中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 1 2014/8/7 濕熱滅菌器以及濕熱滅菌工藝的驗證指南 協(xié)會標(biāo)準(zhǔn)的編制背景及內(nèi)容 上海市食品藥品監(jiān)督管理局 上海市食品藥品包裝材料測試所驗證部 徐敏鳳 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 2 2014/8/7 有關(guān)濕熱滅菌協(xié)會標(biāo)準(zhǔn) 編制背景 “欣弗”和“齊二藥”的啟示 國家審評中心的相關(guān)規(guī)定 GMP的改版 國際國內(nèi)的發(fā)展趨勢 起草單位 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 3 2014/8/7 編制協(xié)會的參考依據(jù) 歐盟醫(yī)藥產(chǎn)品管理法規(guī)第四卷 歐盟有關(guān)人用和獸用醫(yī)藥產(chǎn)品 GMP指南 （ 2008年 3月） 以及： 附錄 1 無菌藥品的生產(chǎn) 附錄 20 質(zhì)量風(fēng)險管理 FDA的 CGMP（ 2004年 9月） Validation of Aseptic Pharmaceutical Processes, Frederick J. Carleton & James P. Agalloco 1998 ISO 11134 Sterilization of health care products- Requirements for validation and routine control- Industrial moist heat sterilization ISO 17665 Sterilization of health care products- Moist heat ISO 13408.1Aseptic processing of health care products Part 1 : General requirements ISO 11138 Sterilization of health care products- Biological indicators 其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 4 2014/8/7 指南的結(jié)構(gòu) 范圍 目的 定義 產(chǎn)品與設(shè)備 滅菌工藝的開發(fā)和驗證 附錄 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 5 2014/8/7 指南的內(nèi)容 常用的蒸汽滅菌器及滅菌程序 FDA與歐盟、 ISO在濕熱滅菌器驗證方面的內(nèi)容 EN285 EN554 CGMP、 ISO以及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) DQ、 IQ、 OQ、 PQ 關(guān)于濕熱滅菌選擇決策樹 歐盟 PDA 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 6 2014/8/7 指南的內(nèi)容 關(guān)于濕熱滅菌工藝驗證以及方法學(xué)的研究 各國 CGMP以及藥典 ISO 11134； ISO17665 PDA Validation of Moist Heat Sterilization Processes: Cycle Design, Development Qualification and Ongoing Control FDA 滅菌工藝檢查指南 過度殺滅法和生物負載法（殘存概率法） 定義 D值測試 方法與評價 濕熱滅菌工藝驗證的內(nèi)容 DQ、 IQ、 OQ、 PQ 相關(guān)測試 文件及培訓(xùn)等 質(zhì)量風(fēng)險管理 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 7 2014/8/7 目的 濕熱滅菌驗證的目的 ， 就是通過一系列驗證試驗提供足夠的數(shù)據(jù)和文件依據(jù) ， 從而找到最有效最合理的滅菌參數(shù) ， 并把已經(jīng)驗證過的飽和蒸汽滅菌設(shè)備和滅菌工藝參數(shù)應(yīng)用到藥品生產(chǎn)的除菌過程中去 ， 以證明用于藥品生產(chǎn)過程中的每一臺飽和蒸汽滅菌設(shè)備都能起到滅菌的效果 ， 并且對不同滅菌物品的滅菌過程和滅菌效果具有可靠性和重現(xiàn)性 ， 即驗證結(jié)果必須證明生產(chǎn)中所采用的滅菌過程對經(jīng)過滅菌的物品能夠保證殘存微生物污染的概率或可能性低于百萬分之一 。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 8 2014/8/7 目的 滅菌效果是通過飽和蒸汽、空氣 -蒸汽混合物或過熱水等滅菌介質(zhì)所含的熱量與滅菌物品的熱傳遞和產(chǎn)生冷凝水的水合作用來實現(xiàn)的。冷凝水是在蒸汽回到它的能量較低的液態(tài)時形成的。這種相變需要蒸汽潛熱向周圍環(huán)境的轉(zhuǎn)化，這樣就加熱了滅菌器和滅菌物品。選擇一種適合的蒸汽滅菌方式，能在滿足產(chǎn)品本身性能的情況下取得滿意的滅菌效果，但是任何一種滅菌方法，都必須在實際應(yīng)用前予以驗證。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 9 2014/8/7 定義 濕熱滅菌周期的設(shè)計和開發(fā)與蒸汽滅菌器的性能以及被滅菌產(chǎn)品的適用性有關(guān)。 空氣蒸汽混合氣體（ air-steam mixture） 預(yù)真空過程 過熱水過程 無菌保證水平（ Sterility Assurance Level, SAL） 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 10 2014/8/7 D VALUE D值 在基礎(chǔ)溫度下減少一個 Log菌數(shù)所需的時間。就是在一定溫度下，將微生物殺滅 90（即下降一個對數(shù)單位）所需的時間。 6 5 4 3 2 1 0 -1 -2 -3 -4 -5 -6 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Log # of Survivors 殘存物 Log數(shù) Minutes at 121.1 oC 在 121.1 oC 時的分鐘 D value = 1 D值 = 1 Thermal death curve 熱殺死曲線 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 11 2014/8/7 D VALUE D值 微生物名稱 溫度 介質(zhì) D值（分） 嗜熱芽胞桿菌 105 5葡萄糖 87.8 嗜熱芽胞桿菌 110 5葡萄糖 32.0 嗜熱芽胞桿菌 115 5葡萄糖 11.7 嗜熱芽胞桿菌 121 5葡萄糖 2.4 嗜熱芽胞桿菌 121 5葡萄糖乳酸液 2.1 嗜熱芽胞桿菌 121 注射用水 3.0 嗜熱芽胞桿菌 105 5葡萄糖 1.3 嗜熱芽胞桿菌 105 注射用水 13.7 嗜熱芽胞桿菌 115 注射用水 2.1 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 12 2014/8/7 Z VALUE Z值 Z值是指使某一種微生物的 D值下降一個對數(shù)單位時，滅菌溫度應(yīng)升高的度數(shù) 。 Z值對于比較不同滅菌過程溫度的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時間 F0值 計算是必須的 10 121.1 111.1 131.1 1 0.1 Log of D Value D值的 Log數(shù) Z Value = 10 oC Z 值 = 10 oC Temperature oC 溫度 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 13 2014/8/7 Z VALUE Z值 嗜熱芽胞桿菌在不同溶液中的 Z值 溶液 Z值（ ） 5葡萄糖水溶液 10.3 注射用水 8.4 5葡萄糖乳酸液 11.3 PH 7磷酸鹽緩沖液 7.6 平均 9.4 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 14 2014/8/7 F值 F值可用于衡量滅菌的有效性。 F(T,z)是采用一定的 Z值計算得到的一個容器或一個產(chǎn)品在 T度下的等效滅菌時間?？筛鶕?jù)挑戰(zhàn)的微生物數(shù)、微生物懸浮液的類型、 D值和 F一起，來評估滅菌程序殺滅微生物的有效性。當(dāng) Z取 10 ，溫度為 121.1時，滅菌過程的殺滅力（ process lethality）則為Fo。采用以下公式，或許多公開的參考文獻中可方便地計算出滅菌的殺滅力。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 15 2014/8/7 LETHALITY （ F0值 ） 溫度對 F0值的影響 For each minute at: 每一分鐘在 111.1 oC 115.0 oC 118.0 oC 119.0 oC 120.0 oC 121.1 oC 122.0 oC 131.1 oC equivalent F0 *: 相應(yīng)的 F0： 0.1 minute at 121.1 oC 0.25 在 121.1 oC時的分鐘 0.5 0.63 0.76 1 1.26 10 *注：滅菌溫度為 121.1 oC， Z =10 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 16 2014/8/7 定義 初始菌（ bioburden） 生物指示劑（ biological indicator） 化學(xué)指示劑 無菌 滅菌 工藝驗證過程 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 17 2014/8/7 產(chǎn)品與設(shè)備 產(chǎn)品以及包裝的蒸汽滅菌適用性 滅菌選擇決策樹 產(chǎn)品的包裝適用性 蒸汽滅菌器的安裝、驗證和維護 對蒸汽或過熱水等滅菌介質(zhì)的建議 用于驗證的測試儀器 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 18 2014/8/7 關(guān)于蒸汽滅菌器的標(biāo)準(zhǔn) HIM 1020 EN 285 EN 554 ISO 11134（ GB 18278) ISO 17665 其他 PDA或 ISPE指南 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 19 2014/8/7 濕熱滅菌器驗證的國際標(biāo)準(zhǔn) 濕熱滅菌的國際標(biāo)準(zhǔn)一般比較詳盡和具備可操作性，并且也代表了目前最先進的安裝、運行、性能確認理念。它們將滅菌過程的驗證和常規(guī)控制的有關(guān)內(nèi)容作了更詳細、更明確的規(guī)定，包括滅菌設(shè)備的確認、安裝檢查、包裝適用性、裝載試驗、空氣過濾器的檢查、蒸汽的質(zhì)量及管理、真空檢查和再驗證周期等等內(nèi)容。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 20 2014/8/7 蒸汽滅菌器的 DQ DQ 在選用蒸汽滅菌器時，首先應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的工藝來考慮蒸汽滅菌器的選型，主要是裝量的大小、滅菌溫度與時間的可控制性、滅菌程序的可選擇性、滅菌時腔室內(nèi)溫度的一致性、升溫與降溫速率的穩(wěn)定性、控制及記錄系統(tǒng)的可靠性等。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 21 2014/8/7 蒸汽滅菌器的 IQ/OQ/PQ 對蒸汽滅菌設(shè)備的各項控制內(nèi)容詳細定義： 排水報警； 空氣去除； 自動控制器； 生物指示劑 設(shè)備腔室的深度、寬度和高度； 滅菌周期的設(shè)計、極限挑戰(zhàn)周期的確認； 蒸汽供應(yīng)管路的檢查； 門的壓力試驗； 等效滅菌時間、最小滅菌時間以及雙倍最小滅菌時間； 失效的風(fēng)險以及管理； 參考測點的位置； 壓力試驗（真空度）、泄漏率； 安裝偏差以及處理； 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 22 2014/8/7 蒸汽滅菌器的 IQ/OQ/PQ 設(shè)備本身有足夠的產(chǎn)熱能力（容量），以便有利于滅菌周期的設(shè)計和極限挑戰(zhàn)周期的確認；有利于研究等效滅菌時間、最小滅菌時間以及雙倍最小滅菌時間。例如：對蒸汽供應(yīng)管路有相應(yīng)的規(guī)定，并制訂行之有效的檢查指南；對門的壓力試驗有相應(yīng)的規(guī)定，并制訂行之有效的檢查指南；各類報警失效的風(fēng)險分析以及管理；參考測點位置的確認；壓力試驗（真空度）、泄漏率；安裝偏差以及處理等等。 選擇空氣過濾器也必須考慮它的過濾效率，一般應(yīng)不小于 99.5%（ 0.3m）。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 23 2014/8/7 蒸汽滅菌器的 IQ/OQ/PQ 如果選擇預(yù)真空或脈動真空滅菌器，則應(yīng)確認真空度的范圍和控制指標(biāo)。 對蒸汽滅菌器的溫度顯示也有詳細的規(guī)定，例如：溫度顯示可以是數(shù)字的或其他類似物，范圍在 50 150K，精度不小于 1；溫度若數(shù)字顯示，則不能小于 0.1K；溫度測量點的響應(yīng)時間不大于 5s；滅菌時間顯示的精度應(yīng)在 2.5%(5分鐘以下 )和 1（ 5分鐘以上含 5分鐘）等。 對于一個完整的滅菌器使用的溫度探頭，除了溫度探頭外還有一個不能忽視的地方是它的導(dǎo)線部分，導(dǎo)線外面的硅膠管是抗高溫，壓力和濕度的。當(dāng)導(dǎo)線的軟管部分對于高溫，壓力，水蒸氣的抗性不好的時候，水蒸氣就會進入軟管內(nèi)部，對里邊的導(dǎo)線的電阻產(chǎn)生影響從而產(chǎn)生較大的漂移，而導(dǎo)致測量誤差超過我們規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 24 2014/8/7 滅菌介質(zhì)和其他輔助設(shè)施 對蒸汽質(zhì)量的測試項目： 過熱值 (Superheat)； 蒸汽干燥值（ Dryness value）； 不冷凝氣體 （ non-condensable gases）； 清潔蒸汽測試（化學(xué)項目，含藥典注射用水項下的絕大部分內(nèi)容） SVMS Steam Quality Test Apparatus Kit 用于驗證的測試儀器 具備進行熱均勻性試驗的驗證裝置并符合規(guī)定要求：測量儀器的精度大于被測滅菌設(shè)備的允差范圍（一般小于 0.5 ） 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 25 2014/8/7 滅菌工藝的開發(fā)及驗證 兩種滅菌方法 過度殺滅法 殘存概率法 用于注射劑生產(chǎn)的輔助物料的滅菌工藝 用于注射劑的滅菌工藝 滅菌工藝驗證的方法 滅菌驗證形成的相關(guān)文件 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 26 2014/8/7 細菌的耐熱性 濕熱滅菌耐熱性強的孢子主要有二個屬：梭菌屬 Clostridium，它一般是嚴(yán)格的厭氧菌 (anaerobe)；芽孢桿菌屬 Bacillus是需氧菌 (aerobe)，它可能是兼性厭氧菌。最常用的菌是 Bacillus subtilis,枯草芽孢桿菌； Geobacillus stearothermophilus嗜熱脂肪芽孢桿菌， Bacillus coagulans (ATCC51232)凝結(jié)芽孢桿菌， Clostridium sporogenes梭狀芽孢桿菌，和 Clostridium thermosaccharolyticum糖梭菌。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 27 2014/8/7 過度殺滅法 工業(yè)上蒸汽滅菌工藝的開發(fā)，滅菌周期的設(shè)定和應(yīng)用，一般使用過度殺滅法（ the overkill method）。使用過度殺滅法的目標(biāo)是確保達到一定程度的無菌保證，而不管裝載物的實際負載生物的數(shù)量多少和耐熱性如何。 SAL（無菌保證水平） 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 28 2014/8/7 過度殺滅法 F0 D121 （ LogN0 Log NF） 12分鐘 很少發(fā)現(xiàn)自然生成的微生物擁有超過 0.5分鐘的 D121值。過度殺滅法假設(shè)的微生物負載數(shù)量和抵抗力都要高于實際。大多數(shù)微生物的耐熱性都要比這低，因此能夠提供很高程度的無菌保證。即便采用濕熱滅菌工藝為過度殺滅法 （ the overkill method），仍然需要對被滅菌產(chǎn)品的初始菌進行周期監(jiān)測，并最好定期采用生物指示劑測試。 國際法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)簡述 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 29 2014/8/7 WHO GMP 2006 5.1 Whenever possible, products should preferably be terminally sterilized by heat in their final container. Where it is not possible , a decision should be taken to use an alternative method of terminal sterilization following filtration and/or aseptic processing. 5.2 Sterilization can be achieved by the use of moist or dry heat, .Where possible & practicable, heat sterilization is the method of choice. 5.1 可能條件下，采用最終容器中進行熱力滅菌的方法是無菌藥品首選的滅菌法。如 無法在最終容器中采用熱力方法滅菌時，則應(yīng)在無菌操作和 /或除菌過濾后采用其他可選用的最終滅菌方法。 5.2 可使用濕熱、干熱滅菌 。只要條件允許，就應(yīng)選用熱力滅菌法。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 30 2014/8/7 WHO Sterilization by moist heat 6.4 Sterilization by moist heat is suitable only for water-wettable materials and aqueous formulations. . The temperature recorder should normally be independent of the controller, and there should be an independent temperature indicator, the reading from which should be routinely checked against the chart recorder during the sterilization period. For sterilizers fitted with a drain at the bottom of the chamber, it may also be necessary to record the temperature at this position throughout the sterilization period. There should be regular leak tests on the chamber when a vacuum phase is part of the cycle. 6.4 濕熱滅菌法 僅適用于水浸潤性材料或水溶液。 程序控制系統(tǒng)應(yīng)獨立于溫度記錄儀表，并配置獨立的溫度顯示器。滅菌過程中，溫度顯示器的讀數(shù)應(yīng)與滅菌曲線記錄對照。 腔室底部裝有排水口的滅菌柜，有必要測定并記錄該點在滅菌全過程中的溫度數(shù)據(jù)。如滅菌程序中含抽真空，則應(yīng)定期對腔室進行檢漏試驗。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 31 2014/8/7 WHO Sterilization by moist heat 6.5 The items to be sterilized, other than products in sealed containers, should be wrapped in a material that allows the removal of air and the penetration of steam but prevents recontamination after sterilization. All parts of the load should be in contact with water or saturated steam at the required temperature for the required time. 6.5 如被滅菌品不是最終滅菌產(chǎn)品，則應(yīng)使用合適的材料將其適當(dāng)包扎，所用材料及包扎方式應(yīng)利于排除空氣，有利于蒸汽穿透并能防止滅菌后的二次污染。在規(guī)定的滅菌溫度和滅菌時間內(nèi)，所有被滅菌品應(yīng)與水或飽和蒸汽相接觸 . 蒸汽的潛熱為 540卡 /克，有空氣處滅菌效果差，脈動真空水噴淋等就是要解決潛熱問題 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 32 2014/8/7 WHO Sterilization by dry heat 6.7 Sterilization by dry heat may be suitable for non-aqueous liquids or dry powder products. The process include air circulation within the chamber and the maintenance of a positive pressure to prevent the entry of non-sterile air. If air is supplied, it should be passed through a microorganism retaining filter . Where sterilization by dry heat is also intended to remove pyrogens, challenge tests using endotoxins will be required as part of the validation. 6.7 干熱滅菌適用于非水性液體或干粉狀產(chǎn)品。滅菌過程中腔室內(nèi)的空氣需循環(huán)并保持正壓，以阻止非無菌空氣的進入；干熱滅菌如有送風(fēng)，則空氣應(yīng)通過除菌過濾器（ HEPA）過濾。當(dāng)干熱滅菌用于去除熱原時，驗證應(yīng)包括內(nèi)毒素挑戰(zhàn)試驗 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 33 2014/8/7 歐盟 CGMP中對蒸汽滅菌的規(guī)定 原則 為降低微生物 、 微粒和熱原污染的風(fēng)險 ， 無菌藥品的生產(chǎn)應(yīng)有各種特殊要求 。 這在很大程度上取決于生產(chǎn)人員的技能 、 所接受的培訓(xùn)及其工作態(tài)度 。 質(zhì)量保證極為重要 ， 無菌藥品的生產(chǎn)必須嚴(yán)格按照精心制訂并經(jīng)驗證的方法及規(guī)程進行 。 產(chǎn)品的無菌或其它質(zhì)量特性絕不能僅依賴于任何形式的最終操作或成品檢驗 。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 34 2014/8/7 歐盟 CGMP中對蒸汽滅菌的規(guī)定 無菌藥品生產(chǎn)所需的潔凈區(qū)一般可分為 4個級別： A級 高風(fēng)險操作區(qū) ， 如：灌裝區(qū) ， 放置膠塞桶 、 敞口安瓿瓶 、 敞口西林瓶的區(qū)域及無菌裝配 /連接操作的區(qū)域 。通常用層流操作臺 /罩來維護該區(qū)的環(huán)境狀態(tài) 。 層流系統(tǒng)在其工作區(qū)域必須均勻送風(fēng) ， 風(fēng)速為 0.36-0.54m/s（ 指導(dǎo)值 ） 。 應(yīng)有數(shù)據(jù)證明層流的狀態(tài)并須驗證 。 在密閉的隔離操作器或手套箱內(nèi) ， 可使用單向流或較低的風(fēng)速 。 B級 指無菌配制和灌裝 A級區(qū)所處的背景區(qū)域 。 C級和 D級 指生產(chǎn)無菌產(chǎn)品過程中重要程度較次的清潔操作區(qū) 。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 35 2014/8/7 歐盟 CGMP中對蒸汽滅菌的規(guī)定 最終滅菌產(chǎn)品 28 原料和大多數(shù)產(chǎn)品的準(zhǔn)備 /配制至少應(yīng)在 D級區(qū)進行 ，以降低粒子和微生物污染的風(fēng)險 ， 并與過濾及滅菌操作的要求相適應(yīng) 。 微生物污染風(fēng)險比較高時 ， 如容易長菌的產(chǎn)品 、 配制后要等相當(dāng)長時間方可滅菌的產(chǎn)品或因故主要不在密閉容器內(nèi)進行配制操作的產(chǎn)品 ， 配制必須在 C級環(huán)境中進行 。 29 最終滅菌產(chǎn)品的灌裝應(yīng)至少在 C級區(qū)進行 。 30 當(dāng)環(huán)境對產(chǎn)品污染的風(fēng)險比較大時 ， 例如灌裝速度慢或容器是廣口瓶 、 或是須暴露數(shù)秒鐘后方可壓塞的產(chǎn)品 ，必須在 C級區(qū)內(nèi)局部 A級條件下灌封 。 軟膏 、 霜劑 、 懸濁液以及乳劑一般應(yīng)在 C級區(qū)配制和灌封 ， 然后作最終滅菌 。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 36 2014/8/7 歐盟 CGMP中對蒸汽滅菌的規(guī)定 80 應(yīng)監(jiān)控滅菌前產(chǎn)品的微生物污染水平并確立控制標(biāo)準(zhǔn) ， 此標(biāo)準(zhǔn)與所采用滅菌方法的效果相關(guān) 。 必要時 ， 還應(yīng)監(jiān)控?zé)嵩?。 可能情況下 ， 應(yīng)在緊挨灌裝點的位置 ， 用除菌過濾器將所有藥液 ， 尤其是大容量注射劑進行除菌過濾 。 81 無菌操作所需的物料 、 容器 、 設(shè)備和任何其它物品都應(yīng)滅菌 ， 并通過與墻密封的雙扉滅菌柜進入無菌操作區(qū) ， 或以其它方式進入無菌操作區(qū) ， 但不得引入污染 。非燃性氣體應(yīng)通過除菌過濾器進入潔凈區(qū) 。 82 任何新的工藝都須驗證其有效性 。 應(yīng)根據(jù)工藝及設(shè)備的實際運行情況 ， 定期進行再驗證 ， 確認已驗證的狀態(tài) ， 或在工藝及設(shè)備有重要變更后 ， 進行再驗證 。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 37 2014/8/7 歐盟 CGMP中對蒸汽滅菌的規(guī)定 滅菌 83 所有的滅菌工藝都應(yīng)驗證 。 應(yīng)特別注意那些在現(xiàn)行的歐洲藥典中沒有收載的滅菌方法或者被滅菌產(chǎn)品不是一種簡單的水溶液或油溶液時所采用滅菌方法 ?？赡軛l件下 ， 應(yīng)盡量采用熱力滅菌法 。 任何情況下 ，所采用的滅菌工藝必須同時獲得注冊和安監(jiān)這個部門的認可 。 84 任何滅菌工藝在投入使用前 ， 都必須通過物理檢測手段和必要時的生物指示劑試驗 ， 來驗證其對產(chǎn)品的適用性及滅菌效果 ， 即每種被滅菌品的所有部位都達到了設(shè)定的滅菌要求 。 應(yīng)對工藝的有效性定期進行再驗證 （ 一年至少一次 ） 。 設(shè)備有重要變更后 ， 應(yīng)進行再驗證 。 應(yīng)保存再驗證的結(jié)果和記錄 。 85 所有的被滅菌品均須按規(guī)定的要求處理 ， 以獲得良好的滅菌效果 ， 滅菌程序的設(shè)計應(yīng)確保滅菌完全 。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 38 2014/8/7 歐盟 CGMP中對蒸汽滅菌的規(guī)定 滅菌 86 應(yīng)通過驗證確立所有滅菌程序的裝載方式 。 87 應(yīng)將生物指示劑作為滅菌監(jiān)控的補充手段 。 應(yīng)按供貨商的要求保存和使用生物指示劑 ， 并通過陽性對照試驗來確認其質(zhì)量 。 使用生物指示劑時 ， 應(yīng)采取嚴(yán)格措施 ， 防止由其所致的微生物污染 。 88 應(yīng)當(dāng)有明確區(qū)分已滅菌產(chǎn)品和未滅菌產(chǎn)品的方法 。 每一車 （ 盤或其它裝載設(shè)備 ） 產(chǎn)品或物料均應(yīng)貼簽 ， 清晰地注明品名 、 批號并標(biāo)明是否已經(jīng)滅菌 。 必要時 ， 可用濕熱滅菌指示帶來指示一批 （ 或一個亞批 ）是否已滅過菌 ， 但事實上 ， 滅菌指示帶并不能確保該批的無菌特性 。 89 每一個滅菌批次都應(yīng)有滅菌記錄 。 應(yīng)把滅菌記錄作為該批產(chǎn)品放行與否的一個依據(jù) 。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 39 2014/8/7 歐盟 CGMP中對蒸汽滅菌的規(guī)定 熱力滅菌 90 每次熱力滅菌均應(yīng)用適當(dāng)大小的記錄紙記錄滅菌過程的時間 /溫度曲線 。 也可用具有適當(dāng)精確度和準(zhǔn)確度的其他設(shè)備記錄 。 應(yīng)通過驗證確定監(jiān)控和 /或記錄滅菌溫度探頭的位置 。 可能條件下 ， 在驗證過程中 ， 應(yīng)在同一部位安放另一支獨立的測溫探頭作對照 。 91 可使用化學(xué)或生物指示劑 ， 但它們不得替代物理測試 。 92. 應(yīng)留有足夠時間保證所有被滅菌品都達到設(shè)定的滅菌溫度后 ， 才開始計算滅菌時間 。 每種裝載方式所需升溫時間均須測定 。 93. 在滅菌高溫階段后 ， 應(yīng)有措施防止冷卻過程中已滅菌品遭受污染 。 任何與產(chǎn)品相接觸的冷卻用液體或氣體都應(yīng)當(dāng)是滅過菌的 ， 除非能證明任何滲漏的容器不可能被批準(zhǔn)投放市場 。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 40 2014/8/7 歐盟 CGMP中對蒸汽滅菌的規(guī)定 濕熱滅菌 94. 濕熱滅菌程序監(jiān)控的參數(shù)應(yīng)包括滅菌溫度和壓力 。程序控制儀表通常應(yīng)獨立于監(jiān)控及記錄儀表 。 如采用自控和監(jiān)測系統(tǒng) ， 該系統(tǒng)應(yīng)經(jīng)過驗證 ， 以確保符合關(guān)鍵工藝的要求 。 該系統(tǒng)應(yīng)能記錄系統(tǒng)本身以及工藝運行過程中出現(xiàn)的故障 ， 操作人員應(yīng)監(jiān)控這類故障的發(fā)生 。 應(yīng)定期將獨立的溫度顯示器的讀數(shù)與滅菌過程中記錄獲得的圖譜對照 。 對腔室底部裝有排水口的滅菌柜而言 ， 可能需要測定并記錄該點在滅菌全過程中的溫度數(shù)據(jù) 。 如滅菌程序中包括抽真空操作 ， 則應(yīng)經(jīng)常對腔室作檢漏試驗 。 95. 被滅菌品如果不是密封容器中的產(chǎn)品 ， 則應(yīng)用合適的材料將其適當(dāng)包扎 ， 所用材料及包扎方式應(yīng)有利于空氣排放 、 蒸汽穿透并在滅菌后能防止污染 。 在規(guī)定的溫度和時間內(nèi) ， 被滅菌物品所有部位均應(yīng)與滅菌劑充分接觸 。 96. 應(yīng)注意 ， 滅菌用蒸汽應(yīng)達到適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 。 蒸汽中含添加劑的量不應(yīng)給產(chǎn)品或設(shè)備造成污染 。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 41 2014/8/7 歐盟滅菌選擇決策樹 歐洲藥典（ 2006年版） 決策樹 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 42 2014/8/7 歐盟 EN285、 EN554、 EN866、 CEN/TC 54、 CEN/TC 269 對濕熱滅菌的規(guī)定： IQ/OQ/PQ必須包含： 殺死率研究（ Lethality）包含最小裝載、飽和裝載和大致裝載三種； 極限最低溫度與最大值相差不大于 3K； 等效滅菌時間的偏差不大于 15s（對最大的滅菌設(shè)備不大于 30s）； 對于參考測點，在前 60s內(nèi)溫度最大偏差不大于 5K，在保溫段溫度最大偏差不大于 2K（對于不同的裝載稍微有點細小變化）； 空氣過濾器的流速應(yīng)不大于 0.13Kpa/min； 空氣移除速度的檢查； 生物指示劑的分層布置（建議滅菌物品的厚度不大于 30mm）； 若必需，則需測物品的微生物負載； 要做包裝適應(yīng)性研究； 以最小值為控制溫度； 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 43 2014/8/7 歐盟 EN285、 EN554、 EN866、 CEN/TC 54、 CEN/TC 269 對濕熱滅菌的規(guī)定： 驗證應(yīng)分為試運行（ OQ）和性能確認（ PQ），而 PQ應(yīng)包含物理性能和微生物殺滅試驗； OQ包含以上第 3條的全部內(nèi)容外，還應(yīng)有驗證計劃（操作指令）、備品和維修資料檢查核實、測試規(guī)程、每種裝載的試驗計劃、測試設(shè)備的校準(zhǔn)規(guī)程和自動控制系統(tǒng)的性能確認； OQ還包含：蒸汽、水的質(zhì)量控制、測量設(shè)備必須包含 12個以上的溫度傳感器，并應(yīng)進行至少 3次的重復(fù)試驗；真空度試驗； PQ應(yīng)包含極限裝載試驗、空氣探測器的檢查及報警、報警及處理、再確認程序等； 熱穿透試驗的詳細記錄以及培訓(xùn)記錄 總體評價并指導(dǎo)最佳滅菌效果的裝載量。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 44 2014/8/7 FDA 的 CGMP對濕熱滅菌的規(guī)定 驗證研究的目的是為了論證滅菌程序的效用。在一定的周期之后，必須進行再驗證。裝載產(chǎn)品的情況，生物指示劑以及溫度探頭的位置應(yīng)該被記錄在驗證記錄中。根據(jù)驗證中的裝載形式，用來指導(dǎo)并應(yīng)該記錄后續(xù)生產(chǎn)的所有批次的裝載情況。 在蒸汽滅菌程序中，從滅菌腔體內(nèi)去除空氣是一個重要的環(huán)節(jié)。因為空氣隔熱的特性，使得能量不容易傳遞，所以其得到的熱致死率比純蒸汽要小。同時必須注意到，微生物的熱抵抗能力隨著不同的被滅菌的物質(zhì)不同而不同。由于這個原因，在滅菌驗證中，必須仔細考慮包裹生物指示劑的材料的特性和類型，以保證其具有代表性。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 45 2014/8/7 FDA 的 CGMP對濕熱滅菌的規(guī)定 應(yīng)該評估滅菌器或滅菌車（運用于在線滅菌）內(nèi)熱量難以達到的潛在點。例如，在管道內(nèi)安裝過濾器會導(dǎo)致壓差的出現(xiàn)，這會顯著的導(dǎo)致在下游形成溫度降。我們推薦在過濾器下游使用生物指示劑。 空載驗證是為了評估滅菌器內(nèi)各點的均勻性（如溫度、壓差）。對于均勻性的研究，應(yīng)該通過校驗后的測量設(shè)備來完成。 中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會 46 2014/8/7 FDA 的 CGMP對濕熱滅菌的規(guī)定 熱穿透研究必須在在確定滅菌裝載后。在裝載后的腔體內(nèi)進行滅菌驗證可以論證熱量進入滅菌物品的效率以及確認潛在滅菌不足物品的熱穿透狀況。在包括最難滅菌點的裝載物品中放置生物指示劑是一