1、第四節(jié) 干化學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介,干片技術(shù),VITROS MicroSlide (干片)技術(shù),介紹三種干片 定義干片 分層, 功能, 和測(cè)量技術(shù) 敘述 VITROS 干片 在操作中與常規(guī)方法相比的優(yōu)勢(shì),1970 年：化學(xué)干片技術(shù)起源于1970年的伊斯特 曼-柯達(dá)公司 1971年：借鑒普通臨床生化反應(yīng)序列 生產(chǎn)出葡萄糖分析干片 1976年：干片獲得專利 1978年：推出專利的干片生化技術(shù) 1980年：FDA批準(zhǔn)五個(gè)分析產(chǎn)品可以進(jìn)入市場(chǎng) 1995年：推出一些免疫產(chǎn)品,干片的歷史,干片分類,CM/RT,PM,IR,比色/速率法干片 電極法干片 免疫-速率法干片,通過(guò)測(cè)定干片顏色變化來(lái)確定化合物濃度 終點(diǎn)法、雙

2、波長(zhǎng) 測(cè)定法，固定時(shí)間法、 速率法,終點(diǎn)法,應(yīng)用終點(diǎn)法進(jìn)行測(cè)試的項(xiàng)目 白蛋白干片（ALB） 血氨干片（AMON) 鈣離子干片（Ca) 膽固醇干片（CHOL) 葡萄糖干片（GLU) 高密度脂蛋白膽固醇干（HDLC) 鎂離子干片（Mg) 磷離子干片（PHOS) 總蛋白干片（TP) 甘油三酯干片（TRIG) 尿素氮干片（BUN/UREA) 尿酸干片（URIC),雙波長(zhǎng) 測(cè)定法,應(yīng)用雙波長(zhǎng) 測(cè)定法進(jìn)行測(cè)試的項(xiàng)目 總膽紅素（TBIL) 消除可形成的光譜干擾 非結(jié)合膽紅素和結(jié)合膽紅素（BUBC) 摩爾吸收值相近 兩不同波長(zhǎng)處的讀數(shù)可以用來(lái)確定BU和BC的濃度,固定時(shí)間法（兩點(diǎn)法）,應(yīng)用固定時(shí)間法進(jìn)行測(cè)試的

3、項(xiàng)目 淀粉酶干片（AMYL) 脂肪酶干片（LIPA) 肌酐干片（CREA) 鐵離子干片（FE) 茶堿干片（THEO),速率法（多點(diǎn)法）,應(yīng)用速率法進(jìn)行測(cè)試的項(xiàng)目 谷丙轉(zhuǎn)氨酶干片（ALT) 堿性磷酸酶干片（ALKP) 谷草轉(zhuǎn)氨酶干片（AST) 肌酸激酶干片（CK) 肌酸激酶同工酶干片（CK-MB) 谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶干片（GGT) 乳酸脫氫酶干片（LDH) 膽堿酯酶干片（CHE),指示劑層 支持層,擴(kuò)散層 試劑層,比色/速率法干片,指示劑層 支持層,均勻分布標(biāo)本 過(guò)濾大分子 標(biāo)本預(yù)處理 提供反射測(cè)定的背景,擴(kuò)散層 試劑層,擴(kuò)散層,包含干性試劑 多層試劑，控制反應(yīng)順序,包含染料以產(chǎn)生顯色復(fù)合物 驅(qū)使反應(yīng)

4、完成,支持層,提供反應(yīng)支持基墊 允許光路自由通過(guò),均勻分布標(biāo)本,標(biāo)本進(jìn)入擴(kuò)散層,標(biāo)本迅速向四周擴(kuò)散,標(biāo)本均勻向下層滲透,標(biāo)本與試劑反應(yīng),反應(yīng)物在指示劑層被固定,干擾物質(zhì),反光背景,指示劑層,生成純凈的反射光,光源,濾光片,接收器,透射與反射,濕化學(xué) ： 采用透射光度法 遵循朗勃比爾定律 干化學(xué) ： 采用反射光度法 遵循Williams Clapper定律,吸光度,濃度,反射光,濃度,透射與反射,濕化學(xué) ： 儀器相對(duì)開(kāi)放，試劑選購(gòu)方便,但是質(zhì)量控制是隱患 由使用者監(jiān)控儀器狀態(tài)和結(jié)果的可信度 頻繁的日常儀器校驗(yàn)，繁瑣且工作量大 干化學(xué) ： 儀器相對(duì)封閉，采用固定的試劑及耗材來(lái)保證結(jié)果 長(zhǎng)期穩(wěn)定的定

5、標(biāo)曲線，大大減少了日常工作量,干化學(xué)與濕化學(xué)比較,電極法干片,離子選擇電極技術(shù) 直接法測(cè)定兩電極間電勢(shì)不同 K、Na、Cl,干片在接觸點(diǎn)被穿透 測(cè)量電壓讀數(shù) 通過(guò)電壓讀數(shù)計(jì)算出分析物的濃度,電極法干片測(cè)量技術(shù),鹽橋,S2,S1,S3,S4,aI,ar,離子載體膜,M+ Cl,AgCl,Ag,離子載體膜,M+ Cl,AgCl,Ag,aI,ar,V,V,干片,常規(guī),已知濃度液體(參比液),待測(cè)液體(標(biāo)本),離子選擇電極(ISE),鹽橋,ar,VITROS干化學(xué)檢測(cè)電解質(zhì)與常規(guī)方法比較,常規(guī)法（間接法） 干片法（直接法） 電極與電極膜重復(fù)使用 穩(wěn)定性差 獨(dú)立電極 / 測(cè)試 單一采樣針、進(jìn)樣通道 交叉

6、污染 一次性Tip頭 大量蠕動(dòng)泵、電磁閥 維修保養(yǎng)復(fù)雜 無(wú) 眾多管道、多種液體 易腐蝕、老化 無(wú)管道 頻繁定標(biāo)與沖洗保養(yǎng) 耗時(shí)、不環(huán)保 定標(biāo)周期長(zhǎng)、環(huán)保 電解質(zhì)排斥效應(yīng) 有 沒(méi)有,ISE間接法電解質(zhì)排斥效應(yīng),標(biāo)本10微升，非水相5，水相9.5微升 稀釋100倍，加入稀釋液990微升，水相999.5微升 實(shí)際稀釋倍數(shù)999.59.5105.211 如果標(biāo)本中含K 3.50 mmol/L; Na 140 mmol/L 間接法實(shí)測(cè)值為：3.50105.2111003.33 mmol/L 140105.211100133.0 mmol/L 直接法沒(méi)有電解質(zhì)排斥效應(yīng),一次性電極 沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng) 沒(méi)有電解質(zhì)

7、排斥效應(yīng) 沒(méi)有繁瑣的日長(zhǎng)保養(yǎng),性能優(yōu)勢(shì),免疫速率法干片 競(jìng)爭(zhēng)性與非競(jìng)爭(zhēng)性免疫速率反應(yīng)模式 需要液體反應(yīng)底物 地高辛、苯妥因、苯巴比妥、CRP、 卡馬西平,免疫速率法干片,酶,抗體,酶標(biāo)抗原,膠乳試劑,擴(kuò)散層 受體層 膠乳層 聚酯支持層,膠乳試劑,免疫速率法干片,膠乳試劑,免疫速率法干片,酶標(biāo)抗原 標(biāo)本中抗原,抗體,免疫速率法干片 競(jìng)爭(zhēng)法結(jié)合,結(jié)合抗原 + 游離抗原,免疫速率法干片 加入液體反應(yīng)底物洗去未結(jié)合物質(zhì),免疫速率法干片 競(jìng)爭(zhēng)法結(jié)果,高濃度 低濃度,VITROS 干化學(xué)技術(shù)在 抗干擾方面 具有突出優(yōu)勢(shì),去除干擾的干片原理 I,擴(kuò)散層 表面活性劑 試劑層 鈣螯合劑,指示劑層 緩沖液 蠟染料衍生物 支持層,清道夫?qū)?使用氧化酶或特異性結(jié)合物去除干擾物 以鎂離子干片為例,Mg+2+ Ca +2 Mg +2 + Ca +2 螯合劑 復(fù)合物,Mg+2 + 甲蠟染料衍生物 Mg +2 染料復(fù)合物,去除干擾的干片原理 II,選擇性半透膜 增強(qiáng)結(jié)果特異性；去除干擾物 以尿素氮干片為例,NH3 + 氨指示劑 呈色