1、葡萄糖氧化酶法測(cè)定血清葡萄糖,實(shí)驗(yàn)九,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?(1)了解血糖的概念。 (2) 掌握血糖的測(cè)定方法葡萄糖氧化酶法。,What？,血糖及正常血糖水平:,血糖：指血液中的葡萄糖.,正常血糖濃度： 空腹波動(dòng)在3.896.7mmol/L（70110mg/dl） 餐后2h內(nèi)應(yīng)7.8mmol/L（140mg/dl）。,血糖的來(lái)源、去路,血糖水平恒定的生理意義,保證重要組織器官的能量供應(yīng)，特別是某些以葡萄糖供能的組織器官。 腦組織不能利用脂酸，正常情況下主要以來(lái)葡萄糖供能； 紅細(xì)胞沒有線粒體，完全通過糖酵解獲能； 骨髓及神經(jīng)組織代謝活躍，經(jīng)常利用葡萄糖供能。,測(cè)定方法,無(wú)機(jī)化學(xué)法： Folin-Wu法,

2、有機(jī)化學(xué)法：鄰甲苯胺法,酶法：葡萄糖氧化酶法,血糖測(cè)定的常用方法,HOW？,方法 類型 原 理 用途及備注 磷鉬酸法 定量 G+Cu2+Cu2O 穩(wěn)定、準(zhǔn)確、但對(duì) （Folin-Wu） 分光 Cu2O +磷鉬酸試劑 藍(lán)色鉬化合物 葡萄糖無(wú)特異性， （430nm） 受血中非糖還 原物 質(zhì)的影響。 鄰甲苯胺法 定量 G+鄰甲苯胺藍(lán)綠色的席弗(Schiff)堿 較Folin-Wu法特異 （630nm） 但不及酶法。 D-甘露糖能與鄰甲 苯胺反應(yīng)，生成類 似吸收光譜，造成 正誤差。,（一）化學(xué)法,酶法分析是指用酶作為工具定量測(cè)定某種物質(zhì)含量的分析方法。定量分析的目標(biāo)可以是酶的底物，輔酶，也可以是酶的激

3、活劑或抑制劑。,（二）酶 法,酶法分析的主要方法： 單酶反應(yīng)定量法和偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法,單酶反應(yīng)定量法：指用一種酶為工具酶定量測(cè)定某種物質(zhì)的方法。 偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法：當(dāng)單酶反應(yīng)底物或產(chǎn)物反應(yīng)底物或產(chǎn)物的物理化學(xué)手段無(wú)法區(qū)分時(shí)，還可以借助另一種酶作為指示酶，通過偶聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行定量分析。,方法 類型 原 理 用途及備注 己糖激酶 定量 G+ATPG-6-P+ADP 血清尿液腦脊液、 （HK）法 分光 G-6-P + NADP+ 公認(rèn)參考方法 動(dòng)態(tài) GA-6-P + NADPH 操作簡(jiǎn)便，特異 終點(diǎn) （340nm） 性和靈敏性均高 推薦常規(guī)方法 葡萄糖氧 同上 G+O2 GA+H2O2 化酶（POD）

4、H2O2 + 染料有色染料 偶聯(lián)法 （還原型） （氧化型） 可制試紙片定量 （Trinder） （4-氨基安替比林+酚 半定量篩選試驗(yàn) 紅色琨類化合物505nm）,葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法原理,（1）葡萄糖O2H2O,（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚,葡萄糖酸H2O2,葡萄糖氧化酶（GOD）,H2O 紅色醌式物質(zhì),過氧化物酶 （POD）,Trinder反應(yīng),505nm,光吸收法測(cè)定,相對(duì)血糖濃度,（1）取3支試管，按下表加入試劑:,實(shí)驗(yàn)步驟：,充分混勻，37 水浴中保溫20min；,冷卻至室溫后，505nm處比色,比色方法：以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)定管吸光度值。,（2）計(jì)算 依據(jù)朗伯-

5、比爾定律： A=KLC 血清葡萄糖= （mmol/L） 參考值： 空腹血清葡萄糖濃度:3.896.11mmolL,標(biāo)準(zhǔn)液濃度,注意事項(xiàng)：,本法用血量甚微，操作中應(yīng)直接加標(biāo)本至試劑中，再吸試劑反復(fù)沖洗試管。 此法可直接測(cè)定腦脊液葡萄糖的含量，但不能直接用于測(cè)定尿液葡萄糖含量。因?yàn)槟蛞褐心蛩岬雀蓴_物質(zhì)濃度過高，可感染過氧化物酶發(fā)硬，造成結(jié)果假性偏低。 嚴(yán)重黃疸、溶血及乳糜樣血清應(yīng)先制備無(wú)蛋白血濾液，然后再進(jìn)行測(cè)定。,臨床意義：,生理性高血糖：攝入高糖食物，情緒緊張 病理性高血糖： 糖尿病 內(nèi)分泌腺功能障礙 顱內(nèi)壓增高 脫水引起高血糖 生理性低血糖：見于饑餓和劇烈運(yùn)動(dòng) 病理性低血糖：特發(fā)性功能性低血糖，依次是藥源性，肝源性和胰島素瘤等。,調(diào)節(jié)血糖水平的激素：胰島素、胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素。,思考題：,本實(shí)驗(yàn)原理為酶促化學(xué)反應(yīng)，為何未加終止劑終止酶的反應(yīng)？ 本實(shí)驗(yàn)涉及顯色反應(yīng)，該反應(yīng)與血清堿性磷酸酶活力測(cè)定中的顯色反應(yīng)有何異同？ 為何不同檢測(cè)方法所提供的