1、島津液相色譜儀維護教材,島津企業(yè)管理（中國）有限公司 分析中心,液相色譜故障排除經(jīng)驗 液相色譜常見問題,第一部分,液相色譜簡易流程圖,輸液泵,進樣器,色譜柱,柱溫箱,檢測器,溶劑,數(shù)據(jù)處理,廢液,1.等度系統(tǒng),儲液瓶,脫氣機,泵單元,手動進樣器,色譜柱,檢測器,廢液瓶,1,2,3,4,5,6,7,2.低壓梯度系統(tǒng),1,2,3,4,5,6,7,8,9,3.高壓梯度系統(tǒng),1,2,3,4,5,6,7,8,液相色譜故障排除經(jīng)驗,故障的確定 至少要重復出現(xiàn)兩次以上 初步判斷故障引起的原因 方法或硬件 由經(jīng)驗或平時的積累確定故障原因 平時做好觀察和記錄 當不能確認故障原因時 采用排除法逐一考察可能引起故障

2、的因素 確定故障能否自行處理 不要貿(mào)然拆卸不熟悉的部件,常見故障因素,儀器環(huán)境： 實驗室的溫度、濕度、酸度等 實驗室震動、灰塵等問題 電源及地線問題 使用條件： 流動相（pH值、均勻度、氣泡等） 樣品（樣品分解、氧化、樣品溶劑等） 色譜柱（污染、堵塞、塌陷等） 硬件問題： 輸液泵 進樣器 檢測器,日常保養(yǎng),-做好平常的保養(yǎng)可以有效的降低故障的發(fā)生率 -做好平常的保養(yǎng)可以延長儀器的使用壽命 常做的保養(yǎng) 保證儀器的使用環(huán)境（經(jīng)常清潔儀器，尤其是灰塵） 泵的保養(yǎng)（使用緩沖鹽時要清洗柱塞，水和鹽不要長期 保存在泵里） 進樣器要經(jīng)常清洗，避免污染物吸附或堵塞管路 盡量進行樣品前處理 色譜柱要定期清洗，保

3、證柱效及使用壽命 系統(tǒng)中不要長期保存水和鹽，長時間不用時應將儀器所 有部分全部更換為70以上的甲醇，避免細菌的滋生及 鹽的析出。,液相色譜常見問題,壓力異常（偏高、波動） 漏液 保留時間漂移 基線問題（漂移、噪聲） 峰形異常,壓力,壓力是液相色譜中最重要的指標，要經(jīng)常關(guān)注壓力的變化。 保留時間的變化經(jīng)常是由于壓力問題引起的。 不同溶劑即使在相同流速和溫度的情況下壓力也是不同的。 記下儀器正常狀態(tài)時，在固定條件下（流動相、流速、溫度等）的 壓力顯示值。,壓力高,首先要確認是色譜柱堵塞還是系統(tǒng)堵塞 色譜柱堵時，確認可能造成堵塞的樣品的性質(zhì)，相應選擇合適的清洗溶劑。 系統(tǒng)堵塞，首先應確認是哪一部份堵

4、塞，依據(jù)情況由后向前進行排除。,容易發(fā)生堵塞的部件,保護柱及色譜柱 線路過濾器 混合器過濾組件 管路連接處 進樣器 檢測器流通池,壓力低,如果壓力為零： 泵頭中沒有液體，充滿氣泡 單向閥完全堵死 柱塞桿折斷 壓力傳感器損壞(流動相流動正常，但無壓力) 如果有壓力但是壓力比正常時低： 漏液 單向閥堵塞,壓力波動,壓力在短時間內(nèi)劇烈波動。,泵頭中有氣泡 單向閥臟 柱塞密封圈漏液,經(jīng)常漏液的部件,泵： 柱塞密封圈 排液閥 手動進樣器：轉(zhuǎn)子密封圈磨損 檢測器： 流通池窗口（墊片損壞、透鏡破碎） 接頭處漏液：（接頭松動，接頭臟，接頭磨損，部件不匹配）,保留時間不穩(wěn)定,吸濾頭臟 泵輸液不正常（壓力波動、氣

5、泡等） 流動相組分變化 流動相緩沖能力不夠 色譜柱平衡時間不夠 柱溫的變化 柱子問題,噪音大,流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成 漏液 流動相、泵、檢測器流通池內(nèi)有氣泡 流動相各溶劑不相溶或混和不均勻 檢測池能量不足 流通池被污染 溫度影響（檢測器和柱溫差別太大） 其他電子設(shè)備的影響或電源、地線等,基線漂移,流動相污染，變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成 流動相不均勻(脫氣，使用純度更高的溶劑) 溫度波動 系統(tǒng)平衡時間不夠 流通池被污染或有氣泡 流通池窗口破裂,峰形問題,死體積太大 柱子被污染或堵塞 色譜柱塌陷 色譜柱化學或次級保留（硅羥基效應或重金屬污染） 流動相緩沖不足或不合適 樣品溶劑選擇不當，與流

6、動相之間極性差異太大 樣品過載（濃度或體積） 柱溫過低,鬼峰,流動相被污染 進樣閥殘余峰 樣品中未知物 色譜柱中的污染物,日常使用注意點 硬件基礎(chǔ)知識 容易出故障的部件及常見故障的排除,第二部分,液相系統(tǒng)維護流程圖,色譜柱,一、輸液部分,管線選擇,材料 不銹鋼 Teflon PEEK (聚醚醚酮) 尺寸 0.1 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.3 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.5 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.8 mmI.D. x 1.6 mmO.D.,管線材料,不銹鋼 (可用于所有連接) 能承受幾千 kgf/cm2 壓力 酸性或高濃度鹽環(huán)境中易腐蝕 (

7、尤其在pH小于2時) PEEK (可用于所有連接) 能承受高達 250 kgf/cm2壓力 可在整個pH范圍(pH 1-14)內(nèi)使用 不適用于高溶解性溶劑如氯仿等 Teflon (用于柱后阻尼管、反應管和排液管) 化學惰性大 能承受 5 kgf/cm2 壓力,接頭,不銹鋼接頭 / 墊圈 主要用于輸液泵、進樣器的連接 能承受 400 kgf/cm2壓力 一旦固定，墊圈不可再動 PEEK接頭 主要用于色譜柱、檢測器的連接 易于安裝 能承受 250 kgf/cm2壓力 容易產(chǎn)生死體積,不銹鋼接頭,墊圈,PEEK接頭,死體積,死體積可能會引起分離度變差和重現(xiàn)性變差等問題.,管線,公螺母,死體積,好的連

8、接,差的連接,選擇原則 1、采用 “HPLC” 級溶劑 2、避免使用會引起柱效損失或保留特性變化的溶劑 3、對試樣有適宜的溶解度 4、溶劑粘度要小 5、與檢測器相匹配,流動相,溶劑的等級 HPLC級 優(yōu)級純 分析純,都經(jīng)過蒸餾和0.45 m過濾(除纖維毛,未溶解的機械顆粒）,優(yōu)級純的純度比分析純大,但里面含有防腐劑和抗氧化劑,HPLC級經(jīng)過0.22 m過濾,且除去有紫外吸收的雜質(zhì),微量分析、梯度洗脫,流動相,水 / 甲醇梯度 ODS 柱,鬼峰,梯度曲線,1 mL/min, 10 mins 內(nèi)，0-100% 甲醇，在最高點保持5 mins.,鬼峰的出現(xiàn),流動相,水的等級 純水 蒸餾水 去離子水,

9、波長 (nm),純水,去離子水,因為不純物的存在，去離子的吸光率較高,純水中去除了無機和有機的污染物,吸光率,流動相,選擇緩沖液的步驟 1 確定最佳分離狀態(tài)時的流動相pH 2 .選擇具有與流動相的pH相近的pKa 的緩沖液（即使?jié)舛认∫簿?有較強能力的緩沖液） 3 .確認檢測波長下緩沖液是否有大的吸收 （在波長210 nm附近進行檢測時，不能用醋酸和檸檬酸的緩沖液）,流動相,代表性弱酸的pKa,流動相,使用前必須過濾 使用后一定要進行清洗 ，以免造成腐蝕、磨損、阻塞: 用含5%甲醇的水溶液沖洗30 min（1 mL/min），再用甲醇沖洗30 min 用純水沖洗泵頭清洗管路 易受到細菌和霉菌的

10、影響,不能直接用有機溶劑 沖洗緩沖鹽溶液,緩沖液的使用,流動相的更換,不互溶的流動相不能直接更換,緩沖鹽不能直接用有機溶劑更換,水,正己烷,異丙醇,緩沖鹽,有機溶劑,水,過濾：0.45 m或更小孔徑濾膜 目的：除去溶劑中的微小顆粒，避免堵塞色譜柱，尤其是使用無機鹽配制的緩沖液時。 濾膜類型： 聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽。 醋酸纖維濾膜： 不適用于有機溶劑，特別適用于水基溶劑。 尼龍66濾膜： 適用于絕大多數(shù)有機溶劑和水溶液，可以 用于強酸， 不適用于二甲基甲酰胺。 再生纖維素濾膜：蛋白吸收低，同樣適用于水溶性樣品和有 機溶劑,溶劑前處理,吸濾頭,吸濾頭 部件號：228-45707-

11、91,吸濾頭 部件號： 228-21984-01,吸濾頭,材料：不銹鋼(或陶瓷)燒結(jié)，孔徑10 m 故障：堵塞 表現(xiàn)：管路中不斷有氣泡生成 措施：用異丙醇（或5稀硝酸），超聲波清洗， 再用蒸餾水 清洗,泵工作示意圖,流動相入口,流動相出口,LC-20AT 串聯(lián)式柱塞往復泵,LC-20AD 并聯(lián)式微體積柱塞往復泵,柱塞泵的基本結(jié)構(gòu),LC-10ATvp,LC-10ADvp,單向閥,單向閥,單向閥,LC-20AT 輸 液 泵,串聯(lián)式柱塞往復泵,選配件支架,壓力傳感器,泵頭,主進口單向閥,泵頭固定座,輔助進口單向閥,LC-20AD 輸 液 泵,并聯(lián)式微體積柱塞往復泵,選配件支架,進口單向閥,出口單向閥

12、,進液口,泵頭固定座,泵頭,壓力傳感器,單向閥,單向閥結(jié)構(gòu),球座,單向閥工作原理,單向閥結(jié)構(gòu),請不要分解閥心A和閥心B 重新組裝后性能不被保證，輸液可能不穩(wěn)定,注意：,LC-20AT主入口閥 部件號:228-45704-92,LC-20AD入口閥 LC-20AT副入口閥 部件號: 228-45704-91,LC-20AD出口閥 部件號: 228-45705-91,單向閥,LC-10ADvp出口閥 LC-10ATvp出口閥 部件號: 228-34976-91,LC-10ADvp入口閥 部件號: 228-39093-92,LC-10ATvp入口閥 部件號: 228-32166-91,LC-2010

13、 出口閥 部件號: 228-37147-92,LC-2010 入口閥 部件號: 228-37149-91,單向閥清洗-污染,故障：寶石球或球座受污導致密封不好 表現(xiàn)：系統(tǒng)壓力波動大 措施： 打開排液閥，用注射器推異丙醇清洗 取下柱子，換上阻尼管，以異丙醇為流動相輸液 拆下單向閥，放入異丙醇中，超聲波清洗,注意：超聲清洗時開口端向上放置。,故障：寶石球粘附于墊片 表現(xiàn)：泵無法吸液或排液，流路不通 措施：1)用針筒抽出口單向閥以產(chǎn)生負壓，使寶石球與墊片分開 2)打開排液閥，用注射器推異丙醇清洗 3)拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超聲波清洗,單向閥清洗-粘結(jié),柱塞密封圈,柱塞密封圈 LC-20AD

14、 LC-20AB LC-10ADvp LC-2010 部件號： 228-35146,柱塞密封圈 LC-20AT LC-10ATvp 部件號：228-35145,取下和安裝 柱塞密封圈工具,柱塞密封圈的更換,故障：密封圈磨損導致密封不良 現(xiàn)象：系統(tǒng)壓力波動大或漏液 措施：更換密封圈 注意點： 1、拆卸泵頭前，柱塞桿復位 （PSET） 2、新密封圈用異丙醇浸泡15 min 后再安裝,流動相,泵頭清洗管路,柱塞桿,密封圈,柱塞桿,柱塞桿 LC-10ADvp用 部件號：228-35281-91,柱塞桿 LC-10ATvp用 部件號：228-35009-92,柱塞桿 LC-20AD/LC-20AB用 部

15、件號：228-35281-95,柱塞桿 LC-20AT用 部件號：228-35009-93,柱塞桿 LC-2010用 部件號：228-35281-93,柱塞桿 LC-2010HT用 部件號：228-35281-95,柱塞桿更換,更換柱塞密封圈后仍然頻繁漏液時 柱塞密封圈使用壽命短時 柱塞桿損傷時,柱塞隔膜,更換柱塞時，應同時更換隔膜。 隔膜損壞導致泵頭后部漏液時，應更換隔膜。 注意：只有D系列泵有隔膜， T系列泵由于設(shè)計不同，沒有隔膜。,隔膜 LC-20AD/LC-20AB/LC-10ADvp/LC2010用 部件號：228-32784-91,線路過濾器,故障：堵塞 現(xiàn)象：系統(tǒng)壓力偏高 措施：

16、異丙醇（或5稀硝酸）， 超聲波清洗 判斷依據(jù)：關(guān)閉排液閥，斷開出口管路，設(shè)定流速1 mL/min，如壓力0.3 MPa，則堵塞。,線路過濾器 （10Avp、20A） 部件號：228-48607-91,線路過濾器組件 部件號：228-35871-91(LC-2010) 228-35871-96(LC-2010HT),線路過濾器安裝螺母 （10Avp、20A） 部件號：228-39082-91,過濾器的更換,舊過濾器的取出,新過濾器的安裝,排液閥漏液,故障：排液閥墊圈損傷或密封不良 現(xiàn)象：打開排液閥進行排氣時，從裝有排液閥的螺口處漏液 措施：排液閥手柄按逆時針方向旋轉(zhuǎn)取下 確認墊圈表面有否損傷。

17、有損傷，進行更換； 附有臟物，擦洗掉，再確認。,LC-20A系列泵 部件號：228-45574-91,LC-10Avp系列泵 部件號：670-11518,排液閥,混合器,混合器不同體積的連接方法,混合器過濾組件,常見故障：堵塞 混合器堵塞往往是由于混合器過濾組件堵塞引起的。 處理方法： 按圖中結(jié)構(gòu)卸下過濾組件，5%稀硝酸或其他溶劑超聲清洗或更換新的組件 注意：請勿隨意拆卸其它部分,標準或半微量混合器用 (10Avp、20A） 部件號：228-18872-93,二、進樣部分,進樣器,自動進樣器 手動進樣器(7725/7725i） 原理：（六通閥） 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入,7725

18、i手動進樣閥,手動進樣器的原理圖,MBB流路,MBB設(shè)計截面圖,MBB（Make Before Break）設(shè)計使切換過程中，流動相不間斷流動。 流動相連續(xù)流過轉(zhuǎn)子密封槽和MBB流路直到切換到位,MBB流路切換示意圖,7725/7725i手動進樣器結(jié)構(gòu)圖,定子密封 部件號：228-32211-31,轉(zhuǎn)子密封 (Vespel)部件號：670-12098-51 (Tefzel)部件號：670-12098-56,轉(zhuǎn)子密封適用范圍,進樣量和檢測器響應的關(guān)系示意圖,進 樣 量,定量環(huán)體積一半,三倍定量環(huán)體積,全量注入,部分注入,響應值,交叉污染的原因,紅色表示殘留樣品,進樣口清洗,（1）將附件進樣口清洗

19、器連接在針管上， 不應使用微型注射器清洗。 （2）清洗液（試樣溶劑或不含鹽的流動相 等）用注射器吸入 （3）在進樣狀態(tài)下，將針孔清洗器壓接在 針導管上，流入清洗液1ml左右 （4）使用緩沖鹽后，用水清洗流路和針孔 （5）清洗液可能反噴，因此注射器應慢慢 地推壓,手動進樣器,操作注意點： 1）進樣時，進樣針應插到底 2）不使用時將針頭留在進樣器內(nèi) 3）進樣應使用液相色譜專用平頭進樣針 4）樣品溶液pH小于10, 常用密封墊的Vespel材質(zhì)，適用pH10, 否則換Tefzel或PEEK材質(zhì)的密封墊pH 0-14 5）清洗應使用專用針口清洗器,故障處理,定子面漏液 調(diào)緊壓力調(diào)整螺釘，如果不成功則應

20、更換轉(zhuǎn)子或定子面組件 針密封漏液從進樣口取出針，用鉛筆的橡皮頭將針導管輕輕壓入,自動進樣器,Purge功能 儀器開機時，清除管路中可能存在的氣泡； 清洗液改變時，替換清洗液； 建議時間設(shè)定為25min。 Rinse 功能 樣品進樣過程中自動清洗針外壁，也可手動進行額外清洗。 樣品量 樣品量應不少于樣品瓶容積的1/3 ；1.5mL樣品瓶底部2mm處液體剩余量約150uL。,自動進樣器使用,自動進樣器清洗液選擇,反相 色譜模式： 50%甲醇/50%水，為避免發(fā)生沉 淀，應選擇不含鹽的清洗液。若反相采用100有機相，采用100甲醇作為清洗液。 離子交換色譜模式： 100緩沖鹽流動相，選擇純化水作為清

21、洗液。 正相色譜模式、GPC： 使用與流動相相同的溶劑作為清洗液。,執(zhí)行Z-HOME操作，關(guān)掉電源，取出樣品架，取下面板和和高壓閥流路，用手擰松針密封圈并取下它。,針密封（PEEK) 部件號：228-42325-01,自動進樣器針密封的更換,三、分離部分,色譜柱的日常保養(yǎng),購買新柱后一定要仔細閱讀說明書，確認柱的使用條件以及清洗再生步驟，按照說明書條件測試色譜柱柱效，記錄使用壓力 定期檢測柱壓和柱效 不同流動相之間轉(zhuǎn)換時應注意溶劑的互溶性 確認樣品不會在流動相中析出或帶有固體不溶物，請使用0.45 m或0.22 m的一次性濾膜過濾樣品，或者進行前處理。 為了延長色譜柱使用壽命，請使用保護柱。

22、定期用合適的溶劑清洗或再生色譜柱 長期不用時，清洗干凈后，使用柱子說明書中指明的溶劑保存。柱子要從儀器上卸下并用堵頭密封后保存。 定期用合適的流動相清洗保存的柱子，避免干涸。,峰的變形,根部變寬,有肩或分叉,峰變形的常見原因,1. 樣品劣化 生成氧化物、分解物 樣品被污染 2. 柱子劣化 柱進口污染 柱內(nèi)存在空隙 3. 方法問題 樣品過載 溶解樣品的溶劑選擇不當 二次保留效應,所有的峰都產(chǎn)生有肩峰或分叉時則為柱子劣化,色譜柱柱效降低原因,濾片或填料堵塞 樣品或流動相中雜質(zhì)吸附 機械振動產(chǎn)生空隙 填料變性,濾片或填料堵塞,使用保護柱 緩沖液和溶劑使用0.45 m濾膜過濾 樣品溶液使用0.45 m濾膜過濾 措施： 反向連接色譜柱，使用清洗溶劑以小流量送液 打開柱頭，清洗或更換濾片,樣品或流動相中雜質(zhì)吸附,雜質(zhì)會產(chǎn)生拖尾峰 使用高溶解性溶劑清洗色譜柱,僅幾毫米深度會被污染,色譜柱,取出污染填料，裝填新的填料,機械振動產(chǎn)生空隙,不要撞擊色譜柱，如：色譜柱掉落或柱壓急劇變化 。,溶解樣品的溶劑選擇不當,最好不要選擇高溶解性的試劑作為溶解樣品的溶劑,最好注入少量樣品,溶解性效應,低溶解性溶劑,高溶解性溶劑,四、檢測部分,紫外檢測器光路圖,紫外檢測