密級： 論文編號： 中國農業(yè)科學院 學位論文 煙草赤星病抗性分子標記篩選 I 摘 要 煙草是 我國重 要的 經 濟作物 之一。 煙草 赤 星病 主要 危害 成熟 期 葉片， 一旦 氣候 條件 適 宜極易 造成 大面積流 行，使 煙草 生產遭受 重大的 損失 。培育抗 煙草赤 星病的優(yōu)質 品種是 預防 該病的最 經濟、 有效 的 途徑， 分子標 記輔 助育種 又 是提高 選擇效率和加快 育種進程 的重要手段 。 本文針對赤星病抗性 主要 開展 三方面的 研究 ：研究煙草赤星病抗性基因的遺傳 特點；探索 適合于煙草的 應條 件 和體系；構建并利用 分離群體，用 對煙草赤星病抗性基因進行 析，尋找與抗病基因連鎖的 記。研究結果 表明： （ 1） 赤星病的抗性由顯性 單基因控 制 ； 凈葉黃 對赤星病 的 抗性不 完全 是由 顯性 單基因控 制 ； （ 2）確 定 了 適 合 于 煙 草 的 應 條 件 及 電 泳 顯 色 方 法 ， （ 3 ）用 對凈葉黃兩個抗源 材料 的抗性基因進行了 析 ， 從 800 個物組合中篩選到一個與 抗 赤 星 病 基 因 連 鎖 的 標 記它 與目 的基因的遺傳距離為 選到一個與凈葉黃的抗赤星病基因連鎖的標記 4 0， 它 與目的基因的遺傳距離為 關鍵詞： 煙草 ； 赤星病 ；抗性； 子 標記 is of a in It to is to is We by is to （ 1） of （ 2）an CR （ 3） 2 to to as （ 1） is by a is by （ 2） An CR （ 3） to to 800 to 2 1118360 is to 2113340 is to 錄 第一章 文獻綜述 1 草赤星病研究 1 草赤星病的癥狀 2 草赤星病的病原 2 源及抗性遺傳 3 赤星病品種的選育 4 種 子標記技術比較 5 5 6 6 6 7 7 研究的目的意義及主要內容 8 的和意義 8 要研究內容 9 第二章 材料與方法 10 試材料 10 草材料 10 草赤星病菌 10 物 10 驗用試劑和儀器 11 驗地點 11 驗設計 12 驗方法 13 草材料的準備 13 種菌液的準備 13 種方法 13 因組 提取 13 應 14 泳及染色 15 建池 17 據分析 17 第三章 結果與分析 18 試煙草材料赤星病抗性鑒定和遺傳分析 18 草基因組 提取 19 應體系和程序的選擇 19 草赤星病抗性基因的 記篩選 20 態(tài)性引物初篩 20 抗感基因池間篩選引物 21 用抗感基因池間篩到的多態(tài)性引物對 進行單株分析 23 第四章 討論與結論 25 泳及顯色方法 25 草赤星病抗源及其抗性遺傳 25 感親本的 異及抗性基因的分子標記 26 子標記與煙草研究 26 論 27 參考文獻 29 致 謝 36 作 者 簡 歷 37 V 英文縮略表 英文縮寫 英文全稱 中文名稱 制性片段多態(tài)性 機擴增多態(tài)性 增片段長度多態(tài)性 單重復序列 標記 復序列區(qū)間 標記 關序列擴增多態(tài)性 分離群體分組分析法 分子標記輔助選擇 中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 文獻綜述 1 第一章 文獻綜述 煙草 赤 星病是 世界 上 主要的 煙草病 害之 一 ，在世 界各地 均有 發(fā) 生，在 我國各主產煙區(qū) 發(fā)生普 遍， 遇上適宜 的 氣候 條件 極易造成 大面積 流行 。煙草是 一種重 要的葉用經 濟作物 ，在 我國國民 經濟中 占有 重要位置 ，是我 國農 民增收和 西部開 發(fā)的重要經 濟作物 之一 。煙草赤 星病 菌 主要 危害成熟 期 葉片 ，不 僅造成煙 葉產量 的重大損失 ，而且 造成 煙葉質量 的下降 ，如 煙葉化 學 成分失 調、 吃味變差 ，降低 了煙葉 的 使 用價值 。培 育抗煙草 赤星病 的優(yōu) 質品種是 預防該 病的 最經濟、 有效的 手段。盡管 近年來 生產 上已有 一些 抗 耐 赤星 病 的 品種 使用， 但是 目前抗病 品種的 數(shù)量和抗性 水平還 不能 滿足煙葉 生產的 要求 ，仍然需 要大量 使用 化學農藥 防治該 病害，造成 煙葉農 藥殘 留超標和 環(huán)境污 染。 隨著人們 對吸煙 與健 康的關注 ，對煙 葉的安全性 要求越 來越 高。提高 煙草品 種的 抗病性， 不但能 提高 煙葉產量 和質量 ，而且在很大程度上能減少農藥殘留，從而進一步提高煙葉的安全性。 常規(guī)抗病育種需要經過有性雜交、回交及后代選擇，受環(huán)境因素的影響較大，也受 所研 究病菌 接種 難易等條 件的影 響， 而且往往 需要較 長的 時間。隨 著生物 技術的發(fā)展 和在農 業(yè)上 的廣泛應 用，將 生物 技術與常 規(guī)育種 技術 結合起來 進行作 物品種的遺 傳改良 已成 為一種趨 勢。分 子標 記輔助 選擇 育種 技術 ，尤其是 在抗病 育種上的應 用，目 前已 經相當成 熟。用 分子 標記進行 抗病基 因的 檢測，在 早 期世 代就可以對 抗病株 進行 選擇，提 高選擇 的準 確性，縮 小育種 群體 ，并且不 受環(huán)境 、生長季節(jié)等 條件 的限制，結合 溫室 加代技術能大大縮短育種年限，提高育種效率。 草赤星病研究 煙草赤星病（ 世界上重要的煙草病害之一，遇上 適 宜的 氣候 條件 很易爆發(fā)流行。該病害 自 1892 年首次報道 以來，曾數(shù)次給世界煙草生產帶來巨大的經濟損失。 1931 年，煙草赤星病在津巴布韋廣泛傳播， 1956 年此病又在美國北卡羅來納州突然爆發(fā)流行，造成 2100 萬美元的嚴重損失。 1963 年，此病害在世界造成的損失達總產值的 同年此病在日本煙區(qū)也發(fā)生嚴 重危害 。此 外，哥倫 比亞、 阿根 廷、委內 瑞拉、 澳大 利亞、加 拿大等 國家也陸續(xù)發(fā)生。 1916 年我國首次在北京附近發(fā)現(xiàn)有煙草赤星病的發(fā)生。 20 世紀 60年代，山東、河南煙區(qū)曾大 流行，損失很大，尤其是 1967 年該病曾使山東烤煙均價下降一個等級。 20世紀 80年代初各主產煙區(qū)赤星病病情又有大幅度上升的趨勢，成為我國煙草生產上發(fā)生范圍最廣、危害最重的葉部病害。 1989 3 年間，河南省煙草平均每年因赤星病造成的損失為 2300 萬元。 1992 年是特大流行年，黃淮煙區(qū)、 東北煙 區(qū)等 損失很大 。近年 來， 赤星病已 成為我 國各 煙區(qū)的主 要病害 ，并在不同 產區(qū)大 爆發(fā) 。 進一步 搞清赤 星病 的發(fā)生機 制、病 原小 種的分化 ，深入 研中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 文獻綜述 2 究赤星病 抗性基 因的 遺傳規(guī)律 ，有利 于有 效地控制 該病和 進行 有針對性 的抗病 育種。 草赤星病的癥狀 煙草赤 星病 菌 主要 危 害成熟 期的葉 片， 也 危害莖 部。病 斑一 般 從下部 葉片開始發(fā)生， 以后逐 漸向 上部葉片 發(fā)展。 最初 在葉片上 出現(xiàn)黃 褐色 圓形小斑 點，以 后變?yōu)楹稚?。病斑最初直?后逐漸擴展，可達 1 2組織開始變褐，病斑產生 明顯的 同心 輪紋，質 脆、易 破， 病斑邊緣 明顯， 外圍 有淡黃色 暈圈。 病斑中心有 黑色的 霉狀 物，即分 生孢子 和孢 子梗。天 旱時在 病斑 中部產生 裂孔。 病害嚴重時，許多病斑相互連接并合，枯焦脫落。 圖 1 煙草赤星病葉部病斑癥狀 he ty sy of a n 草赤星病的病原 煙草赤星病的病原為鏈格孢菌 屬于半知菌。 其菌絲 透明 ，有分隔 ，在病 部產 生的分生 孢子梗 上成 串形成褐 色的分 生中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 文獻綜述 3 孢子。據報道（ 1982 年 ），此菌有 A、 B 兩種類型的孢子， A 型喙長大于 10m，三橫分隔，壁厚； B 型喙長小于 10m，三橫分隔，壁較薄。 A 型對煙株的致病力大于 B 型。 在馬鈴 薯瓊脂 培養(yǎng) 基 上，前 期生長 菌絲 階 段為白 色菌落 ，爾 后 由于不 斷產生分生孢子，顏 色逐漸變深，再繼續(xù)變?yōu)楹稚虬稻G色。培養(yǎng)適 宜 溫 度為 25，最低 5 ，最高 38 。孢子與菌絲在冰凍或 10 條件下可存活 4 個月，在 46條件下可存活 2 天。 源及抗性遺傳 生產上利用的赤星病抗源，美國主要是 國 主要 是凈葉黃。 1963 年 ）報道多米尼加的雪茄煙品種 抗赤星病，美國 烤煙品系的赤星病抗性 大多 來自 1959 年， 赤星病有較高水平的田間抗性，這之前只知道它是由美國農業(yè)部選育的高抗黑脛病品種。 抗赤星病 性質很 快就 被其它研 究者認 可， 并認為它 是當時 唯一 高抗赤星 病的煙 草品種。煙 草品種 抗性 機制的差 異會在 遺傳 上體現(xiàn)出 來，和 抗病 育種關系 最密切 的也是抗性遺傳。有關赤星病抗源抗病遺傳規(guī)律的研究開展得比較少，最初是 性遺傳的研究。他們發(fā)現(xiàn) 感病品種雜交 抗病性呈 1 2 1 的孟德爾分離， 抗病性接近于抗 性親本，據此認為 抗病性是由單基因控制的部分顯性遺傳。這一觀點多年來一直為許多研究者所接受。 （ 1968 年）提出煙草品種間對赤星病的抗性可能存在不同類型的抗性機制。 1975 年， 對包括 內的 8個高抗赤 星病材 料做 了遺傳分 析，發(fā) 現(xiàn)抗 病品種間 赤星病 的表 觀侵染速 率差異 顯著， 遺傳背景相似的品種的表觀侵染速率在兩年的試驗中都非常 接近。 他們 認為這些 品種的 抗病 性都是由 多基因 控制 的，表現(xiàn) 為數(shù)量 遺傳。 我國 抗 赤星病 育種 利 用的主 要抗源 是從 長 脖黃中 系選出 的突 變 抗病株 系凈葉黃。凈葉黃 由河南省農科院煙草研究所于 1965 年從地方品種 長脖黃 中系統(tǒng)選育而成，是我國最早育成的抗 赤星病 品種，于 1995 年獲得國家發(fā)明三等獎。河南許昌所的王素琴等（ 1995 年）對凈葉黃的抗性遺傳進行了測定，他們對凈葉黃與 12 個感病品種雜交的 及 赤星病病情指數(shù)的分析結果表明，雜交一代抗赤星病能力較高，凈葉黃抗病性受顯性基因控制，多數(shù)組合 分離呈 1 2 1 的規(guī)律。他們認為 凈葉黃 的 抗 性是由部 分顯性 的加 性基因控 制，且 與不 易烘烤性 狀有一 定連鎖關系 。 郭永峰等（ 1997 年）對 7 個赤星病抗感程度不同的煙草品種（ 葉黃、許金 4 號、金星 6007、 抗病性分別進行了測定，并對 凈葉黃的抗性特點進行了比較。結果表明：供試品種的抗中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 文獻綜述 4 性特點差異顯著，為多基因控制的水平抗性。 抗病性是由顯性基因控制的，主要表現(xiàn)為抗侵入，病斑數(shù)少，但病斑面積卻顯著大于凈葉黃和許金 4號。凈葉黃抗擴展的能力強，同時也較抗侵入，它的抗性基因大部分是隱性的。 1991 年 道了他們對 10 個印度黃花煙品系抗性遺傳做的雙列雜交分 析，結 果表 明黃花煙 的抗病 性是 由多個微 效基因 控制 的，這些 微效基 因在表達過 程中首 先表 現(xiàn)為加性 效應， 但也 存在非加 性效應 。所 有位點上 的基因 表現(xiàn)為均衡 的部分 顯性 ，存在著 等位基 因間 的互作， 但沒有 上位 作用?？?制抗病 性的基因大 部分是 顯性 的。鑒于 赤星病 的發(fā) 生受溫度 和濕度 條件 影響很大 ，不同 品種間的抗 病性基 本上 呈連續(xù)分 布，多 數(shù)人 傾向于認 為普通 煙草 對赤星病 的抗性 是由多基因控制的水平抗性。許多報道指出煙草對赤星病的抗性與其分類地位有關，一般認為 白肋煙 和曬 煙 的抗病 性高于 烤煙 。對煙屬 植物進 行的 抗性鑒定 表明幾 個具有赤星 病抗性 的野 生煙草比 普通煙 草抗 病性更強 。這種 抗性 水平的不 同可能 與某些特征基因有關。 赤星病品種的選育 最早 的抗 赤星 病育 種 工作 是美 國的 成的 。 1963 年 ） 報道了 抗性 遺傳，接著 育成高抗 品系 性， 1971 年 ）， 1981 年 人育成烤煙品系 具 有 該抗性。 成抗赤星病白肋煙品種 1976 年 ） 。在日本，抗性轉移給 6 個栽培品種（ 1972 年 ）。 上 世紀 50 年代后期赤星病在美國的流行，以及其后在中國、日本的大發(fā)生促使有關赤 星病抗 病育 種的研究 在深度 和廣 度上都達 到了前 所未 有的規(guī)模 ，這期 間篩選或培育了一大批抗病水平不等的抗性品種并加以利用。栽培品種 國）、凈 葉黃、潘元黃、歪把子、革新 3 號、偏筋黃（中國）、 本）、 巴布韋）、 度）、 爾巴尼亞）等都表現(xiàn)出對赤星病不同程度的抗性。我國在 60 年代初對地方品種資源進行了大規(guī)模的整理鑒定，發(fā)掘了一大批有 利用價 值的傳統(tǒng)品種。其中 1965 年從河南地方品種長脖黃中選育得到的凈葉黃高抗赤星病，該 品種在 以后 的抗病育 種中作 為我 國主要的 赤星病 抗源 起了重要 作用， 利用其抗性 先后育成單育 2 號、許金 4 號、中煙 15、中煙 86、遼煙 14、中煙 90、中煙 100 等高耐赤星病品種。由于該抗源抗性基因與不易成熟 和烘烤 的基因有連鎖關系，在利用該抗源時，首先要考慮的因素之一是解決成熟與烘 烤 問題。 從上世紀 70 年代初由 組織在北卡、馬里蘭和南卡等地進行了赤星病抗性的田間篩選，到 1981 年試驗結果在 公開報道。在 990份原始材料中雖沒有發(fā)現(xiàn)免疫的材料，但 4 個材料的抗病性比當時美國推廣的抗病品種 強（高抗），另外還有 4 個材料在幾年中病情中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 文獻綜述 5 指數(shù)都低 于中抗 品種 。這些材 料的品 種 多 型性、農 藝性狀 的多 樣性為進 行抗赤 星病研究提供了豐富的抗性資源。 作為 使 煙草 育 種進 入 新階 段 的重 要 標志 ， 上世 紀 中葉 ， 育 種 學 家把 目 光移 向了煙屬植 物野生 種。 對野生煙 草抗病 性的 利用在普 通花葉 病、 野火病、 角斑病 、根黑腐病、黑脛病、根結線蟲病的抗病育種中先后取得了顯著的成就。上世紀 60年代 初 ， 一些 植 物病 理學 家就 野 生煙 草對 赤星 病的 抗 性進 行了 鑒定 ， 先 后對 當時所知的 65 個煙屬野生種中的 63 個種在多個地區(qū)進行了赤星病抗性的溫室鑒定。結果表明 ， 近于免疫 ， 另外還有 5 個野生種 對赤星 病表 現(xiàn) 高抗 。 野 生種 抗病 性 的篩 選更 加豐 富了 赤 星病 抗病 資源 ， 這 些抗 源材料的高抗性和可能存在的單基因抗性為抗病育種開辟了廣闊的前景。 近年來，通過多種因子進行抗性誘導取得 了 一定進展（董漢松， 1995 年 ），如采用 素、弱毒株系、化學物質、非病原細菌、病毒因子等誘導抗性，使抗病性得到明顯提高，從 中煙 86 中誘導篩選出抗性明顯提高的材料。 赤星病 是我國 煙草 生 產上的 重要病 害， 培 育抗病 品種是 防治 該 病最經 濟有效的措施。 我們應 該把 傳統(tǒng)育種 方法和 現(xiàn)代 分子生物 學技術 結合 起來，如 利用分 子標記進行 輔助選 擇育 種，省略 繁 瑣的 抗病 性接種鑒 定過程 ，提 高選擇效 率，加 速育種進程。 種 子標記技術 比較 子標記是 平上的遺傳多態(tài)性的直接反映，是繼形態(tài)學標記、細胞學標記及生化標記之后，在近二十多年來廣泛應用的一種新的遺傳標記。 接以 為研究對象，在植物體的各個組織、各個發(fā)育時期均 可檢 測 ；標 記數(shù)量極 多，遍 及整 個基因組 ；多態(tài) 性高 ，自然存 在著許 多等位變異；有許多分子標記表現(xiàn)為共顯性，能夠鑒別出純合基因型與雜合基因型，提供完整的遺傳信息。目前， 子標記己廣泛應用于種質資源研究、 遺傳圖譜構建、 目的基 因定 位、起源 進化研 究以 及標記輔 助育種 等方 面?，F(xiàn)在 ，常用 的分子標記有 ，下面就這幾種標記技術的優(yōu)缺點進行比較。 制性片段長度多態(tài)性（ 較早應 用于基 因標 記的一項 分子標 記技 術。該技 術是利 用限 制性內切 酶切割 不同生物體的 子，產生大小不同的 段，用凝膠電泳分開 段并轉移到硝酸纖 維素膜 或尼龍膜上， 利用放 射性標記的 探 針顯示 特定的 段（ 交），從而揭示出 態(tài)性。 中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 文獻綜述 6 主要優(yōu)點有：（ 1）遍布于整個基因組，理論上數(shù)量幾乎是無限的；（ 2）無表型效 應，不受 發(fā) 育階段及 器官特異 性 限制；（ 3）共顯 性， 可區(qū)分純 合子和雜合子；（ 4）結果穩(wěn)定可靠。但是 有其缺點：需要制備不同的探針，操作過程比較繁瑣，所需時間長、費用高，檢測出的多態(tài)性較少。 機擴增多態(tài)性 術 （ 由美國科學家 乎同時發(fā)展起來的 子標記技術， 合酶鏈式反應）為基礎，以一系列不同的 10 個堿基的隨機引物對模板行 增，產生多態(tài)性 段，經凝膠電泳分離和染色顯示 態(tài)性。 優(yōu)點很多：（ 1）不需制備探針，設計引物也無須知道序列信息；（ 2）技術簡便，不涉及分子雜交和放射自顯影技術；（ 3） 品需要量少，引物價格便宜，成本較低。 缺點：（ 1）顯性遺傳（極少數(shù)共顯性），不能鑒別純合子和雜合子；（ 2）實驗重復性差，結果可靠性低。 增片段長度多態(tài)性（ 由荷蘭科學家 1993 年發(fā)明。 記結合了 穩(wěn)定性和 時又能克服 型少、信息量小以及 術不穩(wěn)定的缺點。其技術原理是：首先用限制性內切酶酶解基因組 成許多大小不等的隨 機片段 ；將 特定的同 酶切點 互補 的接頭連 接在酶 切片 段的兩端 ；用特 異同接頭互補的引物進行 增、電泳、放射或非放射性顯示 帶 。 記的優(yōu)點： （ 1）由于 析可以采用的限制性內切酶及選擇性堿基種類、數(shù)目很多，所以該技術所產生的標記數(shù)目 幾乎 是無限多的；（ 2）一次 時檢測 到 多個座位 ，且多態(tài) 性 極高；（ 3）分辨 率高 ，結果可 靠，重復性好。 典型的孟德爾遺傳，它所顯示的只是擴增片段的有無，是顯性標記。此外， 術需要酶切過程，對提取的 度和內切酶的質量要求嚴格。 單重復序列（ 叫微衛(wèi)星（ 是指以 1核苷酸為 基本單位的串聯(lián)重復序列，其長度大多在 100于 1991 年創(chuàng)立，是當今流行的分子標記技術之一。 泛分布于基因組的不同位置，不同遺傳材料重復次數(shù)的可變性，導致了 度的高度變異性，這一變異性正是 記產生的基礎。盡管微衛(wèi)星 布于整個基因中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 文獻綜述 7 組的不同 位置， 但其 兩端多是 保守的 單拷 貝序列， 因此可 以根 據兩端的 序列設 計一對特異引物，通過 術將其間的核心微衛(wèi)星 列擴增出來，利用電泳分析技術就可獲得其長度多態(tài)性，即 記。 記的主要特點有：（ 1）數(shù)量 豐富，廣泛分布于整個基因組；（ 2）具有較多的等位 性變異；（ 3）共顯性 標記，可 鑒 別出雜合子 和純合子 ；（ 4）實驗 重復性好，結果可靠。由于創(chuàng)建新的 記時需知道重復序列兩端的序列信息，因此其開發(fā)有一定困難，費用也較高。 復序列區(qū)間 標記技術 （ 采用 17基的重復錨定引物擴增重復序列之間的片段。 記使用比 記 更長的引物，克服了 記穩(wěn)定性和重復性差等缺點。 比，能檢出更多的多態(tài) 性，且一套 物可在多種作物中通用，提高了其利用率，因此在遺傳關系研究方面的應用前景更廣闊。 記雖然在引物開發(fā)階段需要投入大量人力物力，但引物開發(fā)一旦成功，只需利用商品化的 物進行 增，即可獲得豐富的 態(tài)性。 關序列擴增多態(tài)性（ 是一種較新的分子標記技術（ ， 2001）。該技術針對基因外顯子里 量豐富而啟動子和內含子里 量豐富的特點來設計引物進行擴增 ， 因不 同個體的內含子 和 啟 動 子 與 間 隔 區(qū) 長 度 不 等 而 產 生 多 態(tài) 性 。 其 原 理 是 利 用 獨 特 的 引 物 設 計 對放閱讀框架 ） 進行擴增。上游引物長 175端的前 10一段填充序列，緊接著是 們組成核心序列及 3端 3 個選擇堿基，對外顯子進行特異擴增。下游引物長 185端的前 11一段填充序列，緊接著是 們組成核心序列及 3端 3 個選擇堿基，對內含子區(qū)域進行特異擴增。與其他分子標記技術相比， 有簡便、穩(wěn)定、高共顯性，在基因組中分布均勻的特點。 作繁瑣，檢出的多態(tài)少； 法簡單、成本低，但重復性差、檢測位點不多； 為共顯性、重復性好，但引物開發(fā)成本高； 帶多，但程序復雜、成本高，而且用甲基化敏感的限制性內切酶時 ， 由于基因組 甲基化可導致 “假多態(tài)性 ”。 記技術克服了以上標記技術的缺點，是一個簡便、高效的標 記系統(tǒng) ，它 適用于在 不同作 物上 用于各種 目的的 研究 ，如遺傳 多樣性 研究（ ， 2003 年 ）、圖譜構建（林忠旭等， 2003 年 ）、基因標記與定位（潘俊松等， 2005 年 ）等。 （ 2003 年 ）對甜 瓜的 2 個變種 69 份代表性材料的遺傳多樣性進行中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 文獻綜述 8 記與形態(tài)學分析，結果表明，與形態(tài)變異及類型的進化歷史一致性方面， 記提供的信息比 良； 11 個 物組合獲得 88 條可重復的條帶，其中 64 條為多態(tài)性條帶，大小在 15453間；測序發(fā)現(xiàn)多個標記序列與已知的 度同源。林忠旭等（ 2004 年 ）對陸地棉、海島棉品種產生的 體多樣性進行 析，另外還對 11 份陸地棉材料的遺傳多樣性進行析，結果顯示了較高多態(tài)性標記比率，表明 一個評價遺傳多樣性的 有效工具。 林忠旭等（ 2003 年 ）用 記構建棉花分子遺傳連鎖圖，作圖群體為邯鄲 208 和 交產生的 129 個 體，篩選了多態(tài)性較好的 76 個引物組合進行群體檢測，共得到 285 條多態(tài)性帶，平均每個引物組合產生 多態(tài)性帶，最多的產生 13 條；對 285 個標記用 建連鎖群， 237 個標記進入到 39 個連鎖群中（ 總長 在整個連鎖群中，標記分布均勻，沒有聚焦現(xiàn)象。 潘俊松等（ 2005 年 ）利用 記構建了黃瓜的遺傳連鎖圖，并將始花 節(jié)位的基因定位在第 連鎖群上。以黃瓜自交系 交產生的 體為材料，選用了 64 個多態(tài)性 物組合，共得到 108 條多態(tài)性條帶，在 體中對這些多態(tài)性位點進行連鎖分析， 77 個標記進入 9 個連鎖群中，同時將始花節(jié)位的基因 定 位 在 第 連 鎖 群 上 ， 與 兩 側 標 記 距離分別為 10.3 柳 哲勝采用 和 術對甘薯抗莖線蟲病基因進行分子標記研究，用抗感基因池共篩選了 200 對 物，得到能在抗感基因池之 間擴增出多態(tài)性帶的引物組合 77 對。選取其中的 62 對引物用分離群體進行鑒定，共獲得 4 個與抗病基因連鎖的分子標記其中引物組合 到 3 個標記，分別命名為 抗莖線蟲基因的遺傳距離分別為 物組合 到了 1 個標記，命名為 抗莖線蟲基因的遺傳距離為 記技術發(fā)展至今，已經是十分成熟的標記技術。實踐證明，他們可以被應用于 許多研 究領 域中，是 可靠高 效的 分子標記 技術。 煙草 是一種重 要的模 式植物和經濟作物，但對其研究的 分子水平卻遠遠落后于小麥、水稻、大豆等作物。目前在煙草研究中應用的較多的分子標記是 這兩種標記 技術 卻有明顯的缺點。我們應該積極拓寬 子標記技術在煙草研究上的應用種類和深度，借鑒它們在其他作物上應用的成功經驗 ， 促進煙草研究的進步。 研究的目的意義及主要內容 的和意義 分子標 記輔助 選擇 是 通過分 析與目 標基 因 緊密連 鎖的分 子標 記 來判斷 目標基中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 文獻綜述 9 因是否存 在，