順序的差別造成限制性內(nèi)切酶識位置及酶切位點數(shù)目的不同，從而產(chǎn)生數(shù)量和長度不一的DNA酶切片段。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：三、HLA的DNA分型技術(shù),三、HLA的DNA分型技術(shù)：,用特異性探針對整個基因組DNA酶切片段進(jìn)行雜交，即可分析限制性長度片段多態(tài)性（restriction fragmen

8、t lengthpolymorphism,RFLP）。一定的內(nèi)切酶組合所得到的HLA-RFLP可以和傳統(tǒng)方法測定的HLA特異性型別相關(guān)。80年代末發(fā)展起來的PCR（polymerase chain reaction）技術(shù)已被用于RFLP分析，即用等位特異限制酶裂解PCR擴增的片段，然后再進(jìn)行分析，從而大提高了靈敏度。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：三、HLA的DNA分型技術(shù),三、HLA的DNA分型技術(shù)：,（二）PCR/SSO技術(shù) 此法乃用人工合成的HLA型別特異的寡核苷酸序列作為探針，與待檢細(xì)胞經(jīng)PCR擴增的HLA基因片段雜交，從而確定HLA型別，PCR技術(shù)可將HLA復(fù)合體上指定基因片段特異性地擴增56個數(shù)量級

9、；而專門設(shè)計的SSO（序列特異的寡核苷酸sequencedpecific oligonucleotide）探針又能探測出等位基因間12個核苷酸的差異，故PCR/SSO技術(shù)具有靈敏度、特異性強、需樣本量少等優(yōu)點。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：三、HLA的DNA分型技術(shù),三、HLA的DNA分型技術(shù)：,（三）PCR/SSP技術(shù) 目前常規(guī)的HLA-DNA分型技術(shù)，包括上述的PCR/RFLP、PCR/SSO等，最終均需用標(biāo)記的特性探針與擴增產(chǎn)物進(jìn)行雜交，再分析結(jié)果。PCR/SSP方法用乃設(shè)計出一整套等位基因組特異性引物（sequence specific primer,SSP），借助PCR技術(shù)獲得HLA型別特異的擴增產(chǎn)

10、物，可通過電泳直接分析帶型決定HLA型別，從而大大簡化了實驗步驟。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：三、HLA的DNA分型技術(shù),三、HLA的DNA分型技術(shù)：,由于傳統(tǒng)方法在類抗原分型方面困難較大，故上述幾種基因分析型方法目前主要用于類基因座。此外，目前已建立的HLA基因分型技術(shù)還包括PCR單鏈構(gòu)像多態(tài)性分析（PCR-single strand conformational polymorphism，PCR-SSCP）和PCR 異源二聚體電泳多態(tài)即PCR指紋圖（PCr fingerprinting）分析。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：三、HLA的DNA分型技術(shù),三、HLA的DNA分型技術(shù)：,DNA分型技術(shù)的應(yīng)用，使HLA型別分析達(dá)

11、到了更精細(xì)的水平，并因此發(fā)現(xiàn)了更多的HLA多態(tài)性。HLA的DNA分型技術(shù)現(xiàn)已成為血清學(xué)方法的競爭者，并可能在不久的將來完全取而代之。 HLA是目前所知人體最復(fù)雜的遺傳多態(tài)性系統(tǒng)。HLA研究涉及免疫學(xué)、生物學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等多個學(xué)科，并已發(fā)展成為一個獨立的學(xué)科分支。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：三、HLA的DNA分型技術(shù),三、HLA的DNA分型技術(shù)：,迄今HLA研究已達(dá)到相當(dāng)深入的水平，并在諸多方面取得顯著進(jìn)展，包括HLA復(fù)合體結(jié)構(gòu)；HLA分子結(jié)構(gòu)及其表達(dá)的調(diào)控；HLA分子功能，尤其是在抗原處理、呈遞及T細(xì)胞識別中的作用；HLA的DNA分型及多態(tài)性研究；HLA與疾病的關(guān)系；HLA與移植的關(guān)系等。HL

12、A研究不僅使器官移植成為一種極有價值的治療手段，并給基礎(chǔ)與臨床免疫帶來了突破性進(jìn)展。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：三、HLA的DNA分型技術(shù),三、HLA的DNA分型技術(shù)：,已經(jīng)證實，HLA復(fù)合體中存在控制免疫應(yīng)答的基因以及HLA參與約束免疫細(xì)胞間相互作用，這表示HLA涉及生命活動的各個水平與多個方面。可以預(yù)期，對HLA的研究將繼續(xù)成為免疫遺傳學(xué)最活躍的部分；對HLA的應(yīng)用將擴展到基礎(chǔ)、臨床、預(yù)防醫(yī)學(xué)的各個領(lǐng)域。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：第六章免疫細(xì)胞膜分子（二）：白細(xì)胞分化抗原,第六章免疫細(xì)胞膜分子（二）：白細(xì)胞分化抗原：,機體免疫系統(tǒng)是由中樞淋巴器官、外周淋巴器官、免疫細(xì)胞和免疫分子所組成。免疫應(yīng)答過程有賴于免疫系統(tǒng)中

13、細(xì)胞間的相互作用，包括細(xì)胞間直接接觸和通過釋放細(xì)胞因子或其它介質(zhì)間接的作用。免疫細(xì)胞間或介質(zhì)與細(xì)胞間相互識別的物質(zhì)基礎(chǔ)是免疫細(xì)胞膜分子，包括細(xì)胞表面的多種抗原，受體和其它分子，細(xì)胞膜分子通常也稱為細(xì)胞表面標(biāo)記（cell surface marker）。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：第六章免疫細(xì)胞膜分子（二）：白細(xì)胞分化抗原,第六章免疫細(xì)胞膜分子（二）：白細(xì)胞分化抗原：,免疫細(xì)胞膜分子的研究對于深入了解免疫應(yīng)答的本質(zhì)以及臨床某些疾病的診斷、預(yù)防和治療都具有十分重要的意義。 免疫細(xì)胞分子的種類相當(dāng)繁多，主要有T細(xì)胞抗原識別受體（TCR）、B細(xì)胞抗原識別受體（BCR）、主要組織相容性抗原、白細(xì)胞分化抗原、粘附分子、

14、促分裂素受體、細(xì)胞因子受體、免疫球蛋Fe段受體以及其它受體和分子。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：第一節(jié)白細(xì)胞分化抗原,第一節(jié)白細(xì)胞分化抗原：,白細(xì)胞分化抗原是白細(xì)胞（還包括血小板、血管內(nèi)皮細(xì)胞等）在正常分化成熟不同譜系（lineage）和不同階段以及活化過程中，出現(xiàn)或消失的細(xì)胞表面標(biāo)記。它們大都是穿膜的蛋白或糖蛋白，含胞膜外區(qū)、穿膜區(qū)和胞漿區(qū)。有些白細(xì)胞分化抗原是以磷脂酰肌醇（inositol phospholipids,IP）連接方式“錨”在細(xì)胞膜上。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：第一節(jié)白細(xì)胞分化抗原,第一節(jié)白細(xì)胞分化抗原：,少數(shù)白細(xì)胞分化抗原是碳水化合物半抗原。白細(xì)胞分化抗原參與機體重要的生理和病理過程。例如：免疫應(yīng)答過

15、程中免疫細(xì)胞的相互識別，免疫細(xì)胞抗原識別、活化、增殖和分化，免疫效應(yīng)功能的發(fā)揮；造血細(xì)胞的分化和造血過程的調(diào)控；炎癥發(fā)生；細(xì)胞的遷移如腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：一、人白細(xì)胞分化抗原,一、人白細(xì)胞分化抗原：,80年代以來，由于單克隆抗體、分子克隆、基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞系等技術(shù)在白細(xì)胞分化抗原研究中得到廣泛深入的應(yīng)用，有關(guān)白細(xì)胞分化抗原的研究和應(yīng)用進(jìn)展相當(dāng)迅速。在世界衛(wèi)生組織（WHO）和國際免疫學(xué)會聯(lián)合會（IUIS）的組織下，自1982年至1993年先后舉行了五次有關(guān)白細(xì)胞分化抗原的國際學(xué)術(shù)討論會。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：一、人白細(xì)胞分化抗原,一、人白細(xì)胞分化抗原：,并應(yīng)用以單克隆抗體鑒定為主的聚類分析法，將識

16、別同一分化抗原的來自不同實驗室的單克隆抗體歸為一個分化群（clusterofdifferentiation,CD）。在許多場合下，抗體及其識別的相應(yīng)抗原都用同一個CD序號。 表6-1 抗人白細(xì)胞分化抗原McAb分組 分組CD編號T細(xì)胞CD1CD8，CD27，CD28，CD60，CD98CDw101B細(xì)胞CD10,CD19CD24,CD37,CD39,CD40,CD72CD86活化細(xì)胞CD25,CDw26,CD30,CD69CD71,CD95CD97髓樣細(xì)胞CD9,CD11bCD17,CD31CD36,CD64CD68,CD87CD93,CD115NK/非譜系細(xì)胞CD11a,CD18,CD29,

17、CD38,CD43,CE45CD48,CD52CD59,CD94血小板CD41，CD42，CD63，CD107內(nèi)皮細(xì)胞CD105，CD106，CDw109粘附分子CD11a,CD44,CD49CD51,CD61,CD62,CD102CD104,CDw108細(xì)胞因子受體CDw116,CD117,CD120CD122,CD124,CD126CDw128,CDw130 注：CD是流水編號，但CD110CD114、CD118、CD123，CD125和CD129暫缺，CD67和CD66b是重復(fù)的； 凡CD中帶有W抗原或抗體如CDw108,CDw109尚需繼續(xù)進(jìn)行全面鑒定； 有些CD抗原又可進(jìn)一步劃分為不同的成分，一般用小寫英文字母表示； CD九個組劃分的特色性是相對的，實際上，許多CD抗原的細(xì)胞分布較為廣泛。,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：一、人白細(xì)胞分化抗原,一、人白細(xì)胞分化抗原：,（一）CD的分類 迄今為止，CD的序號已從CD1命名至CD130（見附表）?？纱笾聞澐譃門細(xì)胞、B細(xì)胞、激活細(xì)胞、髓樣細(xì)胞、NK/非譜系細(xì)胞