生殖道沙眼衣原體感染實驗室診斷,1,生殖道沙眼衣原體感染-病原體,非淋菌性尿道炎（NGU)是指由性接觸傳染的一種尿道炎，它在臨床上有尿道炎的表現(xiàn)，但在尿道分泌物中查不到淋球菌。40-50%由沙眼衣原體引起，20-30%由支原體引起，尚有10-20%由陰道毛滴蟲、白色念珠菌和單純皰疹病毒等引起。,2,沙眼衣原體.什么是沙眼衣原體?.比病毒大但是比細(xì)菌小.有細(xì)胞壁，具有DNA和RNA兩種遺傳物質(zhì).需要寄生于宿主細(xì)胞獲取復(fù)制的能源物質(zhì).有獨特的發(fā)育周期：原體（有感染性)，網(wǎng)狀體(無感染性).,3,女性感染.增加對HIV的易感性.宮頸炎輸卵管盆腔炎癥.(無癥狀者75%).肝臟感染肝周炎.結(jié)膜炎眼部分泌物異常.前庭大腺炎.子宮內(nèi)膜炎子宮分泌物異常不規(guī)則出血異位妊娠不孕,4,嬰兒感染.新生兒結(jié)膜炎:分娩后6-10天眼部出現(xiàn)異常分泌物.新生兒肺炎：可以導(dǎo)致肺功能損害,5,男性感染.輕到中度的尿道炎:臨床癥狀比淋病輕.尿痛分泌物增多，血尿，尿頻.附睪炎:急/慢?生育能力.前列腺炎:少見并發(fā)癥.反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎,6,男性感染2.直腸炎：直腸肛管疼痛，血性分泌物.臨床表現(xiàn)可以和Crohns?。寺∈喜。┫嗨?性病性淋巴肉芽腫（LGV）,7,沙眼衣原體感染-實驗室檢測,細(xì)胞培養(yǎng)抗原檢測試驗；ELISA、快速抗原試驗直接免疫熒光法核酸擴增檢測(NAAT)法,8,一、細(xì)胞培養(yǎng)基本原理,沙眼衣原體自身不能產(chǎn)生腺苷三磷酸（ATP),需依賴于宿主細(xì)胞提供，其生活周期包括原體和始體（網(wǎng)狀體）兩個發(fā)育型。在適宜的培養(yǎng)條件下，衣原體吸附并進入敏感細(xì)胞，其原體在細(xì)胞中發(fā)育成始體，二分裂增殖形成胞質(zhì)內(nèi)包涵體，經(jīng)染色后顯微鏡下可見包涵體。,9,衣原體的培養(yǎng),評價敏感性7080特異性100缺點費時（需35天），費力，技術(shù)要求高不宜作為臨床常規(guī)檢查不宜用于大規(guī)模的篩查和流行病學(xué)調(diào)查,10,二、直接免疫熒光法,評價敏感性70%90%特異性83%99%由于有可能將某些發(fā)光顆粒(白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、色素顆粒)、細(xì)菌和酵母菌誤認(rèn)為沙眼衣原體，因此此法對于實驗人員的技術(shù)水平要求較高,11,三、酶聯(lián)免疫吸附試驗,用酶聯(lián)免疫為基礎(chǔ)的方法檢測臨床標(biāo)本提取物中的沙眼衣原體抗原.廣泛應(yīng)用,12,所有的試驗均基于對胞內(nèi)脂多糖的檢測.脂多糖在結(jié)構(gòu)上和質(zhì)粒/DNA不同，.脂多糖是原體在宿主細(xì)胞中倍增，以及因此導(dǎo)致宿主組織破壞的結(jié)果，活躍的復(fù)制過程可以導(dǎo)致包涵體內(nèi)大量脂多糖的釋放。脂多糖可以認(rèn)為是活動的沙眼衣原體在宿主細(xì)胞內(nèi)活動導(dǎo)致宿主組織破壞的標(biāo)志,13,EIA費用低操作簡便.發(fā)展通過早期的比較，近年來對抗體進行了改良和純化.目前細(xì)菌脂多糖干擾引起的假陽性已經(jīng)很少見了,14,EIA反應(yīng)法(陽性EIA反應(yīng))可以用直接免疫熒光確認(rèn)離心，用沉淀物涂片，干片，固定，染色.紫外顯微鏡典型的原體結(jié)構(gòu)真陽性,15,EIA敏感性75-80%而PCR用于所有EIA沒有反應(yīng)的標(biāo)本，20-25%的PCR陽性者主要為臨床無癥狀者,16,四、抗原快速檢測,優(yōu)點簡易，方便，快速，尤其適用于基層單位缺點標(biāo)本中需要足夠數(shù)量的沙眼衣原體抗原，否則有假陰性結(jié)果注意事項：按時間觀察結(jié)果,17,五、顯微鏡檢測法,基本原理沙眼衣原體在宿主細(xì)胞內(nèi)生長繁殖，形成包涵體。姬姆薩染色后，鏡下可見細(xì)胞內(nèi)包涵體。臨床意義1、多用于新生兒眼結(jié)膜刮片檢測，敏感性達95%。2、不適宜用于泌尿生殖道標(biāo)本的檢查。,18,核酸擴增檢測,核酸擴增技術(shù)是通過擴增沙眼衣原體的多拷貝基因（如隱蔽性質(zhì)粒、染色體和RNA）檢測病原體。方法包括聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）連接酶鏈反應(yīng)（LCR）等溫鏈置換擴增技術(shù)（SDA）轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴增技術(shù)（TMA）核酸序列擴增技術(shù)（NASBA）實時熒光PCR等。,19,核酸擴增檢測,核酸擴增檢測具有很高的敏感性和特異性，世界衛(wèi)生組織已推薦為擴大的生殖道沙眼衣原體感染實驗室診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。核酸擴增檢測不僅可用于宮頸、尿道標(biāo)本中沙眼衣原體的檢測，也可用于男女性尿液標(biāo)本的檢測。開展核酸檢測的實驗室應(yīng)通過有關(guān)部門考核取得開展臨床核酸檢測技術(shù)資格證。,20,臨床意義,核酸擴增檢測具有很高的敏感性和特異性，已被