1、細(xì)菌普通染色 和革蘭氏染色,目的要求 a. 掌握細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備方法和普通染色的步驟和關(guān)鍵點(diǎn) b. 掌握革蘭氏染色法的步驟和關(guān)鍵點(diǎn) c. 識別細(xì)菌的革蘭氏染色結(jié)果并畫圖 d. 學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù),材料用具 顯微鏡，擦鏡紙，紗布 革蘭氏染液 香柏油,自來水,95%酒精; 載玻片,插鏡紙,接種環(huán),鑷子,酒精燈; 金黃色葡萄球菌,枯草芽孢桿菌,未知菌12小時(shí)的液體培養(yǎng)液 大腸桿菌和酵母菌平板,實(shí)驗(yàn)步驟,1.涂片 左手持菌液試管,右手持接種環(huán)在火焰中灼燒,冷卻后從試管中去菌液一滴,在潔凈載玻片上做一涂膜; 從固體斜面或平板上取菌時(shí),用無菌接種環(huán)取少量菌體,涂抹均勻于玻片上預(yù)先滴有的一滴自來水中;,實(shí)驗(yàn)

2、步驟,2.干燥 在空氣中自然干燥或在火焰快速通過干燥(與熱固定同步進(jìn)行). 3.熱固定 用鑷子夾住涂片一端,在火焰上連續(xù)通過幾次;以載玻片在手背上試感覺不燙為宜.,實(shí)驗(yàn)步驟,4.染色 在固定的標(biāo)本上加結(jié)晶紫染液1-2滴,染色1min,輕輕滴加水洗; 吸干, 加半滴水, 蓋上蓋玻片, 滴上半滴鏡油油鏡檢。(到此實(shí)際上即為細(xì)菌普通染色) 揭去蓋玻片,吸干水, 滴加1-2滴革氏碘液媒染1min, 輕輕水洗,吸干。,實(shí)驗(yàn)步驟,滴加95%乙醇溶液(或30%丙酮乙醇脫色),輕輕搖動(dòng)玻片至液滴無色,不要過分脫色(約30秒),立即輕輕滴加水洗;吸干。 滴加蕃紅染液復(fù)染3min,輕輕滴加水洗; 吸干載玻片背面及

3、標(biāo)本周圍水漬,滴上半滴水，蓋上蓋玻片,油鏡鏡檢;,實(shí)驗(yàn)步驟,5.鏡檢 注意標(biāo)本中細(xì)菌的形態(tài),大小,排列,和顏色. 革蘭氏陽性菌為紫色; 革蘭氏陰性菌為紅色;,金黃色葡萄球菌(24hrs)染色結(jié)果,金黃色葡萄球菌(48hrs)染色結(jié)果,金黃色葡萄球菌(72hrs)染色結(jié)果,大腸桿菌(24hrs)染色結(jié)果,討論,記錄并描繪革蘭氏染色結(jié)果, 注意形狀,排列和顏色, 看看與理論上是否相同;如不同,分析原因; 分析影響革蘭氏染色結(jié)果的因素; 酵母菌能進(jìn)行染色嗎?結(jié)果如何?為什么?,注意事項(xiàng),干凈的載玻片, 合適取菌量, 菌齡, 熱固定,每一步水洗要徹底而且吸干,和酒精脫色程度是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵 禁止把染液倒入水池中,回收到廢液桶中,實(shí)驗(yàn)三結(jié)束，準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)四,肉湯蛋白胨培養(yǎng)基的配制（按實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)61頁配方瓊脂為2）。400ml/組置500ml三角燒瓶中用封口膜封好瓶口，用記號筆在瓶上標(biāo)明培養(yǎng)基名稱、組號（如周次座次，132）、配制時(shí)間，高壓滅菌。 包平皿10個(gè)/包/組、試管4支/包/組、1ml槍頭2個(gè)/包/組、5 ml槍頭1個(gè)/包