1、實(shí)驗(yàn) DNA的粗提取與鑒定目的要求1.了解實(shí)驗(yàn)原理。2.學(xué)會DNA的粗提取和鑒定的方法，觀察提取出來的DNA物質(zhì)。3通過本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作能力和觀察能力。實(shí)驗(yàn)原理1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度的變化而改變的。當(dāng)NaCl的物質(zhì)的量濃度為0.14mOlL時,DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。2.DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。3.DNA遇二苯胺（沸水?。境伤{(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。注意事項(xiàng)1.步驟3析出含DNA的黏稠物中，蒸餾水要

2、沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入，不能一次快速倒入。2.實(shí)驗(yàn)中有多個步驟都要用玻璃棒進(jìn)行攪拌，但是在不同的步驟中玻璃棒的用法不同。實(shí)驗(yàn)用具雞血細(xì)胞液（510mL）；體積分?jǐn)?shù)為95的冷酒精，蒸餾水，質(zhì)量濃度為01gmL的檸檬酸鈉溶液，物質(zhì)的量濃度分別為2molL和0015molL的NaCl溶液，二苯胺試劑；燒杯（100mL，1個， 50mL， 500mL，各2個），漏斗，試管（20mL，2個），玻璃棒，滴管，量筒（100mL，1個），紗布，鑷子，濾紙，鐵架臺，鐵環(huán)，三角架，酒精燈，石棉網(wǎng)，載玻片，試管夾。課時安排一課時課前準(zhǔn)備 制備雞血細(xì)胞液，方法是：將質(zhì)量濃度為0.1gmL的檸檬酸鈉溶液100mL，置于50

3、0mL燒懷中，注入新鮮的雞血（約180mL），用玻璃棒攪拌，使其充分混合，以免凝血。靜置于冰箱內(nèi)一天，使血細(xì)胞自行沉淀。（也可以用離心機(jī)離心2 min（轉(zhuǎn)速1000轉(zhuǎn)/分）。用吸管吸去上清液。板書（提前寫好）DNA的粗提取與鑒定 實(shí)驗(yàn)原理： 1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。 2.用冷酒精提取出含雜質(zhì)較少的DNA。 3.DNA在沸水浴時被二苯胺染成藍(lán)色。方法步驟：1提取細(xì)胞核物質(zhì)：順時針方向攪拌，稍快，稍重。 5 min2溶解DNA：3析出含DNA的黏稠物：蒸餾水300mL，逆時針方向攪拌，緩慢4過濾：取黏稠物5再溶解：順時針方向攪拌，較慢。3 min6過濾：取濾液。7提取出含雜質(zhì)較少的D

4、NA，逆時針方向攪拌，稍慢。5 min8DNA的鑒定：沸水浴5min教學(xué)過程引言：上節(jié)課我們通過幾個驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，證明了DNA是主要的遺傳物質(zhì)。那么DNA是什么樣的物質(zhì)呢？今天我們就通過實(shí)驗(yàn)將它提取出來，進(jìn)行觀察和鑒定。首先請一位同學(xué)說一說實(shí)驗(yàn)原理。（答：略）問：通過預(yù)習(xí)，你知道選用什么實(shí)驗(yàn)材料？課前準(zhǔn)備是怎樣做的？（答：雞血細(xì)胞液。制備方法：略。）問：在制備雞血細(xì)胞液時，所用的檸檬酸鈉有什么作用？（答：防止血液凝固。）制備過程中，一定要用剛宰殺的雞的新鮮血，并且要與抗凝劑充分混合，防止凝血。我們采用靜置一天的方法，獲得雞血細(xì)胞液。下面大家在動手做實(shí)驗(yàn)之前先要明確幾個需要注意的問題：1要嚴(yán)格按照

5、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)的方法步驟去操作。2實(shí)驗(yàn)中有多個步驟都要用玻璃棒進(jìn)行攪拌，使用時玻璃棒不要碰到燒杯底，在不同的步驟中玻璃棒的用法不同，每一步的用法參照黑板上的指導(dǎo)去操作。3在DNA的鑒定中，所用的二苯胺是一種有毒性的試劑，大家在使用時注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位，也不要近距離觀察。下面在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過程中，要思考每一操作步驟要達(dá)到什么目的。（教師巡視，指導(dǎo)）在進(jìn)行步驟1時，利用攪拌的5分鐘做如下提問：問：為什么要加蒸餾水？加入蒸餾水后細(xì)胞將會怎樣？（答：讓細(xì)胞內(nèi)溶液的濃度大于周圍溶液的濃度，細(xì)胞會吸水以至脹破。）問：為什么要用力攪拌？（答：可以加速血細(xì)胞和細(xì)胞核的破裂。）所以下一步驟過濾將濾去

6、的是細(xì)胞膜和核膜等物質(zhì)。（在進(jìn)行步驟3時，要向全班明確。）這一步驟是這個實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵，注意加蒸餾水的方法和使用玻璃棒的方法，千萬不能太快太猛，防止打碎DNA。（教師巡視，指導(dǎo)）觀察濾取出來的黏稠物的顏色。有的同學(xué)提取的黏稠物較少，原因可能是在溶解DNA時不充分，也可能是析出黏稠物時攪拌的快了。（教師巡視，指導(dǎo)）將黏稠物再溶解時一定要充分，多攪拌。以免有DNA損失。（教師巡視，指導(dǎo)。）加入冷酒精時動作要慢。當(dāng)玻璃棒上出現(xiàn)絲狀物纏繞時，繼續(xù)慢慢攪拌。至不再增加時，取出吸干上面的水分。仔細(xì)觀察絲狀物呈什么顏色？（答：黃色。）這些絲狀物要用二苯胺鑒定。使用二苯胺時要注意不要接觸到藥液。進(jìn)行沸水浴時，

7、在實(shí)驗(yàn)室較為通風(fēng)的地方集體進(jìn)行。（利用沸水浴的5 min）問：步驟3中加入蒸餾水的目的？與步驟1有什么區(qū)別？（答：步驟3中加蒸餾水是使NaCl溶液的濃度逐漸降至014molL，使DNA的黏稠物析出。而步驟1加蒸餾水是為了讓細(xì)胞吸水脹破。）很好。問：步驟7為什么要加50mL的冷酒精？（答：因?yàn)镈NA不溶于冷酒精，而其他物質(zhì)可以溶解在酒精中，使含雜質(zhì)較少的DNA絲狀物可以析出。懸浮于溶液中。）現(xiàn)在大家從水浴鍋中拿出試管，比較兩個試管中溶液的顏色有什么不同？（答：有絲狀物的試管變成藍(lán)色，另一試管還是原來顏色。）問：這一鑒定結(jié)果說明什么問題？（答：提取出的絲狀物是DNA。）那么你看到的絲狀物的粗細(xì)是不是DNA分子的直徑呢？（答：不是。DNA分子直徑只有2nm。絲狀物是多個