1、山楂葉中黃酮類提取工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究一、 實驗?zāi)康? 掌握從山楂葉中提取總黃酮的原理、方法及操作要點。2 掌握正交試驗的原理及方法。3 掌握UV含量測定、TLC的原理和方法。二、 實驗原理 利用正交試驗法篩選最佳提取工藝，以總黃酮量為指標(biāo)，蘆丁為對照品進行含量測定，以得出的最佳工藝做驗證實驗，TLC的結(jié)果做質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。三、 材料與儀器材料：山楂葉、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、聚酰胺板試劑：95%乙醇、甲酸、NaOH、NaNO2、Al(NO3)3、AlCl3儀器：UV2550紫外可見分光光度計(日本島津)、循環(huán)水式真空泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、抽濾裝置、圓底燒瓶、冷凝管、層析缸、電子天平四、 實驗步驟 1 山楂葉總

2、黃酮的提取 用剪刀將干燥的山楂葉剪碎，準(zhǔn)確稱取5.0g置于燒杯中，稱取9份用來做正交試驗，根據(jù)正交試驗要求加入一定濃度、體積的乙醇回流提取一定時間。趁熱抽濾，用50ml 50%乙醇洗滌，合并濾液，減壓濃縮至體積小于100ml，用60%乙醇定容至100ml，作為待測液。 2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 將蘆丁于120干燥至恒重，精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品9.28mg，用60%乙醇溶解，定容于50ml，得濃度為0.186mg/ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml于25ml容量瓶中，每瓶加去離子水至6ml，加5% NaNO2溶液1ml，搖勻，放置6min后加入10% Al(N

3、O3)3溶液1ml，搖勻，放置6min后加入4% NaOH溶液10ml，去離子水定容，搖勻，15min后于500nm處測定吸光度A，得蘆丁含量與A之間的回歸方程。 3 山楂葉總黃酮的測定 準(zhǔn)確吸取待測液0.4ml于25ml容量瓶中，步驟同上，測定其在500nm處吸光度，計算每組山楂葉中總黃酮含量。算出正交試驗中的K和R值，從而得出最佳工藝。 4 驗證實驗 根據(jù)最佳工藝，做驗證實驗，提取、含量測定方法如上。 5 TLC鑒定 吸附劑：聚酰胺板 展開劑：乙醇-甲酸-水（4:0.01:1 v/v/v） 以最佳工藝提取出的溶液為供試品溶液，另取配好的蘆丁對照品溶液各2-3l，分別點于同一聚酰胺板上，以乙

4、醇-甲酸-水（4:0.01:1 v/v/v）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈(365nm)下檢視。五、實驗結(jié)果 1 標(biāo)準(zhǔn)曲線蘆丁體積/ml吸光度A12345 0.065 0.147 0.219 0.306 0.3562 正交試驗水平 A乙醇濃度 B浸提溫度 C浸提時間 D料液比 /% /% /h g /ml1 50 50 1 1:10260 60 1.5 1:153 70 70 2 1:20實驗號 A B C D 總黃酮量/mg 1 1 1 1 1 318.542 1 2 2 2 336.073 1 3 3 3 510.154 2 1 2 3 479.475

5、2 2 3 1 449.416 2 3 1 2 471.957 3 1 3 2 451.928 3 2 1 3 418.739 3 3 2 1 414.97K1 1164.76 1249.93 1209.22 1182.92K2 1400.83 1204.21 1230.51 1259.94K3 1285.62 1397.07 1411.48 1408.35R 236.2 192.86 202.5 225.6由上圖可得:影響山楂葉總黃酮提取率的因素由大至小排列順序為A、D、C、B、,每個因素各水平之間大小排列為：A2A3A1、D3D2D1、C3C2C1、B3B1B2，則最佳工藝為A2B3C3D3. 3 驗證實驗 根據(jù)最佳工藝，60%乙醇回流提取2h，料液比1：20，進行驗證實驗，步驟同上，計算總黃酮量=557.1mg，計算每克山楂葉中總黃酮量為11.1%。 4 TLC結(jié)果 吸附劑：聚酰胺板 顯色劑：2%氯化鋁甲醇溶液 展開劑：乙醇-甲酸-水（4:0.01:1 v/v/v）六、實驗討論 1 因為水浴鍋控溫不準(zhǔn)確，所以去掉了正交試驗中的提取