廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,Contents,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),環(huán)狀丙二酰脲類化合物,(一)基本結(jié)構(gòu),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),典型藥物,(Phenylbarbital),(barbital),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),(Secobarbital),戊巴比妥,(Pentobarbital),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),(一)基本結(jié)構(gòu),酰胺鍵的水解,酸性，與醛加成反應(yīng),側(cè)鏈反應(yīng)：雙鍵，苯環(huán),絡(luò)合反應(yīng),與金屬離子反應(yīng),紫外吸收,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),(二)主要性質(zhì),性狀白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末溶解度微溶或極微溶于水，易溶于乙醇等有機(jī)溶劑鈉鹽易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑,1.弱酸性(pKa:7.38.4),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),一級電離,二級電離,烯醇互變,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),2.水解反應(yīng),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),巴比妥鈉注射液不能預(yù)先配制進(jìn)行加熱滅菌，須制成粉針劑，臨用時(shí)溶解。,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),3.與金屬離子反應(yīng),a.與銀鹽的反應(yīng),巴比妥類藥物分子結(jié)構(gòu)中含有酰亞胺基團(tuán),在碳酸鈉溶液中生成鈉鹽而溶解,因而可與硝酸銀反應(yīng),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,白色難溶性二銀鹽,與銀鹽的反應(yīng),用這種形式表示也是一樣的,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),3.與金屬離子反應(yīng),b.與銅鹽的反應(yīng),巴比妥類藥物在吡啶溶液中生成烯醇式異構(gòu)體,可與吡啶試劑反應(yīng)形成穩(wěn)定的配位化合物,產(chǎn)生類似雙縮脲的呈色反應(yīng),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),3.與金屬離子反應(yīng),b.與銅鹽的反應(yīng),巴比妥類銅吡啶,顯色,巴比妥類紫色或紫色沉淀,硫巴比妥類綠色,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,水,吡啶,部分離子化,有色配位化合物,與銅鹽的反應(yīng),用這種形式表示也是一樣的,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),c.與鈷鹽的反應(yīng),Co(NO3)2、CoO、Co(Ac)2,異丙胺,無水甲醇或乙醇,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,d.與汞鹽的反應(yīng),一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),巴比妥類藥物+汞鹽白色（可溶于氨試液）,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),4.香草醛反應(yīng)(Vanillin),戊巴比妥鑒別：取戊巴比妥10mg，加香草醛約10mg和硫酸2ml，混合后在水浴上加熱2min，顯棕紅色。放冷，小心加入乙醇5ml，即顯紫色并變成藍(lán)色。,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),5.紫外吸收光譜特征,240nm,255nm,A.H2SO4液(0.05mol/L,未電離)B.pH9.9緩沖液(一級電離)C.pH13NaOH液(1mol/L,二級電離),1,5,5-三取代巴比妥類藥物不存在二級電離，最大吸收波長不變。,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),硫代巴比妥的紫外吸收光譜A.HCl液(0.1mol/L)B.NaOH液(0.1mol/L),6.薄層色譜行為特征,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,7.顯微結(jié)晶,一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì),藥物本身晶形,反應(yīng)產(chǎn)物晶形,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,二、鑒別試驗(yàn),(一)丙二酰脲類的鑒別試驗(yàn),取供試品約0.1g，加碳酸鈉試液1ml與水10ml，振搖2min，濾過，濾液中逐滴加入硝酸銀試液，即生成白色沉淀，振搖，沉淀即溶解；繼續(xù)滴加過量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解。取供試品約50mg，加吡啶溶液(110)5ml，溶解后，加銅吡啶試液1ml，即顯紫色或生成紫色沉淀。,銀鹽反應(yīng),銅鹽反應(yīng),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,(二)測定熔點(diǎn),二、鑒別試驗(yàn),巴比妥類的鈉鹽酸游離巴比妥類藥物過濾洗滌干燥測熔點(diǎn),(三)利用特殊取代基或元素的鑒別試驗(yàn),利用不飽和取代基的鑒別試驗(yàn)(司可巴比妥鈉)利用芳環(huán)取代基的鑒別試驗(yàn)(苯巴比妥鈉)硫色素反應(yīng)(硫代巴比妥類),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,二、鑒別試驗(yàn),1.司可巴比妥鈉的鑒別,I2,褪色,Br2,KMnO4,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,二、鑒別試驗(yàn),2.苯巴比妥的鑒別,a.硝化反應(yīng),b.硫酸-亞硝酸鈉反應(yīng),苯巴比妥與NaNO2-H2SO4反應(yīng)生成橙黃色橙紅色,c.甲醛-硫酸反應(yīng),苯巴比妥與甲醛-H2SO4反應(yīng)生成玫瑰紅色環(huán),區(qū)分苯巴比妥與不含芳環(huán)取代的巴比妥類藥物。,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,二、鑒別試驗(yàn),3.硫代巴比妥類的鑒別硫色素反應(yīng),硫代巴比妥類與巴比妥類的區(qū)別,以前,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,三、特殊雜質(zhì)試驗(yàn),(一)苯巴比妥,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,三、特殊雜質(zhì)試驗(yàn),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,三、特殊雜質(zhì)試驗(yàn),1.酸度,中間體乙?；煌耆珪r(shí)，與尿素縮合產(chǎn)生的雜質(zhì),苯基丙二酰脲,酸性較強(qiáng),檢查方法取本品0.20g，加水10ml，煮沸攪拌1min，放冷，濾過后，取濾液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得顯紅色,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,2.乙醇溶液澄清度,三、特殊雜質(zhì)試驗(yàn),檢查中間體、等乙醇中不溶物。,取本品1.0g，加乙醇5ml，加熱回流3min，溶液應(yīng)澄清,3.中性或堿性物質(zhì)(提取重量法,溶解度差異),副產(chǎn)物：2-苯基丁酰(胺)脲或分解產(chǎn)物不溶于NaOHT.S.而溶于醚,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,含量測定,銀量法Argentometry,酸堿滴定法Acid-basetitrationmethod,紫外分光光度法uv,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,(一)銀量法(Argentometry)巴比妥類藥物在適當(dāng)?shù)膲A性溶液中,易與重金屬離子反應(yīng),并可定量地形成鹽,因而可用銀量法進(jìn)行滴定.在滴定過程中,可以通過生成沉淀進(jìn)產(chǎn)生的混濁指示滴定終點(diǎn).但容易出現(xiàn)誤差.改用甲醇及3%的無水碳酸鈉溶劑系統(tǒng),采用Ag-玻璃電極系統(tǒng)電位法指示終點(diǎn),方法改善,為chp2010所用.,四、含量測定,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,四、含量測定,(一)銀量法(Argentometry),指示電極(Ag),參比電極(玻璃/甘汞),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,四、含量測定,(二)溴量法:溴過量,再用KI反應(yīng),再用硫代硫酸鈉滴定.,司可巴比妥鈉測定,取本品約0.1g，精密稱定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5ml，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.05mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相當(dāng)于13.01mg的C12H17N2NaO3。,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,四、含量測定,(三)酸堿滴定法(Acid-basetitrationmethod),水-乙醇混合溶劑中滴定膠束水溶液中滴定非水滴定法,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,四、含量測定,1.水-乙醇混合溶液,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,2.膠束水溶液,四、含量測定,正膠束,溴化十六烷基三甲基芐銨Cetyltrimethylbenzylammoniumbromide，CTMA氯化四癸基二甲基芐銨Tetradecyldimethylbenzylammoniumchloride，TDBA,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,四、含量測定,3.非水滴定法,溶劑：二甲基甲酰胺、甲醇、丙酮、三氯甲烷、無水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯、乙醇-三氯甲烷滴定劑：甲醇鈉（鉀）、氫氧化四丁基胺指示劑：麝香草酚藍(lán),也可以用電位法指示終點(diǎn),廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,四、含量測定,(四)紫外分光光度法,直接測定的UV法提取分離后的UV法,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,四、含量測定,注射用硫噴妥鈉含量測定,取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量(約相當(dāng)于硫噴妥鈉0.25g)，置500ml量瓶中，搖勻，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液；另取硫噴妥對照品，精密稱定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液。用1cm吸收池，于304nm波長處分別測定吸收度，以0.4%NaOH溶液作空白。根據(jù)每支的平均裝量計(jì)算。每1mg的硫噴妥鈉相當(dāng)于1.091mg的C11H19N2NaO2S,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,四、含量測定,USP24法測定苯巴比妥含量,巴比妥類藥物適量，加水使其溶解后，加酸酸化，用三氯甲烷提取巴比妥類藥物，三氯甲烷提取液加入pH7.27.5的緩沖液，振搖，分離棄去水相緩沖液層，再用氫氧化鈉自三氯甲烷中提取巴比妥類藥物，調(diào)節(jié)堿提取液的pH值，然后選用相應(yīng)的吸收波長進(jìn)行測定。,提取后的UV分光光度法,消除干擾,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,(五)HPLC法五、體內(nèi)藥物分析,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物的分析,地西泮(diazepam),七元亞胺內(nèi)酰胺環(huán),奧普唑侖,奧沙西泮(Oxazepam),氯氮卓(Chlordiazepoxide),2.官能團(tuán)與分析方法,二氮雜卓環(huán)為七元環(huán)，環(huán)上氮原子具有堿性，苯基的取代使堿性降低，可與生物堿試劑反應(yīng)，可進(jìn)行非水滴定法測定；本品多為游離堿，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。定量,UV吸收，用于含量測定,環(huán)比較穩(wěn)定，在強(qiáng)酸性下水解，形成相應(yīng)的二苯甲酮衍生物，可用于鑒別和比色測定。（氯氮卓水解生成芳伯胺基；地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸）；鑒別,芳伯胺基反應(yīng)：氯氮卓水解生成芳伯胺基(重氮化偶合反應(yīng)鑒別,茚三酮反應(yīng)：地西泮水解生成甘氨酸（茚三酮反應(yīng)）鑒別,硫酸熒光反應(yīng)：本類藥物加硫酸，在紫外燈下，呈熒光鑒別,含有氯元素：氧瓶燃燒,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,理化性質(zhì),通常為白色或微黃色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；具有一定的熔點(diǎn)。一般不溶或極微溶于水，溶于丙酮或三氯甲烷等有機(jī)溶劑。具有弱堿性；水解性；UV吸收特性。,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物,一、鑒別試驗(yàn),(一)化學(xué)鑒別試驗(yàn)1.沉淀反應(yīng)氯氮卓橙紅色沉淀阿普唑侖KBiI4鹽酸氟西泮也生成橙紅色沉淀氯硝西泮放置后，沉淀顏色變深，因此可以相互區(qū)別。,阿普唑侖+遇硅鎢酸白色沉淀，藥典中也用于鑒別。,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物,2.水解后呈芳伯胺反應(yīng)氯氮卓和奧沙西泮的鹽酸溶液(12)，緩緩加熱煮沸，放冷，加亞硝酸鈉和堿性-萘酚試液，生成橙紅色沉淀，后者放置后顏色變暗。,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,地西泮ChP（2005）鑒別（2）取本品20mg，用氧瓶燃燒法（附錄C）進(jìn)行有機(jī)破壞，以5%氫氧化鈉溶液5ml為吸收液，燃燒完全后，用稀硝酸酸化，并緩緩煮沸2分鐘，溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng)（附錄）。,3.分解產(chǎn)物的反應(yīng)本類藥物多為有機(jī)氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，生成HCl，以5%氫氧化鈉溶液吸收，硝酸酸化，顯氯化物反應(yīng)。Ch.P用于地西泮和三唑侖藥物的鑒別。,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物,4.硫酸熒光反應(yīng)：苯并二氮雜卓類藥物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光(365nm)下顯不同的顏色。,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,5.UV,第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,取本品，加硫酸甲醇溶液(136)制成每1ml中約含10ug的溶液，照紫外-可見分光光度法，在239nm、284nm與360nm的波長處有最大吸收，在239nm與284nm處的吸光度比值為1.952.50。,UV法鹽酸氟西泮(BP2005),IR法,氯硝西泮BP2005作為該品種唯一的鑒別方法,IR法一般是USP首要的鑒別手段,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,紅外吸收光譜:已用于地西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮的鑒別,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物,(四)TLC與HPLC,硅膠G薄層板，苯丙酮(3:2)為展開劑，稀硫酸噴霧，105干燥30min，紫外燈下檢視熒光斑點(diǎn),*s,m,w分別表示熒光的強(qiáng)、中、弱,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,有關(guān)物質(zhì)檢查其檢查方法除了采用GC法（三唑侖）TLC法HPLC,特殊雜質(zhì)檢查,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,1.地西泮中有關(guān)物質(zhì)的檢查地西泮在合成過程中因其副反應(yīng)，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化學(xué)結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)物質(zhì)，可采用TLC法中的高低濃度對比法進(jìn)行檢查。2.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的檢查USP(24)用TLC法檢查氯氮卓中的有關(guān)物質(zhì)，并規(guī)定其分解產(chǎn)物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得過0.01%；中間體7-氯-1，3-二氫-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜卓-2-酮-4-氧化物含量不得過0.1%。,TLC法,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,3.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的反相高效液相色譜法色譜條件：色譜柱為250mm2.6mm（i.d.）C18柱；n=3000；流動相為甲醇-磷酸液(0.05mol/L)(60:40),40%氫氧化鈉溶液調(diào)pH為6.0；流速為1ml/min;紫外檢測器波長為254nm。檢測結(jié)果：氨基物（）的tR為12.0min、氧化物（）的tR為4.3min，痕量雜質(zhì)（、）的tR為13.8、3.6、4.7min。,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,HPLC,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,Test,鹽酸氟西泮中氟化物的檢查,對照品溶液：精密稱取NaF221mg，置100ml量瓶中，加水20ml使溶解，加NaOH溶液(12500)1ml,加水稀釋到刻度，搖勻，貯于密封的塑料容器內(nèi)備用(每1ml相當(dāng)于1mg的F-)。供試品溶液：取本品1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加枸櫞酸鈉緩沖液(pH5.25)溶解并稀釋到刻度，搖勻。,電位法氟離子選擇電極,廣西醫(yī)科大學(xué),藥物分析教研室,測定法：取對照品溶液適量，加枸櫞酸鈉緩沖液(pH5.25)分別制成每